Proceso de la clonación

Tasa de transformación

2. Célula hospedadora

Tipos

Tipos

5. Selecionar e identificar clones recombinantes

1. Vector de clonación

3. Crear vector recombinante

Proceso de la clonación

4. Introducción a la celula

3.

1. Preparación del inserto

Fases del proceso de clonación

2. Creación del vector de clonación

Características

• 1 ORI
• Mínimo 1 sitio de inserción
• Marcador de sección
• Marcador de identificación
• Posibles vectores de expresión

Vector de clonación

• Moléculas de ADN que pueden replicarse autonomamente en una célula huésped y que permiten la inserción de ADN extraño
• El fragmento de ADN extraño recibe el nombre de INSERTO

FASES

• Intoducción del vector en a célula hospedadora
• Transformación: Bacteria internaliza el vector
• Bacterias competentes lo hacen solas el resto se pueden transformar
• Tratamiento químico y térmico o electroporación
• Transfección: Proceso de transformación en eucariotas
• Añadir el vector recombinante en una solución tamponada de fosfato cálcico sobre un cultivo de células animales en monocapa o incluir el vector en liposomas

• Transducción: Consiste en la introducción de material genético extraño en una célula por la acción de un virus
• El vector recombinante se empaqueta dentro de la cápside de un virus con el que se infecta un cultivo de células hospedadoras.

Tipos

• Plásmidos: Moléculas circulares bicatenarioextracromosómico con capacidad autónoma de replicación
• Bacteriófago: Virus que infectan bacterias
• Vectores lanzadera: Contienen ORI de dos hospedadores diferentes

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• Seleccionamos las cepas que han introducido vector.
• Identificamos aquellas que lo han introducido recombinado.
• Genes que introducimos en los vectores:
• Resistencia a antibióticos.
• Gen letal
• Gen fluorescencia
• Gen Lac Z

Se obtienen 3 tipos de células:

• Células no transformadas: No han captado ninguna molécula de ADN extraño
• Células transformadas: Portan un vector no recombinante o una molécula de ADN no deseada
• Células transformadas: Portan el vectro recombinante específico

Seleción e identificación de resultados

Tipos

• Bacterias
• Células eucariotas
• Levaduras
• Células animales y vegetales

Características

• Son aquellas en las que se introduce el vectro de clonación para su amplificación
• Se cultivan en medios adecuados en los que se replica generando clones

FASES

• Preparació del ADN (inserto)
• Creación del vector de clonación
• Inserción del ADN extraño

Aquí puedes incluir un dato relevante a destacar

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• Vt es el volumen total de la solución en la que se realiza la transformación (microlitros)
• C es la cantidad de vector empleado
• Vs es el volumen de suspensión bacteriana transformada para sembrar una placa de medio de cultivo sólido con antibiótico
• UFC son las unidades formadoras de colonias que crecen en dicha placa
• La tasa de replicación se expresa como nº de células transformadas/microgramo de vector

Tasa de transformación