https://dgxy.link/TSPET3C4TP1
Etude de la respiration mitochondriale par oxymétrie
avec un dispositif EXAO*
Contexte
Au sein des cellules, les mitochondries sont les organites spécialisés dans la respiration.
On cherche à déterminer le substrat qui est utilisé lors de la respiration dans les mitochondries.
Consignes
Partie A : Appropriation du contexte et activité pratique (durée recommandée : 30 minutes).
La stratégie adoptée consiste à tester, à l'aide d'un dispositif EXAO, les molécules carbonnées présentes au contact des mitochondries afin de déterminer laquelle (ou lesquelles ?) est (sont) utilisée(s) lors de la respiration.
Appeler l’examinateur pour vérifier les résultats de la mise en œuvre du protocole.
Partie B : Présentation et interprétation des résultats, et conclusion (durée recommandée : 30 min)
Ressources et protocoles
Le rôle des mitochondries dans la respiration cellulaire.
Matériel à disposition
Protocoles pour faire une mesure
Le rôle des mitochondries dans la respiration cellulaire.
Mesure de la concentration en dioxygène dans des suspensions de levures (Saccharomyces cerevisiae). Les levures de la souche rho+ possèdent des mitochondries normales tandis que celles de la souche rho- possèdent des mitochondries atrophiées, donc déficientes, à cause d'une mutation. On mesure à l'aide d'un dispositif ExAO la concentration en dioxygène avant et après l'injection de glucose en solution dans un milieu contenant chacun une des deux souches de levures.
Une autre mesure est également réalisée en l'absence de levures.
. La réaction globale de la respiration cellulaire : Glucose + 6 O2 ----> 6 CO2 + 6 H20 + énergie Dans le cytoplasme des cellules eucaryotes, des réactions d'oxydoréductions grâce à des enzymes, permettent d'obtenir d'autres molécules carbonnées que le glucose : le pyryvate (issu de la glycolyse), le lactate issu de la fermentation lactique (cas des cellules musculaires humaines) , l' éthanol issu de la fermentation alcoolique (cas des levures)
Matériel à disposition :
- Console d'EXAO Foxy, sonde oxymètrique et bioréacteur avec agitateur intégré.
- ordinateur équipé du logiciel "atelier scientifique "
- Seringues de 1ml et de 10 ou 20ml
- solution d' extrait de mitochondries.
- solutions de glucose (G), Lactate (L), Pyruvate (P) et Ethanol (E)
- pissette d'eau distillée et bac récupérateur des rinçages à l'eau distillée.
Préparer l'EXAO et le logiciel
Protocole
Lien vers le document de secours
Introduire le mot de passe
Juste pour ton information
Les mitochondries ont été séparées et extraites des autres constituants cellulaires et du cytoplasme par le principe de l'ultracentrifugation différentielle.
Préparer le matériel
Préparer le logiciel
Points de vigilence avant de quitter cette fenêtre : Ai-je bien cliquer sur "O2 eau" dans le logiciel pour que la sonde enregistre bien une concentration de O2 dans un liquide ?
Suivez rigoureusement les étapes de ce protocole : 1.Prélever à l'aide d’une seringue 10 mL de solution d'extrait de mitochondries et les verser dans la cuve au centre du bioréacteur.
2.Introduire le barreau aimanté et lancer une agitation très modérée de la solution. 3. Fermer le couvercle et introduire la sonde oxymétrique (retirer sa protection jaune avant ...) en prenant soin que son extrémité soit bien immergée et qu'elle ne perturbe pas l'agitation. 4. Lancer une prise de mesure (voir "Préparer l'Exao et le logiciel") afin de vérifier que la concentration mesurée par la sonde se stabilise (1 minute environ) et arrêter l'enregistrement afin de partir sur une mesure stabilisée.
5. Prélever pendant ce temps 500 µL de solution du substrat à tester à l'aide de la seringue de 1 ml. 6. Lancer l'enregistrement et, après 1 min, injecter la solution dans la cuve du bioréacteur en prenant soin de ne pas introduire de bulle d'air dans la solution (une injection à la surface du liquide est conseillée). 7. Retirez la sonde et rincez-la à l'eau distillée . Remettre sa protection et la replacer sur son portoir. 8. Rincer soigneusement la cuve, l’aimant et le couvercle du bioréacteur. 9. Répétez ces opérations pour chaque substrat testé. Pour conserver la courbe précédente, il suffira de cliquer sur Acquisition (feu vert) et le logiciel vous proposera une nouvelle manipulation (à renommer judicieusement).
