ELECTROFORESIS

electroforesis

Paula Olmedo MorenoLucía Olivero García Sergio Mohedano Sánchez 1º B AP

5. FACTORES QUE AFECTAN A LA VELOCIDAD DE MIGRACIÓN

3. LA PREPARACIÓn del equipo

1. definición

4. uso del equipo

6. principales técnicas de electroforesis

2. equipo básico

• Fuente de alimentación
• La cubeta de electroforesis
• El soporte

Fuente de alimentación

Se encarga de suministrar la energía suficiente para que migren los componentes de la mezcla. A ella están conectadas dos electrodos:

• Cable negro: conectado al polo negativo (cátodo)
• Cable rojo: conectado al polo positivo (ánodo)

Principales técnicas de electroforesis

Preparación del equipo

1. Preparación de la muestra: intentamos conseguir lo máximo de sustancias que queremos conservar y concentrar de la muestra. Empleamos métodos de separación con centrifugación , filtración, decantación….
2. Preparación del soporte: preparamos un gel correctamente, calculando sus concentraciones, grosor y texturas correspondientes y lo disponemos en el soporte con su medio según corresponda con el producto.
3. Preparación del tampón: debemos preparar el tampón calculando sus concentraciones correspondiente, o también utilizar uno comercial.

USO DEL EQUIPO

Cuando hayamos terminado de preparar los materiales de la electroforesis, introducimos la muestra en el soporte. Si la moléculas tienen carga positiva se colocan cerca del ánodo (electrodo rojo) para que puedan emigrar hacia el cátodo (electrodo negro) y viceversa.

1. Podemos colocar la muestra en unos pocillos ( más normal) o directamente en forma de gota sobre el soporte. Son cantidades muy pequeñas y debemos controlarlas siempre.
2. Seleccionamos los parámetros eléctricos, el tiempo y lo ponemos en marcha Debemos de tener en cuenta siempre las programaciones de alimentación por cada tipo de electroforesis
3. Las moléculas de la muestra empiezan a desplazarse por el medio formando bandas (cada banda corresponde a una sustancia) . Una vez que las bandas hayan terminado de formarse, donde se diferencian perfectamente decimos que ela electroforesis ha tenido una buena resolución.
4. Después se realiza un revelado, que es mostrar las bandas separadas de la muestra. Normalmente es un colorante y después un lavado, pero depende del tipo de electroforesis.
5. Después del revelado realizamos la lectura de los datos, que según la técnica puede ser una cuantificación por espectrofotometría, densitometría, etc.

WEBGRAFÍA/BIBLIOGRAFÍA

• https://prezi.com/p/srjjthucehmp/electroforesis-cellogel/#:~:text=Este%20tipo%20de%20electroforesis%20se,en%20el%20que%20se%20encuentre.
• Apuntes Tema 7. Técnicas de separación, TGL

El soporte

Matriz donde se deposita la muestra a analizar. Hay dos tipos:

• No restrictivo: separación en función de la carga eléctrica (ej. acetato de celulosa)
• Restrictivo: separación en función de la carga eléctrica y el tamaño de las moléculas (ej.gel de agarosa).

La cubeta de electroforesis

Está formada por:

• Dos recipientes: donde se deposita una solución de tampón
• Un puente: sobre el que se coloca el soporte, donde se conectan los electrodos.

Factores que afectan a la velocidad de migración

• Forma y tamaño de las partículas: mientras mayor tamaño tenga la partícula, más fricción tiene, por lo tanto, disminuye su velocidad de migración. Mientras más esféricas las moléculas, menos superficie tiene, haciendo posible una mejor separación de las moléculas del mismo tamaño y carga.
• Soporte: responsable de tres fenómenos que retiene la migración:

- Adsorción- Retención específica de las moléculas de la muestra sobre el soporte.- Electroendosmosis (EEO): en soportes no restrictivos en los que aparecen cargas negativas por estar en contacto con una disolución iónica.- Tamizado molecular: se debe al tamaño del poro de los soportes, separando las moléculas según su tamaño

• Tampón: para mantener el pH constante, disminuir los efectos de la electrólisis, mantener una fuerza iónica adecuada y mantener una carga neta constante.
• Campo eléctrico: gradiente de potencial que moviliza las moléculas cargadas. Los factores que influyen son la diferencia de potencial (voltios), intensidad de corriente (amperios) y la resistencia (Ohmios)
• Tiempo de electroforesis: se combina el voltaje con el tamaño del soporte. Aumentando el tiempo,aumentamos las distancias de separación entre moléculas, migrando a distintas velocidades.