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FUNdamentos de instrumentación y sistematización en el laboratorio clínico

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL CECYT 15 "Diódoro Antúnez Echegaray"Alumna: Diana Paola Olvera HerreraGrupo: 3IM6

10. Conclusión

9. Método de laboratorio

9. Microscopio

7. Centrifuga

8. Espectrofotómetro

6. Balanza Granataria y Analítica

5. Diluciones

Haz click en los tubos de ensayo

4. Material volumétrico

3. Esterilización(Autoclave)

2. Limpieza del instrumental

Temas vistos en el semestre

1. Instrumental de laboratorio

BOTON DE ENCENDIDO/APAGADO

DESPLAZADOR DE CELDAS

COMPUERTA

BOTON MONOCROMADOR

PANTALLA

Partes del Espectrofotómetro

Partes del microscopio

Mecánico

•Tornillo de frenado de la cabeza del ocular * Conchas de protección * Tornillos para alinear el condensador •Tornillo de ajuste (ascenso y descenso) de la platina* Base o pie * Brazo* Revolver * Tornillo micrómetro y macrometrico * Platina con escalas* Palanca de abertura del diafragma * Tornillos de Desplazamiento de la platina * Corrector de dioptrias* Escala para detección pupilar* Pinzas de la platina * Botón de encendido y apagado * Tornillo de frenado de Platina

Oculares

* Oculares * Objetivos

Iluminación

* Condensador * Fuente de Iluminación * Diafragma

Preparación de medios de cultivo

Materiales * Caja Petri * Matraz * Pipetas de vidrio * Autoclave* Baño Maria * Propipeta* Balanza Analítica * Tubos de ensayo El material debe de estar previamente lavado y Esterilizado.Previamente se va a preparar Manitol, Sitrato de Simmons y Agar Sangre Y así obtienes los medios de cultivo.

AGAR MANITOL: Se utilizan 111 gramos de Manitol para un litro, pero se utilizarán 25 ml de agua destilada, se hicieron cálculos para determinar los gramos de Manitol a usar, qué fueron 2.7 gramos.Se usa la balanza analítica, se midió el Manitol con papel, haci que se tara la balanza a 0 para colocar los 2.7 gramos de Manitol con ayuda de una espátula.Se coloca en el Matraz el Agar de Manitol y con una probeta se midió los 25 ml de agua destilada, para colocarla previamente en el Matraz.SITRATO DE SIMMONS:Se realiza el mismo procedimiento pero cambian los cálculos ya que para 25 ml se pesaron 0.60 gramos.Ambas preparaciones se llevan a Baño Maria para calentarlas y que se disuelvan, ya que hay grumos y deben de estar Homogéneas las preparaciones.Se llevan a la Autoclave a 121 grados por 15 minutos Después de que pasó el tiempo se sacan las preparaciones y con una pipeta y propipeta se midieron 5 ml de cada Agar para pasarlos a tubos de ensayo.Se les da una inclinación al sitrato y se tapan hasta que se enfríen.

AGAR DE SANGRE El procedimiento para llevarlo a la Autoclave fue igual que las demás, pero este después de sacarlo se debe esperar a que tenga 50 grados ya que es una temperatura considerable para que los eritrocitos no se rompan.Se coloca sangre de carnero al 5% y se mezcla.El Agar de sangre ya está listo para vaciarse en las cajas petri.Y así obtienes los medios de cultivo.

1 unidad de absorbancia en 1 cm de trayectoria óptica para ADN de doble cadena=50ug/ml y para ARN= 40 ug/ml.Es bastante común que, durante el proceso de extracción, las muestras de ácidonucleico se contaminen con otras moléculas (proteínas, compuestos orgánicos, etc).Una de las ventajas de usar el análisis espectrofotométrico es la capacidad dedeterminar la pureza de la muestra usando la relación de absorbancia a 260nm y280nm (A260/280): ADN puro: A260/280 ~ 1.8 ARN puro: A260/280 ~ 2.0

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

1. ESPECTROFOTOMETRÍA Un espectrofotómetr es capaz de determinar las concentraciones promedio de los ácidos nucleicos de ADN o ARN presentes en una mezcla, así como su pureza.

cabe recordar que los ácidos nucleicos absorben a 260nm. Solo por el hecho de tener absorbancia a 260nm no significa que el ARN esté intacto: podría estar completamente degradado o podría ser ADN (si se requiere ARN puro para alguna técnica como microarrays, siempre es recomendable tratar con DNAsa).

Separación de plasma en muestras de sangre

Materiales 1. Tubos de extracción de sangre con anticoagulante (como EDTA o citrato).2. Muestra de sangre completa.3. Centrífuga clínica.4. Porta tubos compatibles con la centrífuga.5. Pipetas Procedimiento1. Recolección de la muestra: Se extrae la sangre en un tubo con anticoagulante para evitar la coagulación.2. Colocación en la centrífuga:Asegúrate de equilibrar los tubos en la centrífuga (colocar tubos de igual peso opuestos entre sí).Introduce el tubo en el porta tubos de la centrífuga.

