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U2_Fundamentos_POCT_Cuidado_Crítico
talentohumanoannar
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Transcript
¡Creciendo juntos!
Fundamentos Teóricos en POCT y Cuidado Crítico
¡Iniciemos esta ruta de aprendizaje!
Tema 2
Bases de Metodologías más Comúnmente Usadas en POCT
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INMUNOCROMATOGRAFÍA DE FLUJO LATERAL
La inmunocromatografía es una técnica inmunológica que permite visualizar la reacción antígeno-anticuerpo, por la acumulación del oro coloidal del conjugado en zonas específicas del papel de nitrocelulosa, donde se fijan previamente anticuerpos de captura. Confirma la presencia o ausencia de un analito objetivo. Contiene una línea control para confirmar que la prueba funciona correctamente, junto con una o más líneas objetivas o de prueba, estructura general externa de un casete:
pozo de muestra/buffer
zona de prueba
zona de control
nombre de la prueba
- La inmunocromatografía es una de las técnicas de inmunodiagnóstico más moderna, cuyas principales ventajas son la simplicidad y rapidez de la prueba.
- Estos test están diseñados para incorporar protocolos de usuarios intuitivos y requieren un entrenamiento mínimo para operar.
ventana de resultados
Espacio para identificación
Ejemplo
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INMUNOCROMATOGRAFÍA DE FLUJO LATERAL
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La muestra es añadida en la zona del conjugado, el cual está formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopos del antígeno a detectar y un reactivo de detección. Si la muestra contiene el antígeno problema, éste se unirá al conjugado formando un complejo inmune y migrará a través de la membrana de nitrocelulosa. Si no, migrarán el conjugado y la muestra sin unirse.
La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico contra otro epítopo del antígeno. Al llegar la muestra a esta zona, los complejos formados por la unión del antígeno y conjugado quedarán retenidos y la línea se coloreará en este caso como rosa o azul (muestras positivas). En el caso contrario las muestras son negativas.
La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de detección. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unirá al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta línea es un control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y negativas.
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APLICACIONES
Haz clic en +inf para conocer las aplicaciones de la inmunocromatografía
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Diagnóstico In vitro
Tecnología Versatil
Uso en las Industrias
+info
+info
+info
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TIPOS DE INMUNOENSAYOS DE FLUJO LATERAL
Haz clic en cada boton rosado para conocer los conceptos.
Tipos de migración
Los ensayos de flujo lateral se pueden desarrollar para ser utilizados en un formato de tira reactiva o en un casete alojado. Tanto las tiras reactivas como las tiras alojadas en casetes funcionan de manera similar; solo depende de la industria, la matriz de muestra y los requisitos del mercado.
Vertical
Horizontal
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TIPOS DE INMUNOENSAYOS DE FLUJO LATERAL
Tipos de reacción
El antígeno o anticuerpo a ser detectado es capturado en la zona del test.
NO COMPETITIVO
El metabolito detectado en la muestra es capturado por el conjugado, no en la zona de captura.
COMPETITIVO
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MATRICES
El analito objetivo y los requisitos del mercado determinarán el tipo de muestra que se utilizará en el ensayo. Algunas muestras requieren un buffer de dilución de inactivación o de lisis en la ejecución de la prueba, para facilitar la entrega de la muestra en la reacción. MUESTRAS: Sangre total capilar, sangre total anticoagulada, suero, plasma, orina, hisopados, entre otros.
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CONJUGADOS
Por lo general, los ensayos de flujo lateral utilizan nanopartículas conjugadas de oro (el conjugado de oro coloidal, puede estar compuesto por anticuerpos-oro coloidal para la detección de antígenos o conjugado de antígeno-oro coloidal si es para la detección de anticuerpos), carbono o látex coloreado dentro de la almohadilla conjugada. También se usan perlas magnéticas o perlas de poliestireno de colores.
Independientemente de los tipos de conjugados, todos realizan la misma función para crear un enlace de tres vías con anticuerpos y dianas para hacer visibles las líneas de control y de prueba.
Elección de los conjugados
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MULTIPLEXING
Las pruebas inmunocromatográficas son capaces de detectar múltiples objetivos en una sola prueba, en lugar de usar muchas pruebas individuales. En situaciones en las que solo se dispone de un pequeño volumen de muestra, un ensayo multiplex le permite maximizar su uso:
Para ayudar al diagnóstico cuando se requiere la presencia de varios marcadores juntos.
Para confirmar la presencia de múltiples contaminantes durante las pruebas de alimentos y piensos de gran volumen.
Ofreciendo beneficios de ahorro de costos a los usuarios finales en un laboratorio o en el campo al realizar pruebas para diferentes objetivos simultáneamente.
En áreas remotas o agrícolas donde los recursos son limitados y donde las pruebas multiplexadas ahorrarán tiempo.
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INMUNOENSAYO CON EMISIÓN DE FLUORESCENCIA
La tecnología FIA (Fluorescence Immunoassay Antigen), utiliza un sistema de inmunoensayo cuantitativo basado en tecnología de micro fluidos y de inmunofluorescencia. FIA utiliza la fluorescencia de forma revolucionaria, de manera que permite cuantificar la cantidad del analito objetivo en medición. El inmunoensayo fluorescente FIA utiliza fluoróforos como etiqueta, midiendo la fluorescencia para determinar la concentración de analito.
