MAPA CONCEPTUAL TEMA 2

1. CULTIVOS CELULARES

TIPOS

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CULTIVO DE ÓRGANOS

EXPLANTES PRIMARIOS

CÉLULAS DISOCIADAS

HISTOTÍPICO Y ORGANOTÍPICO

Histotípico y organotípico

la procedncia de la suspensión celular de partida

la forma de mantenimiento del ph del medio

estado de las células

Métodos de disgregación celular

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Línea general no continua

Línea continua

Químico

Mecánico

Enzimático

2. Curva de crecimiento de los cultivos celulares

Fase de estacionamiento = Confluencia

Fase de crecimiento = Fase logarítmica

Fase de envejecimiento = Senescencia

Fase de adaptación

Inhibición por contacto

Inhibición por densidad

3.MEDIOS DE CULTIVO

CARACTERÍSTICAS

TIPOS

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COMPONENTES

Medio natural

PH

Medio artificial

Aminoácidos

Factores de crecimiento

Medio especializado

Osmoralidad

Info

Medio químicamente definido

Vitaminas

Indicador de PH

FBS

Vicosidad

Hidratos de carbono/Glucosa

Antifúngicos

BME

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Suero

Sales minerales

Tensión superficial

DMEM

Antibióticos

Tampón

Gentamicina

Penicilina

HEPES

Estreptomicina

PBS

4. Recipientes y sustratos

Frascos Roux

Soporte

Sustrato

Placa Petri

Botella roller

Natural

Plástico

Artificial

Vidrio

Proteínas sintéticas

Colágeno/ Laminina

Placa multipocillo

Matrices 3D pososas

Tubos de 10-15 ml

Microesferas

Colágeno

Poli-D-lisina

Poliacrilamida

Sephadex

Laminina

Fibronectina

Celulosa

Temperatura

5. Condiciones de incubación

6. Sembrar células

Humedad

¿De qué depende?

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Atmósfera gaseosa (O2 y CO2)

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Ultracongelación

Cabina de flujo laminar

Nitrógeno líquido

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8. Contaminación biológica

7. Crioconservación

Crioprotector

Bacterias / Hongos / Virus / micoplasmas

Glicerol

DMSO

Una cabina de flujo laminar es un equipo que se utiliza en laboratorios y áreas que necesitan un ambiente limpio y libre de partículas contaminantes. Hace referencia a aquellas cabinas cuya función es proteger las muestras y los instrumentos de la contaminación.

Es el proceso que siguen las células explantadas que sobreviven a las condiciones de cultivo. Tienen unos mayores efectos e intensidad en el cultivo primario, pero también se manifiesta en la resiembra de un cultivo secundario. No supone una modificación genética sino metabólica.

Se caracteriza porque el coeficiente neto de crecimiento se hace nulo, pero aún existe crecimiento. El crecimiento bruto se equilibra con las muertes celulares. En este período se agotan nutrientes especiales y se acumulan sustancias de desecho. Incluso el pH del medio empieza a hacerse inadecuado para el crecimiento celular.

Las células se cultivan en medios de crecimiento, es decir, una solución que proporciona los nutrientes necesarios para que las células crezcan. La elección de los medios de cultivo es esencial para el crecimiento y el comportamiento adecuado de las células.

Es el tipo de cultivo más utilizado por su capacidad de propagación. Es el crecimiento in vitro de células no organizadas en tejidos. Se pueden obtener a partir de explantes primarios, lineas celulares o suspensiones, de células disgregadas por sistemas mecánicos, químicos o enzimáticos. En ellos se pierden las interacciones célula-célula y célula-matriz extracelular, pero las células son capaces de proliferar notablemente. Un cultivo alcanza la confluencia cuando las células ocupan toda la superficie disponible y detiene su proliferación y crecimiento, por eso pasado un tiempo se necesita realizar un subcultivo o pase.

El DMSO es muy tóxico para las células. Durante la congelación, al entrar en contacto con el medio de congelación que contiene DMSO, deben enfriarse rápidamente y cuando se descongelan se deben eliminar el sobrenadante lo antes posible antes de centrifugar.

La temperatura optima de crecimiento de las células depende la temperatura corporal de organismo del que han sido obtenidas. Así, la de los humanos es de 37ºC. No debe superior a la recomendada porque no toleran bien las células las temperaturas elevadas.

Se individualizan las células de los pequeños fragmentos obtenidos por disociación mecánica, ya que estos se transfieren a un tubo con una disolución salina tamponada (es mejor que no tenga ni calcio ni magnesio, ya que favorece la adhesión celular) con enzimas de disgregación disueltas. Se puede realizar en frío (4ºC en la nevera) - se deben mantener durante más tiempo, o en caliente (37ºC en la incubadora). La duración de la disgregación depende de la estructura del tejido que se desea disgregar.