3. Configura la centrífuga a 1500-2000 g por 10-15 minutos (dependiendo del protocolo).Inicia el proceso y espera a que la centrífuga termine.4. Recolección del plasma:Una vez finalizado, observarás tres capas: glóbulos rojos en el fondo, capa leucocitaria (buffy coat) en el medio y plasma en la parte superior.Con una pipeta, extrae cuidadosamente el plasma sin tocar las otras capas.5. Almacenamiento o análisis:Conserva el plasma a 4 °C (corto plazo) o a -80 °C (largo plazo), o realiza el análisis inmediatamente.Usos comunesPruebas bioquímicas como niveles de glucosa, colesterol o electrolitos.

Observación de células de levadura utilizando microscopio óptico

Materiales:- Cultivo de levadura - Agar-agar- Solución de fijación (metanol al 100%)- Solución de tinción (azul de metileno al 1%)- Microscopio óptico- Portaobjetos- Cubreobjetos- Pipetas- Cuchara1. Preparación del cultivo de levadura: Se toma una muestra del cultivo de levadura y se mezcla con agar-agar para crear una suspensión.2. Fijación de las células: Se agrega la solución de fijación (metanol al 100%) a la suspensión de levadura y se deja reposar durante 10 minutos.

3. Tinción de las células: Se agrega la solución de tinción (azul de metileno al 1%) a la suspensión de levadura fijada y se deja reposar durante 5 minutos.4. Preparación de las láminas: Se toma una pequeña cantidad de la suspensión de levadura teñida y se coloca en una lámina de microscopio.5. Cubierta con cubreobjetos: El portaobjetos con un cubreobjeto para evitar que las células se sequen.6. Observación con microscopio: Se observa el portaobjetos en el microscopio óptico a diferentes aumentos (40x, 100x, 400x) para visualizar la morfología de las células de levadura.

1. Preparación de las diluciones: Se preparan 6 tubos de ensayo con 10 mL de agua destilada cada uno.2. Adición de la solución de antibiótico: Se adiciona 1 mL de la solución de antibiótico desconocida al primer tubo de ensayo.3. Dilución 1:2: Se adiciona 1 mL del contenido del primer tubo de ensayo al segundo tubo de ensayo y se mezcla bien.Dilución 1:4: Se adiciona 1 mL del contenido del segundo tubo de ensayo al tercer tubo de ensayo y se mezcla bien.

Determinación de la concentración de una solución de antibiótico mediante diluciones en serie

Materiales:- Solución de antibiótico (penicilina) desconocida- Agua destilada- Pipetas de 10 mL y 1 mL- Tubos de ensayo de 10 mL- Placa de agar con bacteria sensible al antibiótico - Incubadora

5. Dilución 1:8: Se adiciona 1 mL del contenido del tercer tubo de ensayo al cuarto tubo de ensayo y se mezcla bien.6. Dilución 1:16: Se adiciona 1 mL del contenido del cuarto tubo de ensayo al quinto tubo de ensayo y se mezcla bien.7. Dilución 1:32: Se adiciona 1 mL del contenido del quinto tubo de ensayo al sexto tubo de ensayo y se mezcla bien.8. Inoculación de la placa de agar: Se inocula la placa de agar con bacteria sensible al antibiótico y se agregan 1 mL de cada dilución en serie.9. Incubación: La placa de agar se incuba a 37°C durante 24 horas.10. Observación de los resultados: Se observan los resultados en la placa de agar y se determina la concentración mínima inhibitoria del antibiótico.

Video para el uso del espectrofotómetro

ESPECTROFOTÓMETRO

El espectrofotómetro es un instrumento que mide la cantidad de luz absorbida o transmitida por una sustancia a diferentes longitudes de onda del espectro electromagnético.En un laboratorio, sirve para:1. Determinar concentraciones: Analizar la cantidad de un compuesto en una muestra mediante su absorción de luz.2. Identificar sustancias: Detectar compuestos específicos según sus espectros característicos.3. Control de calidad: Verificar pureza o propiedades de productos químicos.4. Estudios cinéticos: Monitorear reacciones químicas en función del tiempo.

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Los microscopios ópticos purden ser simples o compuestos.

Microscopio

El microscopio es un apaato que se utiliza para observar objetos y estructuras que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. Es un instrumento fundamental en la investigación científica y se utiliza en una amplia variedad de campos.Uso en los laboratoriosEl microscopio se utiliza en los laboratorios para una variedad de propósitos, incluyendo:1. Observación de células y tejidos: Para estudiar la morfología y la estructura de las células y tejidos.2. Identificación de microorganismos: Para identificar bacterias, virus y otros microorganismos.3. Análisis de muestras: Para analizar muestras de tejidos, fluidos corporales y otros materiales.4. Investigación básica: Para estudiar los mecanismos biológicos y las interacciones moleculares.5. Desarrollo de nuevos tratamientos: Para desarrollar nuevos tratamientos y medicamentos.

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Podemos concluir que a lo largo de este curso, todos los temas abordados en la materia desempeñan una gran labor en varios métodos, ya que nos aseguran precisión, eficacia y seguridad al realizar estas pruebas.La Autoclave nos permite esterilizar materiales, la balanza nos da mediciones exactas para preparar soluciones o reactivos, la centrifuga nos ayuda a separar componentes, el espectrofotometro mide la absorción de la luz para analizar concentraciones y el microscopio nos permite observar estructuras que no se pueden ver a simple vista.Relacione cada tema observado en la materia con casos que se hicieron en un laboratorio ya que el objetivo era observar la importancia de cada una estas en el ámbito Clínico.

Conclusión

Métodos de laboratorio

Metodo 2

Metodo 1

Metodo 3

Metodo 4

Metodo 5