PRESENTACIÓN MOLÉCULAS

Anteproyecto de tesis que presenta la MC Jissell Alvarez Sandoval como requisito para obtener el grado de Doctor en Manejo y Aprovechamiento Integral de Recursos Bióticos.

Efecto antitumoral de la fracción metanólica purificada de Vernonia greggii nanoencapsulada sobre células tumorales in vitro e in vivo

Semestre Agosto-Diciembre 2024

Instituciones

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

FACULTAD DE MEDICINA

Departamento de Química Analítica

Departamento de HistologíaDepartamento de Químinca Analítica

Comité de tesis

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

FACULTAD DE MEDICINA

Dr. Abelardo Chávez Montes(Director)Dr. Juan Gabriel Báez González (Secretario) Dra. Sandra Loruhama Castillo (Vocal I) Dr. Eduardo Sánchez García (Vocal II) Dr. José Ezequiel Viveros Valdéz (Vocal III)

Dr. Adolfo Soto Domínguez(Director externo)Dra. Rocío Castro Ríos (Asesora externa)

ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN

8. Vídeo

2. Cita

9. Proceso

3. Texto/Imagen 1

10. Cronología

4. Texto/Imagen 2

11. Mapa

5. Texto 1

12. Versus

6. Texto 2

13. Equipo

7. Imagen completa

14. Gracias

INTRODUCCIÓN

1. INTRODUCCIÓN

Las plantas son fuentes alternas donde encontramos agentes con propiedades farmacéuticas

Info

La carga de cáncer a nivel mundial va en aumento

La nanomedicina ha sido considerada una alternativa para el tratamiento contra el cáncer

Cilia et al. 2021 Beltrán et al.2023 Pavelić et al. 2023

ANTECEDENTES

2. ANTECEDENTES

2.1 Impacto del cáncer

2.2. Estrategias terapéeuticas para tratar el cáncer

2.3. Importancia de las plantas de la familia de las Asteraceae en la medicina tradicional

2.4. Espectro citotóxico de las plantas del género Vernonia

3. JUSTIFICACIÓN

Incidencia de casos nuevos de cáncer fue de 19, 976, 499; 9, 743, 832 decesos; nivel mundial.

4. HIPÓTESIS

La fracción metanólica purificada de Vernonia greggii es mayormente citotóxica hacia las células tumorales estando nanoencapsulada que de forma libre.

5. OBJETIVOS

Objetivo general: Determinar la selectividad de la fracción metanólica purificada de V. greggii nanoencapsulada sobre células tumorales humanas.

Objetivos específicos

1. Evaluar citotoxicidad de la fracción metanólica de Vernonia greggii libre sobre diferentes linajes celulares tumorales: HepG2 (carcinoma hepatocelular humano), HT29 y Caco-2 (cáncer de cólon humano), MDA-MB-231(cáncer de mama humano), CT26.WT (Cáncer de cólon murino), TC-1 (mieloma murino) y HaCat (queratinocitos epidérmicos humanos)

2. Aislar y caracterizar por espectrometría de masas el compuesto con actividad biológica de la fracción metanólica de Vernonia greggii

3. Estandarizar técnica para nanoencapsular la fracción metanólica purificada, y caracterizar físico- químicamente las nanopartículas poliméricas cargadas con la fracción purificada.

4. Evaluar actividad antitumoral y su mecanismo de acción sobre la línea más susceptible al compuesto aislado de forma libre y encapsulado en nanopartículas poliméricas biodegradables in vitro e in vivo.

MATERIALES Y METODOLOGÍA

6.1 Citotoxicidad de V. greggii

• Líneas celulares:
• HepG2 (carcinoma hepatocelular humano)
• HT29 y Caco-2 (cáncr de cólon humano)
• MDA-MB-231(cáncer de mama humano)
• CT26.WT (Cáncer de cólon murino)
• TC-1 (mieloma murino)
• HaCat (queratinocitos epidérmicos humanos)

• Tratamientos control:
• Control negativo (Medio cultivo fresco)
• Control positivo (Doxorubicina)
• Fracción metanólica sin purificar y pura(F-Me y F-Me p) libres
• Fracción metanólica sin purificar y pura(F-Me y F-Me p) nanoencapsuladas
• Nanopartículas blanco (PLGA NP)
• DMSO

Figura 2. Diagrama ensayo de MTT bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazol- 2- il)- 2, 5- difeniltetrazolio) para determinar la viabilidad celular ,

6.1 Citotoxicidad de V. greggii

• Líneas celulares (Se probará sobre la línea celular más sensible) :
• HepG2 (carcinoma hepatocelular humano)
• HT29 y Caco-2 (cáncer de cólon humano)
• MDA-MB-231(cáncer de mama humano)
• CT26.WT (Cáncer de cólon murino)
• TC-1 (mieloma murino)
• HaCat (queratinocitos epidérmicos humanos)

Figura 3. Diagrama de ensayo de apoptosis necrosis

• Tratamientos control:

