Tarea nº8 - Rodríguez García Julia

Proyecto Final Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido y Trombocitopenia Neonatal Aloinmune - Control Inmunohematológico y Profilaxis -

JULIA RODRÍGUEZ GARCÍA

Tutora: Cristina Bailén García

Curso 2023 - 2024

Labortorio Clínico y BIomédico

Índice

1.

Características físicas del laboratorio

2.

Trabajo diario

3.

Técnicas

4.

Normas de seguridad

5.

EHRN y TFNA

1. CARACTERÍSTICAS FÍSICAS

1. Características físicas del laboratorio

Zonas de las que dispone:

2. TRABAJO DIARIO

2. TRABAJO DIARIO

1. Comprobar datos del paciente y centrifugar los tubos.

2. TRABAJO DIARIO

3. Programación en IH-500

2. Anotar en el diario de trasnfusiones diarias

2. TRABAJO DIARIO

4. Seroteca

- Para pacientes con intervención quirúrgica programada. - Congelar durante años.

5. Registro de petición

- ¿El paciente es nuevo? ---> Interrogación tubo/paciente.- Petición de examen. - Validación de resultados.

2. TRABAJO DIARIO

7. Archivo de petición y tubos

Petición ---> 24/72 horas Tubos ---> 1 semana en nevera

6. Distribución

¿Se va a transfundir el mismo día? ---> Distribución.

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

NEGATIVO

POSITIVO

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH

- A +/- - B +/- - AB +/- - 0 +/-

- Proceso de clasificación de la sangre. - Detección de Ag en la superficie de los hematíes. - Antisuero + Ag correspondiente ----> Complejo Ag-Ac

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH

PROCEDIMIENTO

Paso 1

Paso 2

Paso 3

Paso 4

Suspensión de hematíes al 5%

Añadimos una gota en cada microtubo

Centrifugar

Leer resutltados

10 MINUTOS 909 RPM

0,5 ML DILUYENTE 2 + 25 UL SEDIMENTO

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

GRUPO SÉRICO Y AC IRREGULARES

PROCEDIMIENTO

1. Añadir 50 ul de hematíes reactivos en los microtubos correspondientes. 2. Añadir 50 ul de suero/plasma del paciente en todos los microtubos. 3. Incubamos 10 minutos. 4. Centrifugamos. 5. Leer los resultados

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

DETERMINACIÓN DEL GENOTIPO RH Y KELL

PROCEDIMIENTO

Paso 1

Paso 2

Paso 3

Paso 4

Suspensión de hematíes al 5%

Añadimos una gota en cada microtubo

Centrifugar

Leer resutltados

10 MINUTOS 909 RPM

0,5 ML DILUYENTE 2 + 25 UL SEDIMENTO

3. TÉCNICAS DE LABORATORIO

PRUEBAS CRUZADAS

RESULTADO NEGATIVO

RESULTADO POSITIVO

NO COMPATIBLE Reacción Ag-Ac

COMPATIBLE No hay Ac del paciente contra los Ag de las células del donante

4. NORMAS DE SEGURIDAD

4. NORMAS DE SEGURIDAD

Desechar materiales en los contenedores correspondientes. Utilizar equipos de protección individual. Buena higiene de manos. Conocer las señales de emergencia.

5. EHRN Y TFNA

5.1. Introducción

INMUNOHEMATOLOGÍA ERITROCITARIA

Estudia la compatibilidad sanguínea, a partir de pruebas que reconocen el antígeno y su anticuerpo correspondiente.

• FASE PREANALÍTICA

• Muestras adecuadas.
• Peticiones claras y firmadas.
• Historia clínica de la embarazada.

• FASE ANALÍTICA

• Control de calidad de los reactivos utilizados.

5.2. Seguimiento inmunohematológico de la embarazada

EHRN

1. HEMOCLASIFICACIÓN

CLASIFICACIÓN ABO Detección de los antígenos A y B:

• Prueba directa ---> se buscan antígenos en la membrana de los glóbulos rojos.
• Prueba indirecta ---> se buscan anticuerpos en el plasma de la madre.

CLASIFICACIÓN RHDetección del antígeno D:

• Determina el uso de porfilaxis anti-D.
• Previene la EHRN.
• Si hay dudas ----> Siempre Rh negativo.

