SMA-SLU

INTRODUCCIÓN

"Los seres humanos realizamos una amplia gama de movimientos sin ser plenamente conscientes de cómo los ejecutamos. Sin embargo, para 1 de cada 40 personas de la población, es todo un milagro"

Tutora: E.Barragan/N.Sancho/O.Tarabal

05/2023

Autor: Isaac Salto Aguado

Proyecto de investigación

SMA, ESTUDIO DE SUS MECANISMOS PATOGÉNICOS Y DE SU TRATAMIENTO CON Nusinersen (Spinraza®)

Materiales y métodos

Motivación y contexto

Agradecimientos

Conclusiones

Resultados

Planteamiento

Hipótesis

S. Terapéutica

SMA

La motoneurona

Objetivos

Introducción

índice

MOTIVACIÓN Y contextO

+ Introducción

MOTIVACIÓN Y CONTEXTO

• Ácidos nucléicos / Biologia molecular
• Procesos y técnicas científicas
• Eficacia y comportamiento (SMA, Nusinersen y MNs)

Motivación y contexto

La ocasión para...

Investigación biomédica (TG) Grupo de neuropatologia experimental (IRBLleida) Atrofia muscular espinal (SMA) :

OBJETIVOS

Nusinersen SPINRAZA

Verificar la eficacia

Mecanismos patogénicos de la enfermedad

Demostrar empíricamente

Desarollo de un proyecto científico

Participar

De la patologia

Profundizar mis conocimientos

• De la estrategia terapéutica propuesta

II. Desarrollo

Específicos

Generales

Objetivos

Se concentran en:

I. Estudio de las bases celulares y biomoleculares

• Gama de trastornos neuromusculares (SMA)

marco teórico

Tipo de céulula

Localización

Síntomas por lesión

Objetivo

Neurotransmisor

MARCO TEÓRICO

+ Bases neuronales

• MNs-α

Las Motoneuronas (MNs)

MN visceral especialNM visceral general MN somática

Genéticamente

• Brazo largo del cromosoma 5 (5q13.2) : SMN1 et SMN2.
• Deleción homocigota o la mutación del gen
• Febleza miembros inferiores y distales.
• Disfunción de la musculatura intercostal > complicaciones respiratorias
• Cognición no se ve nunca afectada

MARCO TEÓRICO

• Guido Werdnig.

• Grupo de patologias autosómicas y recesivas principalemente caracterizadas por la degeneración progresiva de las α-MNs

Descripción general

Atrofia muscular espinal (SMA)

Genéticamente

• Brazo largo del cromosoma 5 (5q13.2) : SMN1 et SMN2.
• Deleción homocigota o la mutación del gen
• Febleza miembros inferiores y distales.
• Disfunción de la musculatura intercostal > complicaciones respiratorias
• Cognición no se ve nunca afectada

MARCO TEÓRICO

• Guido Werdnig.

• Grupo de patologias autosómicas y recesivas principalemente caracterizadas por la degeneración progressiva de las α-MNs

Descripción general

Atrofia muscular espinal (SMA)

• Cadenas cortas de nucleótidos
• ARNm específicos
• Complementariado de bases

• FDA, Diciembre 2016.
• Solución inyectable de 12 mg / 5 ml
• ASO
• Precisamente, Nusinersen actúa en el ESS del exón 7 del pre-ARNm del gen SMN2 > producción completa de SMN

maco teórico

+ ST no específicas

La estrategia terapéutica

marco práctico

Hipótesis

« Tal vez la estrategia terapéutica Nusinersen SPINRAZA es eficaz lpara el tratamiento de la neuropatologia de la atrofia muscular espinal »

FVB.Cg-Grm7Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb/J

• Manutención de la colonia (WT, KO, tratados)
• Extracción de ADN /genotipaje /niveles proteicos de SMN
• Inyección del fármaco por via intracerebroventricular.
• Sacrificio y muestras.
• Técnica de immunohistoquímica / microscopia bifocal
• Determinar la efectividad de Nusinersen SPINRAZA.

Planteamiento

marco práctico

Tube Test (TT)

• Posición prono
• Tubo de centrífuga de 50 ml de capacidad,
• 3 repeticiones
• 2 parámetros: Tiempo TT/Calificación TT

Tests de capacidad motora

Righting Reflex (RR)

• Posición supina (no natural)
• Tiempo máximo de 30 segundos
• 3 repeticiones
• Éxito> 4 extremidades listas para andar

marco práctico

• Presencia o absencia de transgenes
• Identificar nucleótidos o bases específicos
• Marcaje > genotipaje
• REDExtract-N-Amp de Sigma-Aldrich (St. Louis, États-Unis)

Base

Genotipaje (PCR)

Or...

• 3 primers fueron necesarios
• WT, una franja de 800 pares de bases (pb) ,
• KO 500 pb et en los heterocigotos, les dos franjas eran visibles.

marco práctico

ME et TA

Perfusión, disección y extirpación

Disección del ratón

• Proceso con la incubación de 2 anticuerpos
• 2a con fluorocromo
• Bloqueador NHS
• Lavados y humectación

marco práctico

+Annexo I

CGRP 488 (rojo) MMP9 Cy3 (verde) HA Cy5 (rojo lejano) Nissl bleu (azul)

Immunohistoquímica

Lista de anticuerpos

• A partir de tejidos obtenidos como resultado de una disección.
• Detección de proteínas por electroforesis en gel (tamaño)
• Transferidas a una membrana absorbente,
• Con anticuerpos específicos de la proteína problema.
• Métodos de quimioluminiscencia.

Western Blot (WB)

Resultados y discusión

CHAPITRE IV

ALTERACIONES ULTRASTUCTURALES EN EL SISTEMA NEUROMUSCULAR: EFECTOS EN LAS NMJs

CHAPITRE III

ALTERACIONES ULTRASTUCTURALES EN EL SISTEMA NEUROMUSCULAR: AFECTACIONES EN LA MÉDULA

CHAPITRE II

GENÉTICA DE LA ENFERMEDAD Y CAMBIOS EN LOS NIVELOS EXPRESOS DE PROTEÏNA SMN

CHAPITRE I

Résultats et discussion

Fenotipo, supervivencia y alteraciones de la capacidad motors de los modelos de sma

resultados y discusión

resultados y discusión

Berciano, M.T, et al., 2020

resultados y discusión

conclusiones

CONCLUSIONeS

CONCLUSIONES

Área, porcentaje e intensidad> cambios morfológicos

NMJ

Tejido nervioso > égale

Reducción Pt SMN

KO et WT = tratados

Dismunución MNs-α

Nusinersen > eficaz

Hipótesis corroborada

AGRADECIMIENTOS

Invdra. Alaó Gatius Puchercós

Dr. Olga Tarabal Mostazo

Agradecimientos

AGRADECIMIENTOS

Turno de preguntas

¡Muchasgracias!