Si la siembra de células disociadas se realiza sobre la superficie de una placa o frasco de cultivo se obtiene un cultivo en monocapa de células disociadas. Por otro lado, si se realiza sobre un sustrato tridimensional se obtiene un cultivo histotípico u organotípico.

Se rompe el tejido tras la disección hasta obtener fragmentos del menor volumen posible de forma mecánica. Se realiza en una disolución salina tamponada en condiciones estériles. El método de fragmentación es según la estructura interna del tejido. Los fragmentos menores obtenidos se pueden adherir al fundo de la placa, si se les añade un medio de cultivo nutritivo pueden originar un cultivo de explantes primarios de donde migraran las células.

CULTIVO EN SUSPENSIÓN Las células se multiplican en un medio líquido sin adherirse a ningún sustrato. NO usan protestas para realizar subcultivos y es el tipo de cultivo más usado para el cultivo de células hematopoyéticas . Homogénea: los componentes están distribuidos de forma uniforme. (Gel o emulsión). Heterogénea: los componentes no están uniformemente distribuidos (mezcla de agua con arena).

Es un tipo de representación gráfica que ilustra una transición o evolución a lo largo de un proceso biológico, donde no se muestra una continuidad lineal, sino que se destaca la discontinuidad (saltos o cambios) entre diferentes etapas o eventos. Puede utilizarse para mostrar cómo ciertas características, especies o procesos han evolucionado de manera no uniforme a lo largo del tiempo o para ilustrar etapas en el desarrollo de un organismo que no siguen un patrón lineal.

Se debe mantener una humedad adecuada para evitar que se sequen los cultivos, aumentando la concentración de los componentes y variaciones de pH y tonicidad. Algunas incubadoras tienen un generador de vapor o atomizador para controlarla, otro bandejas con para generar humedad mediante evaoración (Niveles de humedad 95-98%).

Formados por un conjunto de sales que contienen aniones fosfato, bicarbonato, cloruro, sulfato y cationes de sodio y potasio. Las sales son las responsables de la osmolaridad del medio, que debe ser isotónico o ligeramente hipotónico respecto a las células que cultiva.

La siembra implica colocar la suspensión celular en placas o frascos de cultivo que han sido acondicionados previamente. El proceso se puede llevar a cabo de distintas formas:

• Añadiendo una pequeña cantidad de una suspensión celular concentrada a pocillos que contienen medio de cultivo.
• Añadiendo una suspensión de la concentración celular final deseada directamente sobre el sustrato.
• Añadiendo una suspensión concentrada y rellenando los pocillos con medio de cultivo aproximadamente 30 minutos después, lo cuál favorece la adhesión celular.

Se coloca un fragmento de tejido en la interfase sólido-líquido de un soporte de vidrio o plástico (placa de Petri o frasco de cultivo) y nutrirlo con un medio adecuado. Esos fragmentos se adhieren a esa superficie sólida donde las células de la periferia puedan migrar y proliferar. Es útil en pequeñas cantidades de tejido (biopsias de piel/vellosidades coriónicas).

Formados por un conjunto de sales que contienen aniones fosfato, bicarbonato, cloruro, sulfato y cationes de sodio y potasio. Las sales son las responsables de la osmolaridad del medio, que debe ser isotónico o ligeramente hipotónico respecto a las células que cultiva.

Se usan para crear tejidos in vitro funcionales para injertos o transplantes. Histotípico: las células (de un único tipo) crean una estructura tridimensional similar al tejido original. Son cultivos de alta densidad. Organotípico: tienen varios tipos de células muy parecidas al tejido original. Son la base de la ingeniería de tejidos.

Es el mantenimiento de un órgano o parte de él para preservar su estructura y funciones, aunque sea parcialmente. Este se coloca sobre una rejilla en la interfase líquido-gas de un medio de cultivo del que extrae nutrientes y del que elimina los desechos metabólicos.

Casi todas las células en cultivo realizan su metabolismo mediante glicolisis anaerobia, manteniendo el O2 atmosferico. Un aumento de este es tóxico para las células por as formaciones de radicales libres (medios de cultivo libres). El CO2 (concentración 5% con rango 2-8%) se disuelve en el medio, equisiera los iones de bucarbonato y estabiliza pH. Cada medio tiene un % de CO2 para mantener el pH correcto y depende de la concentración de bicarbonato.

Un subcultivo o pase consiste en el transplante de células de un envase de cultivo a otro/os. El número de pases o subcultivos es el número de veces que las células se han subcultivado. Entre los datos que se consignan en el frasco de cultivo, está el número de pases o subcultivos.