Técnica Histológica

Pasos de la Técnica Histológica

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2. Fijación

Selección del fijador:

Objetivos:

• Prevenir autólisis y putrefacción
• Preservar sus características
• Preparar para su ulterior tratamiento
• Aumentar afinidad natural por colorantes
• Insolubilización e inmovilización de los componentes celulares o tisulares (proteínas, carbohidratos, lípidos, enzimas, ácidos orgánicos y sales).

Agentes fijadores:

1. Físicos (frío, calor)
2. Químicos

3. Eliminación del fijador

• Dependerá del fijador empleado
• Agua para formaldehído (formol)
• Alcohol yodado para bicloruro de mercurio

4. Deshidratación

• Deshidratación con alcohol etílico (más usado).
• La parafina no es miscible con el alcohol etílico, por lo que hay que emplear después de la deshidratación un líquido intermediario.
• Para la inclusión en parafina, considere que ésta no es miscible en agua.
• Los deshidratadores más utilizados son: alcohol etílico, alcohol isopropílico, el dioxano y el cloroformo.

5. Transparentación

• El líquido intermediario en general, es un aclarante con lo que se puede calcular el grado de penetración de él según la transparentación adquirida por la pieza.
• El líquido intermediario debe ser miscible con el alcohol y con la parafina.
• El líquido intermediario más utilizado es el xilol.
• Otros líquidos intermediarios o diafanizadores: benceno, tolueno cloroformo.

6. Inclusión en parafina

7. Obtención de cortes

Microtomo de rotación tipo Minot. Cortes seriados5-10m de grosor

Los microtomos rotatorios están formados por tres partes fundamentales:

1. Un porta bloques
2. Un soporte de la cuchilla
3. Un sistema de avance automático

Baño de flotación

8. Coloración

Aumenta el contraste y/o ayuda a identificar diversas estructuras

9. Montaje y observación microscópica

Cortes por congelación

Microtomo de deslizamiento

• Se utiliza cuando los tejidos están incluidos en celoidina.
• Se usa cuando la inclusión en parafina contiene porciones voluminosas de tejidos y órganos.
• Cortes de 20 - 30µm
• Se usa cuando queremos conservar y observar lípidos.

• Inclusión en Tissuetek para cortes en crióstato (criotomo).
• Cortes de 5 - 10µm

Crióstato

Microscopía electrónica

No acuoso

Resinas naturales o sintéticas

Ventajas: 1) La conservación del material es prácticamente indefinida 2) Mayor resistencia al usoDesventajas: 1) La preparación debe deshidratarse y transparentarse antes de ser montada. 2) Las resinas naturales tipo Bálsamo de Canadá tienden a decolorar la preparación con el transcurso del tiempo.

Ventajas:

• Químicamente es inerte.
• Soluble en diferentes disolventes.
• Impregnación del tejido a nivel celular.
• Fácil de cortar con la cuchilla.
• Cuanto más reciente sea el material a estudiar, mayor será la dureza de la parafina a emplear.
• La sustitución de las parafinas se hace de manera gradual (a partir de Xilol-parafina hasta la parafina más dura (56-58°C).
• Se puede emplear en lugar de parafina, Paraplast.
• Existen otras sustancias de inclusión, ya sea solubles en agua (gelatina, carbowax, glicol metacrilato) o solubles en solventes orgánicos (parafina, celoidina, resinas epóxicas).

Acuoso

Gelatina, goma arábiga

Ventajas:1) El corte no necesita deshidratarse.2) Permite la preservación de compuestos solubles en alcohol tales como lípidos3) El índice de refracción es bueno, menor que en otros medios.Desventajas:1) El tiempo de conservación no es muy largo. Por lo tanto la preparación debe sellarse por ejemplo con barniz..

Causas que pueden provocar problemas:

• El ángulo de inclinación de la cuchilla
• La cuchilla con mellas ocasiona estrías
• La temperatura ambiente por arriba de los 25°C
• Una mala fijación, deshidratación e inclusión