Microbial Rhamnolipid Production — Pseudomonas aeruginosa BM02

Brayan Alejandro Saldaña ZuñigaCarlos Javier Simental Godoy Luis Enrique Ramírez Silva

Microbial Rhamnolipid Production — Pseudomonas aeruginosa BM02

Upstream

PROCESS

Esquema interactivo del proceso de elaboración del inóculo y producción en matraz.

1° SELECCIÓN DE CEPA

4° CULTIVO DE MATRAZ

2° PREPARACIÓN DEL INÓCULO

5° MONITOREO Y MUESTREO

6° EXTRACCIÓN DEL BIOSURFACTANTE

3° MEDIO Y CONDICIONES

7° ESCALAMIENTO

Cerqueira dos Santos, S., et al. (2024). Production and characterization of rhamnolipids by Pseudomonas aeruginosa ... Scientific Reports, 14, 4629. https://doi.org/10.1038/s41598-024-54828-w

Hacia biorreactor

Mantener proporción de inóculo 5 % v/v Control automático: pH, temperatura, aireación Monitorear espuma (usar antiespumante) Evaluar modo batch → fed-batch

Método de recuperación

• Ajustar sobrenadante a pH 2
• Reposar 24 h a 4 °C
• Centrifugar y recoger precipitado
• Extraer con cloroformo:etanol (2:1
• Evaporar solvente
• Pesar rhamnolípidos (mg/mL)

Seguimiento de crecimiento y producción

- OD600 cada 24 h - Prueba de emulsificación (E24) - Muestreo estéril diario - Centrifugación: 4 000 rpm · 20 min · 4 °C

Medio Mineral Salino (MSM):K₂HPO₄ 4.0 g/L Na₂HPO₄ 1.5 g/L NaNO₃ 1.0 g/L MgSO₄·7H₂O 0.2 g/L CaCl₂·2H₂O 0.02 g/L FeCl₃·6H₂O 0.02 g/L Fuente de carbono: Glicerol 1 % v/vCondiciones óptimas:25 °C pH 5 180 rpm 5 días

Medio de cultivo (MSM) y parámetroS

Etapa de cultivo

Matraz Erlenmeyer 250 mL Volumen de trabajo: 100 mL MSM Tapón permeable a gas Agitación: 180 rpm Incubación: 5 días a 25 °C

Selección y origen de cepa

Cepa utilizada: Pseudomonas aeruginosa BM02 Aislada en: suelo de mina de bauxita (Amazonas, Brasil) Conservación: glicerol a −20 °C Confirmación taxonómica: 16S rRNA, secuencia depositada en GenBank (OP410927.1)

Elaboración del inóculo

- Datos clave del artículo:Recuperación de cepa desde criovialPreinóculo en caldo (fase log) Ajuste de densidad celular Inoculación al matraz Densidad final usada: 1.5×10⁸ UFC·mL⁻¹ Volumen de inóculo: 5 mL Inóculo en cultivo final: 5 % v/v

• Descongelar criovial y estriar en agar nutritivo.
• Incubar a 25–30 °C: 18–24 h.
• Tomar colonia aislada y sembrar en 10 mL de caldo.
• Incubar hasta OD600 ≈ 0.6–0.8.
• Ajustar densidad a 1.5×10⁸ UFC/mL (turbidímetro o curva OD).
• Transferir 5 mL de este cultivo a 100 mL de medio MSM estéril.