5.2. Seguimiento inmunohematológico de la embarazada

EHRN

2. DETECCIÓN/IDENTIFICACIÓN DE AC IRREGULARES

DETECCIÓN

• Ac antieritrocitarios (IgG) que cruzan la placenta.
• Anti-D, Anti-C, Anti-E...
• Prueba ---> Coombs indirecto. (3 células reactivo)

IDENTIFICACIÓN

• Determina la especificidad y relevancia clínica del Ac.
• Prueba ----> Coombs indirecto. (11 células reactivo)

5.2. Seguimiento inmunohematológico de la embarazada

EHRN

3. TITULACIÓN DE AC IRREGULARES

- Determina la concentración de un anticuerpo anti-eritrocitario mediante diluciones seriadas. - Detección de anticuerpo + Identificación de anticuerpo ---> Titulación. Identificar - Mezcla de anticuerpos Por separado Titular

5.2. Seguimiento inmunohematológico de la embarazada

EHRN

ISOINMUNIZACIÓN MATERNA POR INCOMPATIBILIDAD RH

- Madre Rh negativo con hijo Rh positivo ---> Isoinmuniación. Si los hematíes Rh positivo (bebe) llegan a la madre (Rh negativo):SISTEMA INMUNE (MADRE) ANTI-D - La isoinmunización se puede producir por:

• Parto.
• Aborto (espontáneo/provocado)
• Caida.
• Amniocentesis.

5.2. Seguimiento inmunohematológico de la embarazada

EHRN

¿QUÉ ES LA INMUNOGLOBULINA ANTI-D Y PARA QUÉ SIRVE?

- Producto derivado de la sangre que previene que los anticuerpos de la madre ataquen las células Rh positivas del feto. - Se elimina naturalmente sin efectos secundarios.- DOSIS:

• 1ª ---> Semana 28 de embarazo.
• 2ª ---> Dentro de las 72 horas después del parto.

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO

- Destrucción acelerada de los glóbulos rojos del bebé, por:

• Incompatibilidad ABO.
• Isoinmunización al Rh.

- En un 2º embarazo ----> Anti-D de la madre Hemólisis y anemia en el recién nacido.⬆ Bilirrubina ---> Ictericia

PLACENTA

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

ANÁLISIS EN MUESTRAS DE CORDÓN UMBILICAL

- Para realizar pruebas de inmunohematología en recien nacidos Sangre del cordón umbilical - ⬆ [Ac maternos] - ⬆ [Eritrocitos fetales]

- Recogida en tubos con EDTA o heparina.

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

1. HEMOCLASIFICACIÓN ABO Y RH

- En recién nacidos Determinación del grupo y Rh de forma directa. - Los glóbulos del recién nacido tienen 1/3 de sus antígenos ABO presentes Reacciones de aglutinación débiles - En recién nacidos GRUPO INVERSO

Inmadurez inmunológica del recién nacido.

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

2. COOMBS DIRECTO

- Detecta anticuerpos maternos fijados a los eritrocitos del recién nacido. - Se realiza después del parto, con sangre del cordón umbilical. - TÉCNICA ---> Gel en tarjeta (Grupo ABO + Rh + DAT) - Gel contenido en el microtubo DAT Suero de antiglobulina humana Anti-IgG + Anti-C3d

(Coombs directo)

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

2. COOMBS DIRECTO

- PROCEDIMIENTO:

1. Preparar suspensión de hematíes con diluyente 2 y sangre del bebé.
2. Dispensar una gota en cada uno de los microtubos.
3. Centrifugar.
4. Leer los resultados.

- RESULTADOS:

• Positivo: línea roja en la superficie del gel o cascada ---> SENSIBILIZACIÓN
• Negativo: sedimento compacto en el fondo del microtubo.

5.3. Seguimiento inmunohematológico del recién nacido

EHRN

2.1 EXANGUINOTRANSFUSIÓN

- Prueba Coombs directo ---> de rutina, así se evita:

• Diagnósticos tardíos.
• ⬆ nivel de bilirrubina.
• Retraso del tratamiento.
• ⬆ riesgo de exanguinotransfusiones.

- Disminuye el nivel de la bilirrubina. - Corrige la anemia. - Interrumpe el proceso de hemólisis.

- Extraer 1/2 volúmenes e intercambiarla por sangre compatible.

