UD3. Limpieza, desinfección y esterilización del material de lab

UD3. Limpieza, desinfección y esterilización del material de laboratorio

Módulo: Operaciones básicas de laboratorio 2º grado básico de Industrias Alimentarias Prof. Sonia Pareja

En esta unidad vamos a ver...

1. La limpieza, la desinfección y la esterilización

2. Los métodos de limpieza

3. Los métodos de desinfección

4. Los métodos de esterilización

La LIMPIEZA

En el laboratorio, hay que trabajar en las mejores condiciones de limpieza y asepsia posibles para evitar interferencias de restos de suciedad como materia orgánica, grasa, sustancias químicas o microorganismos

La DESINFECCIÓN

La ESTERILIZACIÓN

Los métodos de limpieza

Actividades 1. Diferencia entre asepsia, antisepsia y limpieza. 2. ¿Qué significa descontaminación? ¿Cuándo se realiza? ¿Cómo se puede llevar a cabo? 3. Diferencia los términos desinfección y esterilización. 4. Cita las cualidades que debe poseer un buen detergente.

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

Se realiza de diferente modo según el material tenga poca suciedad o esté muy sucio.

UN BUEN DETERGENTE...

... debe reunir una serie de cualidades: * Ser humectante, es decir, que facilite que el agua moje mejor la superficie de los materiales. * No ser tóxico ni corrosivo. * No dejar residuos. * Tiene que impedir que, una vez retirada la suciedad, esta se adhiera de nuevo al material . Tras la limpieza, el material estará preparado para ser desinfectado o esterilizado.

Las cualidades que debe reunir un buen desinfectante son: * No ser tóxico para el personal que lo manipule. * No ser corrosivo con los materiales que se vayan a desinfectar. * Tener un amplio espectro. * Ser de acción rápida y duradera. * Ser estable y que no se descompenga o inactive al mezclarse con agua ni se solubilice fácilmente con ella. * Poseer estabilidad química: que no se inactive ante materia orgánica. * Ser de fácil manipulación y, además, económico.

Actividades

5. Completa estas afirmaciones en tu cuaderno: a. La eliminación de suciedad en un objeto o superficie es .................. b. La ...................... es el proceso que garantiza la eliminación total de microorganismo y sus formas de resistencia. c. Cuando hablamos del proceso que elimina o detiene el crecimiento de microorganismos por alteración de su estructura y metabolismo nos referimos a ...................

Limpieza de PIPETAS

Las pipetas se introducen en recipientes con agua jabonosa durante un tiempo. A continuación, se aclaran con agua del grifo hasta retirar todo el jabón; por último, se realiza el curado de la pipeta También se puede utilizar el lavador de pipetas, que consta de dos recipientes y un cestillo perforado donde se colocan las pipetas. En uno de los recipientes (el contenedor) se pone la solución jabonosa y se introduce el cestillo con las pipetas. El recipiente de aclarado tiene un sistema sifón con dos tubos. El tubo superior va conectado a un grifo para que entre el agua, y la inferior sirve para extraer el agua. Tras el aclarado, se colocan con el portapipetas y en posición invertida, con la boquilla hacia abajo, para su secado.

Limpieza de BURETAS

Las BURETAS se deben lavar con agua del grifo o agua jabonosa y con ayuda de una escobilla. Después se aclaran con agua del grifo hasta retirar todo el jabón y se realiza el curado de la bureta (si la suciedad es resistente, hay que utilizar productos especiales). Una vez limpia la bureta, se sujeta al soporte con las pinzas en posición invertida y con la llave abierta, para que se seque a temperatura ambiente. Si no hemos realizado bien la limpieza, puede ocurrir lo siguiente: * Si al llenar la bureta con la solución aparecen burbujas de aire en las paredes interiores o hubiera pequeñas gotas en el interior de la superficie, significa que no está limpia y no transferirá la cantidad exacta del líquido. * Si se comprueba que la disolución no fluye suvamente por el extremo, puede deberse a que el paso esté obstruido por un pequeño trozo de material sólido o por un poco de grasa en la llave. Este tipo de obstrucciones se eliminan con un alambre fino. La bureta hay que desmontarla de forma periódica y retirar la llave para limpiarla, aplicándole un producto graso como vaselina o parafina para que se gire suavemente.

