12 de Febrero AQBM

Dra. Paulina Ramos-Espinosa12 de Febrero de 2024

Análisis Químico Biológico y Molecular

bioseguridad-ii

dudas evaluación

Conoce a tu profesor

¿Qué veremos hoy?

• Doctorado en Ciencias biomédicas por parte de la UNAM (CdMx)
• Mi área de experiencia es en cultivo animal, ensayos citotóxicos, inmuno ensayos, daño al DNA y sus relación con enfermedades crónico degenerativas.

¿Quién es tu profesor?

Correo: paulinare@tec.mxRemind: AQBM-2024, Código: aqbm2Zoom: https://itesm.zoom.us/my/ramospaulinaPresencial: Agenda una cita. Lugar: 4to piso del edificio administrativo EIC-II.

1.1

Vías de comunicación con tu profesora...

Bitácora virtual.En equipos de 4. Fecha y nombre de los integrantes. Reportar lo observado en el laboratorio. Presentación de poster por equipo.Equipos: No más de 4 personas por equipo.

Evaluación

Temario

1. Bioseguridad (2 sesiones)2. Técnicas de laboratorio3. Introducción al cultivo celular4. Medios de cultivo5. Cinética celular6. Subcultivo/Conteo celular7. Criopreservación8. Aspectos éticos del cultivo celular.9. Genética (generalidades)10. PCR11. Técnicas de Biología Molecular

1. PROTECCIÓN PERSONAL2. EQUIPOS DE LABORATORIO3. PLANES DE CONTINGENCIA4. TRANSPORTE DE DESECHOS

¿ CÓMO ME VOY A PROTEGER?

PROTECCIÓN PERSONAL

BSL3

BSL2

BSL1

BSL4

Vestimenta de acuerdo a lo que vas a trabajar...

Código de vestimenta

Diseñadas para proteger al trabajador, la atmósfera del laboratorio y los materiales de trabajo de la exposición a las salpicaduras y los aerosoles infecciosos que pueden generarse al manipular material que contiene agentes infecciosos, como cultivos primarios, soluciones madre y muestras de diagnóstico.

1. Cámara de seguridad biológica (Campana de flujo laminar)

Equipo de seguridad

Los filtros HEPA retienen el 99,97% de las partículas de 0,3 mm de diámetro y el 99,99% de las partículas de tamaño mayor o menor; esto les permite retener eficazmente todos los agentes infecciosos conocidos y garantizar que de la cámara sólo sale aire exento de microorganismos.

Cábinas de seguridad

Personal protegido pero no la muestra

Clases o tipos de cámpanas de cultivo celular.Flujo laminar horizontalFlujo laminar vertical

Clase I:El aire de la sala entra por la abertura delantera a una velocidad mínima de 0,38m/s, pasa por encima de la superficie de trabajo y sale de la cámara por el conducto de extracción. El aire procedente de la cámara se evacua a través de un filtro HEPA. Algunas tienen extractor. La ventana también puede levantarse por completo para tener acceso a la superficie de trabajo para limpiarla o con otros fines.

Clases de cabinas de seguridad

Clase III: Proporciona mayor nivel de protección personal y se utiliza para trabajar con agentes del grupo de Riesgo 4. El aire de entrada es filtrado por HEPA y el aire de salida pasa por dos filtros HEPA.

Clase II: Hay 4 tipos (A1, A2, B1 y B2), difieren de las CSB de clase I en que sólo permiten que entre en contacto con la superficie de trabajo aire que ha pasado por un filtro HEPA. Sirven para trabajar con agentes infecciosos (2 y 3).

Infraestructura

Las incubadoras de CO2, poseen una atmósfera controlada la cual se logra mediante el uso de una bandeja de humidificación y el control de la presión de CO2 con un dispositivo de monitorización del CO2, que extrae el aire de la incubadora en una cámara de muestra, determina la concentración de CO2, e inyecta CO2 puro en la incubadora para compensar cualquier deficiencia.

Hornos vs incubadorasLas incubadoras tienen como objetivo proveer de temperatura, humedad y CO2 al cultivo (microbiológico o de cultivo celular).

Incubadora

Doble puerta

Tanque de CO2

incubadoras

Tanque de nitrógeno

Ultracongelador

Purificador de agua

Centrífugas

Pipeteador

Pipetas serológicas

Microscopio

Cajas de cultivo

Autoclave

Incubadora de CO2

Campana de flujo laminar

EQUIPO y material DE LABORATORIO

Reglas de seguridad

...¿Es suficiente con el equipo de protección?

En todo momento se usará batas o uniformes especiales para el laboratorio.Lavarse las manos antes y después de entrar al laboratorio.Utilizar ropa protectora.

+ dO'S AND DON'TS

Colocar en las puertas de los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2 o superior.

Bioseguridad: Etiquetado de reactivos

Rojo: representa un riesgo de incendio o de ser inflamable. 0= No arde;1 = Arde a los 93° C; 2 = En ignición debajo de los 93° C;3 = En ignición debajo de los 37° C;4 = En ignición debajo de los 25° C.

Amarillo: representa un riesgo reactivo.

Blanco: representa un riesgo específico que debe señalarse.

Azul: representa un riesgo para la salud humana.

National Fire Protection Association (NFPA) is an international nonprofit organization devoted to eliminating death, injury, property and economic loss due to fire, electrical and related hazards.​

Sabes leer las señales?

Bioseguridad: Etiquetas y señalética

Los pictogramas GHS son símbolos dentro de un diamante rojo diseñados para proporcionar información de peligros a los que manipulan sustancias químicas, de reconocimiento universal y a simple vista. Existen 3 tipos de peligros: a la salud, física y ambiental.

