1. Siglare una provetta da 1,5 ml con il codice identificativo
2. Aggiungere 500 ul di tampone di estrazione: Soluzione A (Saccarosio, Tris-HCI 1M pH8,EDTA 0,5M pH8, Triton X-100) + proteinasi K.
3. Strofinare un cotton fioc sulle gengive e su entrambe le guance (la quantità di cellule che si ottiene è importante per una buona riuscita del test).
4. Mettere il cotton fioc all'interno della provetta contenente la Soluzione A
5. Tagliare il bastoncino lasciando nella provetta solo la parte assorbente utilizzata
5. Incubare a 50 °C in un termostato per 10 minuti.
6. Togliere la parte assorbente del cotton fioc dalla provetta.7. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm, per far depositare i detriti cellulari.
8. Trasferire 200 ul di surnatante in una nuova provetta da 1,5 ml facendo attenzione a non prelevare il pellet formatosi sul fondo.
9. Aggiungere 20 ul di NaCI 5M e picchiettare con il dito. 10. Aggiungere 450 ul di EtOH assoluto (100%).
11. Miscelare invertendo le provetta (almeno 5x).12. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm. 13.Eliminare il surnatante facendo attenzione a non perdere il pellet.
14. Lavare il pellet addizionando 200 ul di EtOH 70%.15. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm ed eliminare tutto il surnatante.
16. Lasciare asciugare il pellet nel termostato a 60°C lasciando la provetta aperta finché tutto l'etanolo è evaporato.17. Quando il pellet è secco, risospenderlo in 50 ul di acqua e incubare a 60°C per 2 min.
Estrazione del dna
Matilde MOTTURA
Created on April 24, 2026
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Transcript
Estrazione del dna
Da cellule di sfaldamento della mucosa boccale
START
Strumenti e materiali necessari
1. Siglare una provetta da 1,5 ml con il codice identificativo
2. Aggiungere 500 ul di tampone di estrazione: Soluzione A (Saccarosio, Tris-HCI 1M pH8,EDTA 0,5M pH8, Triton X-100) + proteinasi K.
3. Strofinare un cotton fioc sulle gengive e su entrambe le guance (la quantità di cellule che si ottiene è importante per una buona riuscita del test).
4. Mettere il cotton fioc all'interno della provetta contenente la Soluzione A
5. Tagliare il bastoncino lasciando nella provetta solo la parte assorbente utilizzata
5. Incubare a 50 °C in un termostato per 10 minuti.
6. Togliere la parte assorbente del cotton fioc dalla provetta.7. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm, per far depositare i detriti cellulari.
8. Trasferire 200 ul di surnatante in una nuova provetta da 1,5 ml facendo attenzione a non prelevare il pellet formatosi sul fondo.
9. Aggiungere 20 ul di NaCI 5M e picchiettare con il dito. 10. Aggiungere 450 ul di EtOH assoluto (100%).
11. Miscelare invertendo le provetta (almeno 5x).12. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm. 13.Eliminare il surnatante facendo attenzione a non perdere il pellet.
14. Lavare il pellet addizionando 200 ul di EtOH 70%.15. Centrifugare per 7 minuti a 13000 rpm ed eliminare tutto il surnatante.
16. Lasciare asciugare il pellet nel termostato a 60°C lasciando la provetta aperta finché tutto l'etanolo è evaporato.17. Quando il pellet è secco, risospenderlo in 50 ul di acqua e incubare a 60°C per 2 min.
ESTRAZIONE DEL DNA COMPLETATA!