• Fracción metanólica pura(F-Me p) nanoencapsulada
• Nanopartículas blanco (PLGA NP)

6.2 Caracterización y asilamiento del compuesto activo de la fracción metanólica de V.greggii

Voucher ID Vernonia greggii No. 25590

Figura 4. Condiciones para obtener caracterización de la fracción metanóllica de V.greggii

6.3 Técnica de nanoencapsulación de la fracción metanólica de V.greggii purificada

Nanopartículas de Fracción metanólica pura( F-Me p) Nanopartículas blanco (PLGA NP)

Figura 5. Diagrama de técnica de nanoprecipitación de F-Me p

6.4 Evaluación citotóxica in vivo de la fracción metanólica de V.greggii purificada

Figura 6. Diagrama ensayo in vivo para evaluar la citotoxicidad de F-Me p nanoencapsulada

Células TC-1 aisladas de pulmón tumoral murino C57BL/6 ó CT26.WT, ATCC-CRL-2638(Cáncer de cólon murino)

• Grupos control:
• Ratones con tumor sin tratamiento
• Ratones con tratamiento control positivo (Doxorubicina)
• Ratones con tratamiento de nanopartículas de F-Me p
• Ratones con tratamiento de nanopartículas blanco (PLGA NP)

6.4 Diseño experimental

Para el análisis de los datos, se utilizará ANOVA (análisis de varianza) con una comparación de medias de Tukey utilizando el software Graphpad Prism 9 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) Los tratamientos control son: 1) Fracción metanólica libre, 2) Fracción metanólica nanoencapsulada, 3) Fracción purificada libre, 4) Fracción purificada nanoencapsulada, 5) Doxorubicina libre y 6) nanopartículas blanco. Sobre los linajes celulares tumorales y sanos ya mencionados anteriormente. Así como la obtención de los valores IC50 para determinar el índice de selectividad hacia las células tumorales.

¡GRACIAS!

• Disminuir efectos secundarios de la medicación
• Variedad de nanoformulaciones
• Focalización sobre las células tumorales y su destrucción mediante caracteristicas eléctricas
• Acumulación en el tumor debido al sistema linfático subdesarrollado

Pavelić et al. 2023

Las plantas de la familia Asteraceae

• Problemas gastrointestinales (diarrea, vómito, falta de apetito)
• Enfermedades respiratorias (tos, bronquitis, expectorante, asma)
• Infecciones bacterianas, dolor dental

Incidencia e Impacto de cáncer nivel nacional

Figura 1. Número de casos, decesos y prevalencia de casos de cáncer en general en México

Tabla I. Top 5 de cáncer a nivel nacional que afectan ambos sexos (Incidencia, mortalidad y prevalencia)

GLOBOCAN

Nanomedicina

Tiene como ventaja el uso de nanomateriales que administran fármacos quimioterapéuticos, mejoran la focalización al tumor, prolonga la vida media en circulación plasmática, mejora la acumulación tumoral y biodisponibilidad

El polímero ácido poli láctico- co- glicólico (PLGA) es ideal para la administración de fármacos y ha sido aprobado por la FDA.

La medicina herbolaria ha sido importante para el tratamiento contra el cáncer

Xu et al. 2023; Alvi et al. 2022; Mohammad et al. 2023

Cáncer en general a nivel nacional

En el 2019, se reportaron 222,060 casos de cáncer, siendo la incidencia más alta: piel no melanoma, cáncer de próstata y de mama; aunado a esto, el 53 % de muertes se asocia con el cáncer de pulmón, colorrectal, estómago, próostata, mama y páncreas

Beltrán et al.2023

Compuestos presentes en la familia Asteraceae

• Sesquiterpen lactonas, flavonoides, flavones, triterpenos, diterpenos, poliacetilenos

Cilia et al. 2021

Las sesquiterpen lactonas son moléculas secundarias, que se encuentran comúnmente en plantas Vernonia. La actividad antitumoral se ve atribuída a la presencia de α-metilen- γ-lactona.

La sesquiterpen lactona "vernodalinol" de la fracción n- butanol de Vernonia amygalina, la cual demostró ser citotóxico para MCF-7 a 25 y 50 μg/ mL, inhibiendo la síntesis de DNA en un 34 y 40 % (Luo et al. 2011).

Vernonia amygdalina induce el arresto del crecimiento celular, daña el ADN, además, tiene efecto protector ya que protege del estrés oxidativo sobre PC-3.

Lopes J.L. 1991; Laurella et al. 2022; Luo et al. 2011; Johnson et al. 2017.

Las Asteraceae, familia de plantas con flores, distribuida alrededor del mundo, cuenta con más de 1,600 géneros y 2,500 especies.

Esta familia también cuenta con un rango de plantas del género Vernonia, poseen potencial terapéutico importante en el que destacan la actividad antiinflamatoria, hipoglucémica, antiproliferativa.

Matricaria chamomilla (Manzanilla)

Arnica montana

Rolnik y Olas 2021; Mishra et al. 2023