Pictogramas

Equipo de protección personal:

• Bata
• Cubrebocas
• Guantes
• Gafas

What if...?

EQUIPO EN EL LABORATORIO PARA EMERGENCIAS

malas prácticas de laboratorio

Recipientes

Patológicos

Cultivos y cepas (incluye recipientes)

Sangre

Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental-salud ambiental-residuos peligrosos biológico infecciosos-clasificación y especificación de manejo:

Tipo de residuo

1. Identificar y separar el tipo de residuo. 2. Separar de acuerdo al estado físico del residuo (Sólido o líquido). 3. Colocarlo en contenedores específicos. 4. Almacenarlos temporalmente. 5. Disposición final adecuada.

4.3. Desechos biológicos

Residuos biológicos

¿Dónde desecharías el material?

Waste disposal

Proceso que mata o remueve cualquier clase de microorganismos y esporas.

Cualquier agente que mata microorganismos.

Sustancia que inhibe el crecimiento y desarrollo de microorganismos sin matarlos. Comúnmente se aplican a superficies.

Esterilización

Desinfección

Biocida

Antiséptico

Agente químico o físico que mata microorganismos, pero no esporas.

Desinfección y esterilización

Peróxido de hidrógeno

Yodo

Formaldehido

Triclosan

Hipoclorito de sodio

Alcohol etílico 70%

Desinfección

Agentes físicos:Calor es el agente físico más común de limpieza de patógenos. a) Calor seco, no es corrosivo y se utiliza a temperaturas mayores a 160°C por 2 a 4 horas (ej. incineración)b) Calor húmedo. Ejemplo la autoclave, otro ejemplo es hervir, el cual no necesariamente mata los organismos pero se utiliza como un medio mínimo de desinfección. Agentes químicos.

Métodos de esterilización:

Laboratory biosafety describes the containment principles, technologies and practices thar are implemented to prevent the unintentional exposure to pathogens and toxins, or other accidental release (Biorisk management Laboratory biosecurity guidance, WHO, 2006).

Handling infectious material​Radiation material​Toxic compounds​High-risk equipment​

Dangerous chemicals and flammables

Biosafety

Who oversees that the services offered by a laboratory are safe and of high quality or that the requirements established in the regulations are met?

• REGLAMENTOS:
• Reglamento de la Ley de Bioseguridad de Organismos Genéticamente Modificados
• Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigación para la Salud
• Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Sanidad Internacional
• Reglamento de la Ley General para la Prevención y Gestión Integral de los Residuos
• Reglamento para el transporte terrestre de materiales y residuos peligrosos
• Reglamento para el Transporte Terrestre de Materiales y Residuos Peligrosos

All these norms and regulations guaranties laboratory quality, accuracy​, reliability.

Lineamientos para la gestión del riesgo biológico. INDRE SSA (2015)

Exposición/accidente biológico: Personas en entrenamiento que están expuestos a sangre o a cualquier otro fluido de personas bajo su cuidado odiagnóstico paraclínico.

Percutánea

Digestiva

Respiratoria

Cualquier microorganismo, incluyendo aquellos que se han modificado genéticamente, cultivos celulares y parásitos, que puede ser capaz de originar cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad en los seres humanos, animales o plantas. *Priones

Agente biológico

Se considera como un riesgo biológico a la combinación de la probabilidad de que ocurra un daño y la gravedad de ese daño, donde la fuente del daño es un agente biológico o una toxina.

4.1

Riesgo biológico

Grupo de riesgo 4: Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fácilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces.

Grupo de riesgo 3: Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces.

Grupo de riesgo 2: Agentes patógenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas probabilidades de entrañar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la población, el ganado o el medio ambiente.

Grupo de riesgo 1: Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los animales.

VIH

Mycobacterium tuberculosis

Vibrio cholerae

Bacillus subtilis

Grupo4

Grupo3

Grupo2

Grupo1

Fiebre amarilla

Staphylococcus aureus

Lactobacillus

Rotavirus

Virus del Ébola

Zika virus

Clostridium botulinum

Actividad: Clasifica los siguientes agentes en el nivel de riesgo.

Los laboratorios se designan como:

• Biosafety Level 1 (basic–BSL1),
• Biosafety Level 2 (basic-BSL2),
• Biosafety level 3 (containment-BLS3) y
• Biosafety Level 4 (maximum containment-BLS4).

Los niveles de bioseguridad estan basados en la construcción de los laboratorios, contención, equipo, práticas y procedimientos operacionales.

¿Cómo debemos protegernos?

¿Cómo deben ser manejados?

¿Dónde se trabajan estos agentes biológicos?

¿De qué depende el nivel de cada laboratorio?

1.Patogenicidad del organismo.2. Cómo se transmite y el huésped que necesita (inmunidad de la población, presencia de vectores y estándares de higiene). 3. Efectividad de medidas de prevención locales (vacunas y/o profilaxis, medidas sanitarias, control de reservorios) 4. Disponibilidad de tratamiento.(Vacunas y agentes terapeuticos).

nIVELES DE BIOSEGURIDAD

Precauciones: No se debe usar la bata fuera del lab, considerar aerosoles.

Se debe colocar en la entrada del laboratorio.

Equipo de protección: extintor, lava-ojos, lavabo de manos, lugar de desechos.

Precauciones: No comer, no beber, incluso no maquillarse, tener lugar limpio y ordenado.

Protección personal: Bata, zapato cerrado, guantes, googles o carilla.

No se trabaja solo. Cambio completo de ropa.Acceso controlado.Sistema de aire controlado.Descontaminación de flujos y material.

Protección personal: Cofia, bata que sin botones delanteros, cubre-zapatos.Doble puerta