SMA-SLU
Isaac Saltó Aguado
Created on May 24, 2023
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Transcript
INTRODUCCIÓN
"Los seres humanos realizamos una amplia gama de movimientos sin ser plenamente conscientes de cómo los ejecutamos. Sin embargo, para 1 de cada 40 personas de la población, es todo un milagro"
Tutora: E.Barragan/N.Sancho/O.Tarabal
05/2023
Autor: Isaac Salto Aguado
Proyecto de investigación
SMA, ESTUDIO DE SUS MECANISMOS PATOGÉNICOS Y DE SU TRATAMIENTO CON Nusinersen (Spinraza®)
Materiales y métodos
Motivación y contexto
Agradecimientos
Conclusiones
Resultados
Planteamiento
Hipótesis
S. Terapéutica
SMA
La motoneurona
Objetivos
Introducción
índice
MOTIVACIÓN Y contextO
+ Introducción
MOTIVACIÓN Y CONTEXTO
- Ácidos nucléicos / Biologia molecular
- Procesos y técnicas científicas
- Eficacia y comportamiento (SMA, Nusinersen y MNs)
Motivación y contexto
La ocasión para...
Investigación biomédica (TG)Grupo de neuropatologia experimental (IRBLleida)Atrofia muscular espinal (SMA) :
OBJETIVOS
Nusinersen SPINRAZA
Verificar la eficacia
Mecanismos patogénicos de la enfermedad
Demostrar empíricamente
Desarollo de un proyecto científico
Participar
De la patologia
Profundizar mis conocimientos
- De la estrategia terapéutica propuesta
II. Desarrollo
Específicos
Generales
Objetivos
Se concentran en:
I. Estudio de las bases celulares y biomoleculares
- Gama de trastornos neuromusculares (SMA)
marco teórico
Tipo de céulula
Localización
Síntomas por lesión
Objetivo
Neurotransmisor
MARCO TEÓRICO
+ Bases neuronales
- MNs-α
Las Motoneuronas (MNs)
MN visceral especialNM visceral generalMN somática
Genéticamente
- Brazo largo del cromosoma 5 (5q13.2) : SMN1 et SMN2.
- Deleción homocigota o la mutación del gen
- Febleza miembros inferiores y distales.
- Disfunción de la musculatura intercostal > complicaciones respiratorias
- Cognición no se ve nunca afectada
MARCO TEÓRICO
- Guido Werdnig.
- Grupo de patologias autosómicas y recesivas principalemente caracterizadas por la degeneración progresiva de las α-MNs
Descripción general
Atrofia muscular espinal (SMA)
Genéticamente
- Brazo largo del cromosoma 5 (5q13.2) : SMN1 et SMN2.
- Deleción homocigota o la mutación del gen
- Febleza miembros inferiores y distales.
- Disfunción de la musculatura intercostal > complicaciones respiratorias
- Cognición no se ve nunca afectada
MARCO TEÓRICO
- Guido Werdnig.
- Grupo de patologias autosómicas y recesivas principalemente caracterizadas por la degeneración progressiva de las α-MNs
Descripción general
Atrofia muscular espinal (SMA)
- Cadenas cortas de nucleótidos
- ARNm específicos
- Complementariado de bases
- FDA, Diciembre 2016.
- Solución inyectable de 12 mg / 5 ml
- ASO
- Precisamente, Nusinersen actúa en el ESS del exón 7 del pre-ARNm del gen SMN2 > producción completa de SMN
maco teórico
+ ST no específicas
La estrategia terapéutica
marco práctico
Hipótesis
« Tal vez la estrategia terapéutica Nusinersen SPINRAZA es eficaz lpara el tratamiento de la neuropatologia de la atrofia muscular espinal »
FVB.Cg-Grm7Tg(SMN2)89Ahmb Smn1tm1Msd Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb/J
- Manutención de la colonia (WT, KO, tratados)
- Extracción de ADN /genotipaje /niveles proteicos de SMN
- Inyección del fármaco por via intracerebroventricular.
- Sacrificio y muestras.
- Técnica de immunohistoquímica / microscopia bifocal
- Determinar la efectividad de Nusinersen SPINRAZA.
Planteamiento
marco práctico
Tube Test (TT)
- Posición prono
- Tubo de centrífuga de 50 ml de capacidad,
- 3 repeticiones
- 2 parámetros: Tiempo TT/Calificación TT
Tests de capacidad motora
Righting Reflex (RR)
- Posición supina (no natural)
- Tiempo máximo de 30 segundos
- 3 repeticiones
- Éxito> 4 extremidades listas para andar
marco práctico
- Presencia o absencia de transgenes
- Identificar nucleótidos o bases específicos
- Marcaje > genotipaje
- REDExtract-N-Amp de Sigma-Aldrich (St. Louis, États-Unis)
Base
Genotipaje (PCR)
Or...
- 3 primers fueron necesarios
- WT, una franja de 800 pares de bases (pb) ,
- KO 500 pb et en los heterocigotos, les dos franjas eran visibles.
marco práctico
ME et TA
Perfusión, disección y extirpación
Disección del ratón
- Proceso con la incubación de 2 anticuerpos
- 2a con fluorocromo
- Bloqueador NHS
- Lavados y humectación
marco práctico
+Annexo I
CGRP 488 (rojo) MMP9 Cy3 (verde) HA Cy5 (rojo lejano) Nissl bleu (azul)
Immunohistoquímica
Lista de anticuerpos
- A partir de tejidos obtenidos como resultado de una disección.
- Detección de proteínas por electroforesis en gel (tamaño)
- Transferidas a una membrana absorbente,
- Con anticuerpos específicos de la proteína problema.
- Métodos de quimioluminiscencia.
Western Blot (WB)
Resultados y discusión
CHAPITRE IV
ALTERACIONES ULTRASTUCTURALES EN EL SISTEMA NEUROMUSCULAR: EFECTOS EN LAS NMJs
CHAPITRE III
ALTERACIONES ULTRASTUCTURALES EN EL SISTEMA NEUROMUSCULAR: AFECTACIONES EN LA MÉDULA
CHAPITRE II
GENÉTICA DE LA ENFERMEDAD Y CAMBIOS EN LOS NIVELOS EXPRESOS DE PROTEÏNA SMN
CHAPITRE I
Résultats et discussion
Fenotipo, supervivencia y alteraciones de la capacidad motors de los modelos de sma
resultados y discusión
resultados y discusión
Berciano, M.T, et al., 2020
resultados y discusión
conclusiones
CONCLUSIONeS
CONCLUSIONES
Área, porcentaje e intensidad> cambios morfológicos
NMJ
Tejido nervioso > égale
Reducción Pt SMN
KO et WT = tratados
Dismunución MNs-α
Nusinersen > eficaz
Hipótesis corroborada
AGRADECIMIENTOS
Invdra. Alaó Gatius Puchercós
Dr. Olga Tarabal Mostazo
Agradecimientos
AGRADECIMIENTOS