La respiration mitochondriale.
M.R.
Created on January 15, 2026
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Transcript
https://dgxy.link/TSPET3C4TP1
Etude de la respiration mitochondriale par oxymétrie
avec un dispositif EXAO*
Contexte
Au sein des cellules, les mitochondries sont les organites spécialisés dans la respiration.
On cherche à déterminer le substrat qui est utilisé lors de la respiration dans les mitochondries.
Consignes
Partie A : Appropriation du contexte et activité pratique (durée recommandée : 30 minutes).
La stratégie adoptée consiste à tester, à l'aide d'un dispositif EXAO, les molécules carbonnées présentes au contact des mitochondries afin de déterminer laquelle (ou lesquelles ?) est (sont) utilisée(s) lors de la respiration.
Appeler l’examinateur pour vérifier les résultats de la mise en œuvre du protocole.
Partie B : Présentation et interprétation des résultats, et conclusion (durée recommandée : 30 min)
Ressources et protocoles
Le rôle des mitochondries dans la respiration cellulaire.
Matériel à disposition
Protocoles pour faire une mesure
Le rôle des mitochondries dans la respiration cellulaire.
Mesure de la concentration en dioxygène dans des suspensions de levures (Saccharomyces cerevisiae). Les levures de la souche rho+ possèdent des mitochondries normales tandis que celles de la souche rho- possèdent des mitochondries atrophiées, donc déficientes, à cause d'une mutation. On mesure à l'aide d'un dispositif ExAO la concentration en dioxygène avant et après l'injection de glucose en solution dans un milieu contenant chacun une des deux souches de levures. Une autre mesure est également réalisée en l'absence de levures.
. La réaction globale de la respiration cellulaire : Glucose + 6 O2 ----> 6 CO2 + 6 H20 + énergie Dans le cytoplasme des cellules eucaryotes, des réactions d'oxydoréductions grâce à des enzymes, permettent d'obtenir d'autres molécules carbonnées que le glucose : le pyryvate (issu de la glycolyse), le lactate issu de la fermentation lactique (cas des cellules musculaires humaines) , l' éthanol issu de la fermentation alcoolique (cas des levures)
Matériel à disposition :
Préparer l'EXAO et le logiciel
Protocole
Lien vers le document de secours
Introduire le mot de passe
Juste pour ton information
Les mitochondries ont été séparées et extraites des autres constituants cellulaires et du cytoplasme par le principe de l'ultracentrifugation différentielle.
Préparer le matériel
Préparer le logiciel
Points de vigilence avant de quitter cette fenêtre : Ai-je bien cliquer sur "O2 eau" dans le logiciel pour que la sonde enregistre bien une concentration de O2 dans un liquide ?
Suivez rigoureusement les étapes de ce protocole : 1.Prélever à l'aide d’une seringue 10 mL de solution d'extrait de mitochondries et les verser dans la cuve au centre du bioréacteur. 2.Introduire le barreau aimanté et lancer une agitation très modérée de la solution. 3. Fermer le couvercle et introduire la sonde oxymétrique (retirer sa protection jaune avant ...) en prenant soin que son extrémité soit bien immergée et qu'elle ne perturbe pas l'agitation. 4. Lancer une prise de mesure (voir "Préparer l'Exao et le logiciel") afin de vérifier que la concentration mesurée par la sonde se stabilise (1 minute environ) et arrêter l'enregistrement afin de partir sur une mesure stabilisée. 5. Prélever pendant ce temps 500 µL de solution du substrat à tester à l'aide de la seringue de 1 ml. 6. Lancer l'enregistrement et, après 1 min, injecter la solution dans la cuve du bioréacteur en prenant soin de ne pas introduire de bulle d'air dans la solution (une injection à la surface du liquide est conseillée). 7. Retirez la sonde et rincez-la à l'eau distillée . Remettre sa protection et la replacer sur son portoir. 8. Rincer soigneusement la cuve, l’aimant et le couvercle du bioréacteur. 9. Répétez ces opérations pour chaque substrat testé. Pour conserver la courbe précédente, il suffira de cliquer sur Acquisition (feu vert) et le logiciel vous proposera une nouvelle manipulation (à renommer judicieusement).