Actividades

6. Copia la tabla en tu cuaderno y marca en la columna correspondiente si los siguientes materiales se limpian con agua a más o menos de 20ºC:

CASO PRÁCTICO

Miguel debe limpiar pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 ml en el lavapipetas siguiendo el proceso general de limpieza. Indica el procedimiento que debe seguir.

Los métodos de desinfección

- Métodos físicos: * Ebullición * Pasteurización - Métodos químicos

Desinfectantes más utilizados para descontaminacion/desinfección de material de laboratorio

Actividades

- ¿Qué diferencias observas entre los dos métodos físicos de desinfección que existen? -¿Qué cualidades debe reunir un buen desinfectante? - Completa en tu cuaderno la siguiente table con los desinfectantes descritos:

Desinfección ALTA

Categorías de desinfección dependiendo del espectro de acción del desinfectante y de la intensidad de su acción

Desinfección MEDIA

Desinfección BAJA

Los métodos de esterilización*

- Métodos físicos: a. Por calor húmedo b. Por calor seco c. Por radiaciones d. Por filtraciones - Métodos químicos:a. Por ÓXIDO DE ETILENO b. Por GLUTARALDEHÍDO al 2% c. Por PLASMA de Péróxido de Hidrógeno

* La esterilización consigue la completa destrucción de toda forma de vida microbiana, incluyendo virus y las esporas bacterianas.

Actividad

- Vas a utilizar el autoclave para un ciclo de ESTERILIZACIÓN. * ¿Cómo hay que preparar el material antes de meterlo en el autoclave? * ¿Cómo debes de ponerlo en marcha y qué precauciones debes tener en cuenta? Ayuda para la resolución: - Revisa e investiga sobre el funcionamiento del autoclave. - Revisa e investiga sobre cómo debe acondicionarse el material para su esterilización. - Existen condiciones estándar de esterilización; la más habitual es utilizando 121º C de temperatura a 1 atmósfera de presión durante 15-20 minutos.

Actividades

- Dibuja un autoclave y señala las distintas partes que lo componen. - Describe la función de los componentes del autoclave. - Cita las ventajas del sistema de esterilización por CALOR HÚMEDO del autoclave.

Acondicionamiento del material para su esterilización

La preparación del material antes de esterilizarlo debe garantizar: 1. Una PENETRACIÓN EFECTIVA del agente esterilizante. 2. La PROTECCIÓN del material contra la oxidación, la corrosión y la pérdida de filo de los instrumentos cortantes. 3. Su PERMANENCIA ESTÉRIL hasta su utilización.

Una vez limpios los materiales hay que envolverlos hasta que actúe el agente esterilizador y así se mantengan protegidos de microorganismos durante y después de la esterilización.

Materiales de protección

- Barrera microbiana efectiva - Facilitan la penetración y eliminación del agente esterilizante - Garantizan la integridad y la resistencia física - Permiten el precinto - Son compatibles con el esterilizador - Están libres de elementos tóxicos

1. INTERNOS 2. EXTERNOS

Los envoltorios pueden ser de diferentes materiales: material textil (musolina, hilo, algodón); papel de celulosa (tejido sin tejer, papel crepé); papel mixto (bolsas, rollos); materiales de polipropileno; o contenedores rígidos (acero, aluminio, plástico).

CONTROLES FÍSICOS, QUÍMICOS Y BIOLÓGICOS PARA LA ESTERILIZACIÓN

Actividad: Crea un mapa conceptual de lo visto en esta unidad. Utiliza la siguiente herramienta digital para la creación del mapa conceptual.

Te daré algún consejo; empieza el esquema con... 1. Limpieza 2. Desinfección 3. Esterilización

IMPORTANTE

El material de vidrio se coloca en soportes o escurridores para un buen secado. Si se necesita un secado rápido, una vez limpio se introducirá en la estufa a unos 60-70º C, teniendo en cuenta que nunca debe ponerse en ella el material volumétrico (pipetas, buretas ni matraces aforados). Para acelerar el secado del material volumétrico podemos enjuagarse con etanol, acetona o usando aire.

