Colonna Cromatografica
Sicurezza
Impaccamento colonna
+info
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Calcoli iniziali
Separazione in colonna
+info
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Preparazione del campione
Analisi frazioni separate
+info
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Analisi campione iniziale
Conclusioni
+info
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Prima di separare il campione in colonna effettuiamo delle analisi
TLC: Utile per verificare prima quali saranno le frazioni che troveremo in colonna Spettro: Sarà fondamentale per il confronto con gli spettri delle frazioni separate
Preparazione del campione
Preparazione del campione
Prendere gli spinaci, mescolarli con 50mL l'etanolo e lasciarli decantare una decina di minuti. Strizzare per eliminare il solvente in eccesso. Mettere gli spinaci strizzati con 50mL di etanolo e 70mL di etere di petrolio, filtrare in imbuto separatore. Ripetere con 50mL di etanolo e 100mL di etere di petrolio. Nota bene: la fase da conservare è quella superiore e la seconda fase va effettuata sulla fase alcolica.
Aggiungere 50mL di acqua e agitare l'imbuto, aggiungerne altri 50mL mesolando bene. Lasciare che le due fasi si dividano e separare. Versare la fase eterea in una beuta e aggiungere un cucchiaio di Na2S2O4 e lasciare riposare al buio 30 minuti. Successivamente lasciare concentrare tramite distillazione
Separazione in colonna
Per separare le diverse sostanze in soluzione è necessario avere eluenti diversi. Eluente 1 (90% etere di petrolio, 10% acetone) Eluente 2 (50% etere di petrolio e acetone) Eluente 3 (etanolo). Utilizzare un eluente diverso per separare ogni frazione, evitare sempre che la colonna vada a secco.
Adattare la metodica alle strumentazioni disponibili
La metodica richiedeva una colonna alta 30cm e con un diametro interno di 1,5cm, prima di iniziare l'analisi si deve verificare se si hanno questi requisiti ed, eventualmente, adattarsi.
Separare i vari componenti organici all'interno degli spinaci tramite cromatografia LC (liquid cromatography)
Scopo
La cromatografia funziona grazie all'affinità dei composti da separare con la fase solida e liquida
Principio teorico
Impaccamento colonna
La prima cosa che si deve fare è preparare la fase stazionaria che è una miscela di ossido di magnesio e celite 2:1, questo mix va bagnato con eluente 1, (90% etere di petrolio e 10% etanolo) e lasciato riposare finchè il pelo dell'acqua non sia trasparente. Poi riempire la colonna prestando attenzione a non generare dei punti vuoti.
Siamo riusciti a separare i componenti, non con una precisione molto elevata, ma quantomeno il carotene si è diviso bene. Bella esperienza comunque.
Frazione 2
Frazione 1
Frazione 3
Frazione 2
Frazione 5
Frazione 4
Lunico spettro venuto davvero bene è quello del carotene, della frazione 3 e 5 i picchi principali si vedono, ma gli altri sono quasi assenti
Colonna Cromatografica
DAVIDE BARUZZI
Created on November 2, 2025
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Prima di separare il campione in colonna effettuiamo delle analisi
TLC: Utile per verificare prima quali saranno le frazioni che troveremo in colonna Spettro: Sarà fondamentale per il confronto con gli spettri delle frazioni separate
Preparazione del campione
Preparazione del campione
Prendere gli spinaci, mescolarli con 50mL l'etanolo e lasciarli decantare una decina di minuti. Strizzare per eliminare il solvente in eccesso. Mettere gli spinaci strizzati con 50mL di etanolo e 70mL di etere di petrolio, filtrare in imbuto separatore. Ripetere con 50mL di etanolo e 100mL di etere di petrolio. Nota bene: la fase da conservare è quella superiore e la seconda fase va effettuata sulla fase alcolica.
Aggiungere 50mL di acqua e agitare l'imbuto, aggiungerne altri 50mL mesolando bene. Lasciare che le due fasi si dividano e separare. Versare la fase eterea in una beuta e aggiungere un cucchiaio di Na2S2O4 e lasciare riposare al buio 30 minuti. Successivamente lasciare concentrare tramite distillazione
Separazione in colonna
Per separare le diverse sostanze in soluzione è necessario avere eluenti diversi. Eluente 1 (90% etere di petrolio, 10% acetone) Eluente 2 (50% etere di petrolio e acetone) Eluente 3 (etanolo). Utilizzare un eluente diverso per separare ogni frazione, evitare sempre che la colonna vada a secco.
Adattare la metodica alle strumentazioni disponibili
La metodica richiedeva una colonna alta 30cm e con un diametro interno di 1,5cm, prima di iniziare l'analisi si deve verificare se si hanno questi requisiti ed, eventualmente, adattarsi.
Separare i vari componenti organici all'interno degli spinaci tramite cromatografia LC (liquid cromatography)
Scopo
La cromatografia funziona grazie all'affinità dei composti da separare con la fase solida e liquida
Principio teorico
Impaccamento colonna
La prima cosa che si deve fare è preparare la fase stazionaria che è una miscela di ossido di magnesio e celite 2:1, questo mix va bagnato con eluente 1, (90% etere di petrolio e 10% etanolo) e lasciato riposare finchè il pelo dell'acqua non sia trasparente. Poi riempire la colonna prestando attenzione a non generare dei punti vuoti.
Siamo riusciti a separare i componenti, non con una precisione molto elevata, ma quantomeno il carotene si è diviso bene. Bella esperienza comunque.
Frazione 2
Frazione 1
Frazione 3
Frazione 2
Frazione 5
Frazione 4
Lunico spettro venuto davvero bene è quello del carotene, della frazione 3 e 5 i picchi principali si vedono, ma gli altri sono quasi assenti