Los instrumentos escanean las nanopartículas de europio (fluorocromo superior, que es captado de manera cuantitativa en la zona de la prueba), para medir la concentración de analitos designados en la sangre humana, suero, plasma, orina y otras muestras.
gráfico inmunoensayo
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INMUNOENSAYO CON EMISIÓN DE FLUORESCENCIA
La tecnología FIA se basa en la reacción antígeno anticuerpo y la tecnología de fluorescencia. Los instrumentos utilizan generalmente un láser de diodo semiconductor como fuente de luz de excitación para iluminar la membrana del cartucho de prueba (precargada con la muestra clínica debidamente procesada según el procedimiento de prueba estándar), lo que desencadena la fluorescencia de las moléculas de fluorocromo presentes en la membrana. La luz fluorescente se recoge junto con la luz láser dispersa. La fluorescencia pura se filtra de la mezcla de luz dispersada y fluorescente. La intensidad de la fluorescencia se escanea y se convierte en una señal eléctrica que es proporcional a la intensidad de la fluorescencia producida en la membrana del cartucho de prueba.
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El microprocesador integrado calcula la concentración del analito en la muestra clínica basándose en una calibración preprogramada. El resultado calculado y convertido se muestra en la pantalla del instrumento.
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ESTUDIOS DE CASOS | CASO: 12
El inmunoensayo de fluorescencia es una técnica sensible que se puede utilizar en la medición de muchos compuestos, incluidos fármacos, hormonas y proteínas; en la identificación de anticuerpos; y en la cuantificación de antígenos como partículas virales y, potencialmente, bacterias. Facilitará la introducción de pruebas que se pueden realizar en la clínica ambulatoria o incluso en el hogar.
Los componentes críticos de un inmunoensayo: un analito, un anticuerpo y un marcador que se puede detectar.
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CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD AL BORONATO (MEDICIÓN HEMOGLOBINA GLICADA)
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INMUNOENSAYO DE FLUORESCENCIA
El inmunoensayo de fluorescencia es una técnica sensible que se puede utilizar en la medición de muchos compuestos, incluidos fármacos, hormonas y proteínas; en la identificación de anticuerpos; y en la cuantificación de antígenos como partículas virales y, potencialmente, bacterias. Facilitará la introducción de pruebas que se pueden realizar en la clínica ambulatoria o incluso en el hogar.
Debido a las importantes ventajas de la tecnología de microfluidos, los dispositivos de microfluidos proporcionan una funcionalidad única, que antes no era posible utilizando técnicas tradicionales. Durante la última década, ha habido enormes avances en microfluidos y técnicas de micro fabricación. Los dispositivos y sistemas de microfluidos se han utilizado progresivamente como herramientas de investigación versátiles en diferentes campos, incluida la ingeniería química, la biotecnología, la farmacia y la medicina.
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TECNOLOGÍA DE MICRO FLUIDOS
caracteristicas
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APLICACIONES
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TECNOLOGÍA DE MICRO FLUIDOS
- Los dispositivos de microfluidos explotan las propiedades físicas y químicas de líquidos y gases a microescala.
- Los dispositivos de microfluidos ofrecen varios beneficios sobre los sistemas de tamaño convencional.
- Los microfluidos permiten el análisis y el uso de menos volumen de muestras, productos químicos y reactivos, lo que reduce las tarifas globales de las aplicaciones. Se pueden ejecutar muchas operaciones al mismo tiempo gracias a su tamaño compacto, acortando el tiempo de experimentación.
- Los microfluidos proporcionan herramientas eficientes para múltiples áreas de investigación y más específicamente, para el análisis biológico.
- Es económico ya que no implica el uso de diversos equipos costosos.
- Análisis más rápidos debido a reacciones y/o tiempos de separación más cortos.
- Bajos consumos de reactivos.
caracteristicas
APLICACIONES
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TECNOLOGÍA DE MICRO FLUIDOS
- Dispositivos portátiles para aplicaciones en el punto de atención POCT.
- Los microsistemas ejecutan funciones que van desde la detección de toxinas hasta el análisis de secuencias de ADN o la creación de dispositivos de impresión por inyección de tinta.
- Los microfluidos tienen diversos activos: tiempo de reacción más rápido, sensibilidad analítica mejorada, control de temperatura mejorado, portabilidad, automatización y paralelización más sencilla, integración de rutinas de laboratorio en un solo dispositivo (laboratorio en un chip).
- Medición precisa, microfluidos que permiten aumentar la resolución de medición en determinadas aplicaciones.
caracteristicas
APLICACIONES
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FOTOMETRÍA DE REFLACTANCIA
La reflectancia es el fenómeno en que un espectro de la luz es reflejado por la superficie de un objeto. El grado en que esto sucede depende del material del objeto pues determinados elementos absorben cierto espectro del rango luminoso mientras reflejan otro.