DUDAS FRECUENTES

¿Por qué no se debe emplear agua caliente con el material volumétrico?

Porque está calibrado a 20ºC y a temperaturas superiores no haría mediciones exactas de volumen

ESTERILIZACIÓN

Es el procedimiento para la destrucción o eliminación completa de toda forma de vida microbiana, incluyendo los virus (como los de la hepatitis y el VIH), y las esporas *. La esterilización puede llevarse a cabo mediante procesos físicos o químicos (vapor a presión, calor seco, óxido de etileno y líquidos químicos). * Espora: forma de resistencia que adoptan las bacterias ante condiciones ambientales desfavorables

Por calor seco

Este método utiliza aire caliente seco, y la operación de esterilización se lleva a cabo en aparatos eléctricos, como por ejemplo: * HORNO DE AIRE CALIENTE: recibe el nombre de horno Poupinel. * FLAMEADO: para esterilizar con este sistema se debe hacer pasar el material por la llama de un mechero. Es muy utilizado en la esterilización de asas de siembra, pinzas, bocas de matraces y tubos de ensayo. * INCINERACIÓN: hornos a muy altas temperaturas que destruyen materiales de desecho como fármacos, radiografías o residuos.

Por óxido de etileno

El óxido de etileno es un agente químico esterilizante tóxico para los microorganismos y volátil, lo que permite que se elimine fácilmente del objeto. Se utiliza para el material termolábil como plásticos, goma o equipos electrónicos. Los aparatos de esterilización por este sistema se denominan cámaras de óxido de etileno. * Sus ventajas son que destruye todo tipo de microorganismos y que, debido a su alto poder de penetración, los objetos que se tienen que esterilizar pueden empaquetarse previamente. * Sus inconvenientes son que es tóxico (si se inhala causa irritación de ojos, naúseas, vómitos y trastornos neurológicos), irritante y cancerígeno, y además de inflamable y de riesgo. Esto limita su uso a determinadas áreas (en los laboratorios no hay autoclaves de óxido de etileno).

DESINFECCIÓN

Es el proceso que elimina microorganismos por alteración de su estructura o metabolismo, con el objeto de impedir su transmisión al medio. La desinfección se lleva a cabo mediante el uso de agentes físicos o químicos, y puede tratarse de una desinfección alta, intermedia o baja, según la actividad antimicrobiana y según la intensidad de su acción.

Por plasma de peróxido de hidrógeno

Puede esterilizar material termosensible. Para que se dé la esterilización, el material debe estar limpio y seco, dado que la presencia de materia orgánica y humedad detiene el ciclo. Se introduce la solución acuosa de peróxido de hidrógeno y se difunde por la cámara y por el interior de los paquetes. El vapor de peróxido de hidrógeno se ioniza y pasa a plasma. Cuando se descompone, produce vapor de agua y oxígeno. A continuación, debe ventilarse para igualar la presión de la cámara con la exterior. Por último, se abre la puerta del sistema. Las ventajas de este método son que no es tóxico, es rápido y de uso sencillo. Los inconvenientes son que requiere envoltorios especiales de polipropileno y no puede utilizarse con celulosa o con ropa.

Desinfección BAJA

Elimina o inhibe el crecimiento de la mayoría de las formas vegetativas y de algunos virus y hongos muy sensibles. Ejemplo: alcohol etílico.

Por calor húmedo

* AUTOCLAVE: se utliza para esterilizar material resistente a altas temperaturas y antes de desechar el material contaminado. El aparato genera calor húmedo, en forma de vapor de agua a presión, y la esterilización se consigue a través de la coagulación y desnaturalización de las proteínas, destruyendo todo tipo de microorganismos, incluyendo los virus y las esporas. *TINDALIZACIÓN: también conocida como esterilización discontinua o fraccionada, es un método de esterilización por calentamiento discontinuo. Consiste en someter el material o sustancia a un proceso seriado de elevación y disminución de la temperatura para eliminar paulatinamente formas vegetativas y esporas. Se requiere un mínimo de 3 sesiones en 3 días (una sesión por día) de elevación y disminución de la temperatura para que el proceso sea óptimo. Es un método de esterilización que utliza el autoclave.

