Lado conceptual

Lado conceptual

Lado metodológico

Questão-problema

Como extrair e visualizar macroscopicamente o DNA de células eucarióticas vegetais?

Princípios:

Resultados:

• O DNA para o armazenamento, transmissão e expressão da informação genética;
• O DNA, o qual é o ácido nucleico com que vamos trabalhar, encontra-se concentrado no núcleo das células eucarióticas;
• A molécula de DNA é formado por duas cadeias polinucleotídicas enroladas em hélice;
• O DNA está associado a uma quantidade igual de proteínas básicas (histonas), e proteínas não histónicas, formando a cromatina;
• As histonas oferecem uma estrutura que assegura a compactação do DNA e estabiliza as cargas negativas dos grupos fosfato, dado apresentarem cargas positivas;;
• A unidade básica (monómero) do DNA é o nucleótido, composta por uma pentose (desoxirribose), um grupo fosfato e por uma base nitrogenada (adenina, timina, guanina, citosina);
• Nesta atividade laboratorial utiliza-se sal (NaCl) para neutralizar as cargas negativas do DNA (os iões positivos do sal (Na+) ligam-se a cargas negativas), auxiliando a dissociação de proteínas (como histonas) e favorecer a precipitação do DNA com álcool, pois o DNA torna-se insolúvel;
• O detergente na extração do DNA de células vegetais tem como principal função romper as membranas celulares e nucleares (compostas por bicamadas lipídicas), pois o detergente contém moléculas anfipáticas que se inserem nestas bicamadas. Isto promove a dispersão do DNA ao remover os lípidos constituintes da membrana biológica;
• O álcool deve permanecer refrigerado antes do procedimento para precipitar o DNA mais facilmente, tornando o experimento mais rápido e eficiente;
• A maceração do morango permite a quebra física da parede celular, facilitando a "libertação" do conteúdo interno da célula (incluindo o DNA), para depois ser isolado.

Procedimento:

1. Pese cerca de 50g de morango e corte-o em pedaços;
2. Deite os pedaços de morango no almofariz e macere-os bem;
3. Misture 3g de sal de cozinha (NaCl) com 90ml de água destilada, aquecida a 60°C , para preparar uma solução de NaCl;
4. Adicione 10ml de detergente à solução de NaCl e mexa com a vareta lentamente;
5. Adicione o morango à solução de NaCl com detergente e envolva com a vareta lentamente durante alguns minutos;
6. Coloque uma gaze num funil e filtre para um gobelé o preparado obtido na fase 5;
7. Meça 20ml do preparado anterior para um tubo de ensaio ou uma proveta;
8. Utilizando uma vareta, adicione muito lentamente cerca de 20ml de álcool frio. Deverá observar que se forma uma fase alcoólica sobre uma fase aquosa (deixe repousar 5 minutos)
9. Observe e registe, na forma de fotografia/vídeo, as alterações de posição do agregado nos 40 minutos subsequentes à etapa 8.;

A extração de DNA do morango foi bem-sucedida, com precipitado visível, embora o rendimento tenha sido limitado pela presença de proteínas e açúcares, bem como pelo facto de o morango não apresentar um número muito elevado de cromossomas.

Conclusão:

A atividade permitiu compreender de forma prática o processo de extração de DNA em células vegetais, sendo possível observar o precipitado que confirma a presença de material genético no núcleo. O detergente teve como função romper as membranas celulares e nucleares, o sal ajudou a neutralizar as cargas negativas do DNA ajudando na dissociação de proteínas e o álcool promoveu a sua precipitação, uma vez que o DNA é insolúvel neste meio, tornando-o visível a olho nu.

Conceitos:

Materiais:

DNA; Ácidos nucleicos; Núcleo; Células eucarióticas; Cadeias polinucleótídicas; Histonas; Cromatina; Grupo fosfato; Nucleótido; Desoxirribose; Base nitrogenada; Precipitação; Parede celular; Maceração.

Equipamento laboratorial - Vareta; Balança; Faca; Água destilada; Proveta graduada; Almofariz; Álcool etílico a 96% a 4°C (frigorífico); Gobelés; Gaze; Tubo de ensaio; Funil. Reagentes - Morango; Sal de cozinha; Detergente líquido de loiça.

Afonso Fonseca - Nº4 ; Diego Pinheiro - Nº8 ; Gabriel De Brito - Nº11