La medición de analitos en fluidos biológicos mediante la reflectometría se ha usado por décadas. Los instrumentos utilizados para estas aplicaciones incluyen un reflectómetro, que es un fotómetro de filtro para medir la cantidad de luz reflejada por una muestra liquida que ha sido dispensada sobre un soporte solido granulado o fibroso.
La reflectancia difusa se produce en superficies no pulidas (superficies granuladas o fibrosas). La reflexión difusa se produce dentro de las capas y depende de las propiedades y características de las propias capas. Una sustancia coloreada absorbe la longitud de onda de su color y refleja todas las demás longitudes de onda en muchos ángulos diferentes. Por lo tanto, la cantidad de una sustancia presente puede medirse como una función indirecta de la luz reflejada.
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FOTOMETRÍA DE REFLACTANCIA
La reflectancia es el fenómeno en que un espectro de la luz es reflejado por la superficie de un objeto. El grado en que esto sucede depende del material del objeto pues determinados elementos absorben cierto espectro del rango luminoso mientras reflejan otro.
La medición de analitos en fluidos biológicos mediante la reflectometría se ha usado por décadas. Los instrumentos utilizados para estas aplicaciones incluyen un reflectómetro, que es un fotómetro de filtro para medir la cantidad de luz reflejada por una muestra liquida que ha sido dispensada sobre un soporte solido granulado o fibroso.
Reflactómetro
La reflectancia difusa se produce en superficies no pulidas (superficies granuladas o fibrosas). La reflexión difusa se produce dentro de las capas y depende de las propiedades y características de las propias capas. Una sustancia coloreada absorbe la longitud de onda de su color y refleja todas las demás longitudes de onda en muchos ángulos diferentes. Por lo tanto, la cantidad de una sustancia presente puede medirse como una función indirecta de la luz reflejada.
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FOTOMETRÍA DE REFLACTANCIA
Características de la tecnología
Los componentes electroópticos utilizados en la fotometría de reflectancia son esencialmente los mismos que los necesarios para la fotometría de absorbancia. La fotometría de reflectancia se utiliza como método de medición con sistemas químicos de película seca.
Los principales elementos de los reflectómetros incluyen una fuente de luz, normalmente una LED de larga duración de longitudes de onda específicas que son concentradas en una superficie de la muestra a través de un sistema de lentes, y la luz reflejada se mide mediante detectores.
Los reflectómetros suelen estar diseñados para medir las características físicas de las superficies, como los cambios de color en una tira reactiva. En este enfoque, puede colocarse una muestra en una tira reactiva y comparar su valor de remisión (REM) con los controles y patrones adecuados. Igual que en la fotometría, la diferencia de intensidad entre la luz emitida y la luz reflejada permite una determinación cuantitativa de la concentración de analitos específicos.
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FOTOMETRÍA DE REFLACTANCIA
Aplicaciones
Método de Medición
Aplicaciones industriales
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¡Creciendo juntos!
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Sección de Créditos
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4. Expertos Temáticos
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1. Narakeet (conversor de texto en audio). https://www.narakeet.com/
2. Speaktor (conversor de texto en audio). https://app.speaktor.com/
3. Fliki (creación de videos con IA). https://fliki.ai/
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4. Expertos Temáticos
Juan Camilo Buitrago Tellez (ingeniero Especialista de Línea)Nina Paola Lamprea Rodriguez (Especialista de Producto)
Horizontal
La muestra es adicionada directamente a la almohadilla de muestra por medio de una pipeta. Da clic en la imagen para aumentar su tamaño
Es una tecnología muy versátil, que se utiliza en diferentes aplicaciones, tanto en el ámbito home test, como por ejemplo, las pruebas de embarazo y Covid-19 ag, debido a que no es necesario reactivos ni instrumentación adicional.
Los componentes electroópticos utilizados en la fotometría de reflectancia son esencialmente los mismos que los necesarios para la fotometría de absorbancia. La fotometría de reflectancia se utiliza como método de medición con sistemas químicos de película seca.
estructura general de una tira de una prueba ad-bio HIV Ab.
En el campo clínico y científico, se utiliza en el diagnóstico in vitro humano, veterinario, microbiología, detección de toxinas en los alimentos, identificación de patógenos vegetales, detección de sustancias de abuso, farmacia y otros.
La reflectometría se utiliza comúnmente en aplicaciones industriales como un método rápido y sensible para cuantificar una amplia variedad de parámetros orgánicos e inorgánicos en agua, de alimentos, bebidas y muestras medioambientales, así como otros usos diversos, como el análisis de superficie en materiales de construcción y la cuantificación de color en productos para la piel.
Los conjugados se elegirán durante el desarrollo del flujo lateral en función de varios factores, como :
- El objetivo
- La matriz de la muestra
- El anticuerpo
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La tira es sumergida en la muestra para la reacción. Da clic en la imagen para aumentar su tamaño
Las pruebas de flujo lateral están muy extendidas en muchas industrias para las pruebas en el punto de atención. En la industria del diagnóstico médico, existen estrictos requisitos reglamentarios de fabricación, que se deben cumplir para todos los productos; siempre deben estar validados y acreditados.