DUDAS FRECUENTES

Asepsia / Antisepsia

- La ASEPSIA es la ausencia de gérmenes o microorganismos infecciosos tanto en la superficie de los materiales expuestos o de los seres vivos como en la profundidad. - La ANTISEPSIA, es el conjunto de procedimientos que pretender destruir o eliminar agentes contaminantes de todo aquello que no pueda ser esterilizado. Cuando se habla de antisepsia, se hace referencia a la desinfección sobre tejidos vivos (piel, mucosas, heridas) mediante el empleo de antisépticos y desinfectantes.

Desinfección ALTA

Elimina todas las formas vegetativas de la muestra e incluso alguna espora no demasiado resistente. Ejemplo: solución concentrada de NaClO (hipoclorito sódico).

Métodos físicos

* EBULLICIÓN: proceso por el que un líquido pasa a estado gaseoso a alta temperatura (el agua a 100ºC); no constituye un método esterilizante al no destruir los virus ni muchas de las esporas bacterianas. * PASTEURIZACIÓN: proceso que expone el material a agua caliente, a unos 77ºC, durante unos 30 minutos. Su objetivo es destruir todos los microorganismos patógenos.

Por filtraciones

La FILTRACIÓN ESTERILIZANTE se lleva a cabo haciendo pasar la sustancia que hay que esterilizar a través de unos filtros que retienen los microorganismos. Esto se consigue gracias al diminuto tamaño de los poros del filtro y la adsorción a las paredes del poro. Este tipo de filtración se realiza cuando los materiales son termolábiles y no pueden esterilzarse con calor ni mediante agentes físicos como las radiaciones. Con este método se esterilizan líquidos biológicos, soluciones de enzimas. algunas vitaminas y antibióticos. Los filtros utlizados en este procedimiento pueden ser de dos tipos: 1. FILTROS DE MEMBRANA COLOIDAL: discos de ésteres de celulosa con poros tan pequeños que impiden el paso de los microorganismos. Pueden ser desechables o recuperables por esterilización en autoclave y se usan para la asepsia de líquidos y el análisis microbiológico de aguas. 2. FILTROS HEPA (High Efficiency Particulate Air): compuestos por acetato de celulosa, se emplean para filtrar y esterilizar el aire, ya que retienen partículas del aire que sale de una campana de flujo laminar.

Métodos químicos

Se emplean desinfectantes que se aplican sobre objetos inanimados como el material de laboratorio, paredes, suelos y mobiliario y que destruyen los gérmenes o microorganismo patógenos y no patógenos.

Por radiaciones

Las radiaciones ionizantes gamma se utilizan para esterilizar materiales termolábiles de un solo uso, como jeringas o sondas, puntas de pipeta, placas de Petri, fármacos, vacunas... Es lo que se conoce como esterilización en frío o radioesterilizacón.

Por glutaraldehído al 2%

Es bactericida de amplio espectro y eficaz contra virus y esporas.

Desinfección media

Elimina formas vegetativas bacterianas y la mayoría de formas vivas de virus y hongos. Ejemplo: hexaclorofenol a solución de hipoclorito sódico (1 g/l de cloro libre).

Curado de la pipeta

Consiste en llenar la tercera parte de la pipeta o bureta con la solución o líquido que se vaya a medir, inclinarla y girarla para hacer pasar dicha solución por todo su interior. Esta operación debe efectuarse 3 veces. Así se consigue sustituir algún posible resto de agua destilada por la solución que se debe medir y se evitan interferencias.

LIMPIEZA

Es el procedimiento mediante el cual se retira la suciedad (materia orgánica y microorganismos) de los materiales y superficies. La limpieza se realiza utilizando agua, con o sin detergente, para reducir el número de microorganismos. La correcta limpieza del material es muy importante para que la desinfección o esterilización sea eficaz.