CITRATO SIMMONS

CITRATO SIMMONS

FUENTES DE CHONPS

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO

HISTORIA

FORMULACION

GENERALIDADES

MICROORGANISMOS QUE CRECEN

RESULTADOS DE CRECIMIENTO

HISTORIA

Este medio fue desarrollado por primera vez en forma líquida por Koser. No obstante, presentaba el inconveniente de enturbiarse cuando se empleaban inóculos grandes, incluso sin producirse crecimiento alguno. Más tarde Simmons desarrolló el mismo medio en forma sólida y consiguió superar las desventajas anteriores.

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

Algunos ejemplos de microorganismos que crecen en el citrato de Simmons son:

• Klebsiella pneumoniae,
• Proteus mirabilis,
• Enterobacter,
• Serratia,
• Edwarsiella,
• Pseudomonas,
• Citrobacter,
• Aeromonas hydrophila,
• Proteus rettgeri.

Las bacterias citrato‑positivas crecen y hacen virar el indicador a azul intenso y citrato‑negativas hacen virar el indicador a verde intenso. Son Citrato positivo Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Edwarsiella, Pseudomonas, Citrobacter, Aeromonas hydrophila, Proteus rettgeri, S. arizonae, S. typhimurium… Son Citrato negativo Moraxella, Shigella, E. coli, Yersinia enterocolitica, Aeromonas salmonicida, Proteus morganii, Pseudomonas maltophilia.

FORMULACION

por litro

Composición (g/l): tri-Sodio Citrato........................................ 2,0 Amonio di-Hidrógeno Fosfato................... 1,0 Azul de Bromotimol.................................. 0,08 Magnesio Sulfato...................................... 0,2 di-Potasio Hidrógeno Fosfato................... 1,0 Sodio Cloruro............................................ 5,0 Agar.......................................................... 15,0 pH: 6,9±0,2

FUNDAMENTO

Preparación Suspender 24,3 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Si se distribuye en tubos de ensayo dejar enfriar en posición inclinada, dejando un fondo de 2-3 cm y una superficie inclinada de 4-5 cm. Modo de empleo El medio preparado es de color verde, cuando se siembra en los tubos se hace en la columna vertical y por estría en la superficie inclinada. Incubar entre 35±2ºC de 24 a 96 horas.

Este medio se fundamenta en el distinto comportamiento de los Coliformes fecales y los Aerógenos en un ambiente que contiene sales inorgánicas de amonio como única fuente de nitrógeno y citrato como única fuente de carbono. En tal situación los primeros muestran su incapacidad de desarrollo, mientras que los segundos lo hacen sin dificultad. La presencia de azul de bromotimol hace que el medio, inicialmente verde, pueda cambiar de color por la producción de álcali, a un azul oscuro. Para caracterizar Klebsiella es preciso añadir Inosita a razón de 10 g/l antes de esterilizar.

TIPO DE MEDIO DE CULTIVO.

El agar citrato de Simmons es un medio diferencial y selectivo que se utiliza para estudiar la capacidad de los microorganismos de usar citrato como fuente de carbono y sales de amonio como fuente de nitrógeno.