Ac del plasma. Hematíes hemolizados/recubiertos de Ac

5.4. APLICACIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN LA INMUNOHEMATOLOGÍA ERITROCITARIA DEL FETO Y LA MADRE

EHRN

EVALUCACIÓN DE LA SANGRE DEL PADRE ----> Ayuda a predecir el riesgo de que el hijo padezca EHRN

Dependiendo del genotipo del padre, nos encontramos dos situaciones:

Padre HETEROCIGÓTICO 50% probabilidad de expresar el antígeno

Padre HOMOCIGÓTICO 100% probabilidad de expresar el antígeno

5.5. INMUNOHEMATOLOGÍA PLAQUETARIA

TFNA

PLAQUETAS

- Participan en la cascada de la coagulación y en la formación del tampón plaquetario. - Recuento ⬇ 150.000 plaq/mm3 ----> TROMBOCITOPENIA - CAUSAS

- Inmune - No inmune

- Destrucción ⬆ - Producción ⬇ - Ambas

INMUNOHEMATOLOGÍA PLAQUETARIA

5.5. INMUNOHEMATOLOGÍA PLAQUETARIA

TFNA

TROMBOCITOPENIA DE ORIGEN INMUNE

- Paso trasnplacentario de Ac de la madre al feto. - Dos tipos de Ac

- AUTOANTICUERPOS ----> Contra Ag plaquetario de la madre. - ALOANTICUERPOS ----> Contra Ag plaquetario del hijo.

5.5. INMUNOHEMATOLOGÍA PLAQUETARIA

TFNA

TROMBOCITOPENIA FETO/NEONATAL ALOINMUNE

- Destruccion de las plaquetas del feto por aloanticuerpos maternos.

- Diagnóstico de la TFNA.

- Fisiopatología de la TFNA.

- Pruebas para el diagnóstico.

- Tratamiento de la TFNA

Gracias

¿Alguna pregunta?

GRUPO SÉRICO Y

ANTICUERPOS IRREGULARES

GRUPO SÉRICO -Plasma/suero paciente + Hematíes reactivos (A1, A2, B) AC IRREGULARES - Plasma/suero del paciente + Células (I, II, III) EN AMBOS, BUSCAMOS AC CONTRA LOS ANTÍGENOS CONOCIDOS DE LOS REACTIVOS

PLASMA MATERNO + CÉLULAS REACTIVO Resultado NEGATIVO -> No hay Ac irregulares. Resultado POSITIVO -> Si hay Ac irregulares -> Identificación.

Estudia las causas de trombocitopenia por destrucción aumentada de origen inmune.

FENOTIPO RH Y

KELL

- C - c - E - e

SISTEMA RH

- Kell(K) - Cellano (k)

SISTEMA KELL

TÉCNICA ----> detectar cual de estos Ag están en la superficie de los hematíes. GENOTIPO

FISOPATOLOGÍA

DE LA TFNA

- La madre presenta aloinmunización contra Ag de las plaquetas, debido a:

• Embarazos previos.
• Transfusiones.
• Embarazo actual.

- Estos Ac atacan al feto.

TRATAMIENTO DE

LA TFNA

- Transfusión de plaquetas de donantes fenotipados:

• No Ag contra el que se dirigen los Ac maternos.
• Frescas (-72h).
• ABO compatibles.
• CMV -
• Irradiadas.

- Administración de IgG intravenosa

- ⬆ vida de las plaquetas incomp. - ⬇ periodo de trombocitopenia.

PRUEBAS PARA

EL DIAGNÓSTICO DE LA TFNA

Estudios dirigidos a la detección e identificación de aloanticuerpos específicos anti-HPA en el suero de la madre.TÉCNICA ---> Inmunofluorescencia de plaquetas en suspesión. Plaq. madre + Suero control anti-HPA -----> Ag-Ac *

DIAGNÓSTICO

DE LA TFNA

- Al principio ----> Hijo sano de madre sana. - Trás unas horas ----> Púrpuras cutáneas en forma de petequias o equimosis en el recién nacido.

ANTICUERPOS A Y B ----> IgM ----> ❌ no cruzan la placenta. - Excepciones - Mujeres del grupo 0, con títulos ⬆ de anti-A y anti-B de clase IgG ✔︎ si cruzan la placenta ----> hemólisis.