MAPA MENTAL EDUCACIÓN

TÉCNICAS HISTOENZIMÁTICAS

Daniel Romero González

MÉTODO DE CAPTURA SIMULTÁNEA

Visión directa al microscopio óptico

PPR opaco, coloreado e insoluble

PROCESO DE TINCIÓN DE ENZIMAS

Según el tipo de producto primario de reacción (PPR) resultante

Metal pesado

Reactivo de captura o cromóforo

PPR NO ES opaco, coloreado ni insoluble

MÉTODO POST COPULATIVO

Colorante

Cromógeno

Las enzimas pueden pueden ponerse de manifiesto al actuar como catalizadoras de reacciones químicas. Para ello, se añade a la enzima un sustrato, produciéndose una reacción enzimática en la que:

• Se liberan electrones
• El sustrato (Sustancia soluble e incolora) se convierte en un complejo insoluble y coloreado, visible al microscopio.

TIPOS de TÉCNICAS HE

Enzima

Cromógeno

Visión al microscopio óptico

Producto final de reacción (PFR)

Técnicas histoenzimáticas

Daniel Romero González

Acetilcolinesterasa (Ache)

NADH

ATPasa a ph 4.5 y 9.4

TIPOS

Fosforilasa

Citocromo c oxidasa (COX)

Deshidrogenasa succínica

Citocromo c oxidasa (COX)

Fundamento

Objetivo

Es el componente terminal de la cadena respiratoria mitocondrial, cataliza la transferencia de electrones del citocromo c reducido al oxígeno.

Se utiliza en la caracterización de las miopatías mitocondriales. Es negativa en deficiencia de complejo IV.

NADH

Objetivo

Útil en biopsias musculares en el diagnóstico de “central core”, fibras en tiro al blanco y enfermedades mitocondriales.

Fundamento

Es una enzima oxidativa mitocondrial, la cuál tiñe solamente las mitocondrias normales dando lugar a una reacción punteada distribuida uniformemente en las fibras

ATPasa a ph 4.5 y 9.4

Objetivo

Es la técnica de elección para evaluar en muestras de biopsia de músculo esquelético el tamaño, la distribución y el número de fibras tipo I y tipo II ya que se mantiene aún en fibras atróficas e independientemente de la edad del individuo, del estado de actividad y nutricional o en condiciones patológicas de las miofibrillas.

Fundamento

La adenosin-trifosfatasa miofibrilar dependiente de calcio es una enzima que forma parte de la molécula de miosina. La muestra se preincuba en un medio ácido y otro alcalino, lo que produce reacciones inversas, así, a pH 9.4 las fibras tipo I son claras y a ph 4.5 son oscuras.

Miofosforilasa o glucógeno fosforilasa

Objetivo

Fundamento

Permite distinguir fibras musculares tipo I y II y subtipos. La reacción es negativa en la enfermedad de McArdle (deficiencia de miofosforilasa).

Es una enzima del sarcoplasma, la cuál cataliza la escisión de un enlace glucosídico por acción de una molécula de fosfato.

Acetilcolinesterasa (Ache)

Objetivo

Detección de la enfermedad de Hirschsprung (enfermedad congénita en la que faltan células del sistema nervioso de la pared del colon).

Reacción fisiológica de acetilcolina

Fundamento

Es la enzima más comúnmente usada en este tipo de técnicas. Esta cataliza la hidrólisis de la acetilcolina para dar lugar a colina y acetato, la cual desempeña un papel fundamental en el sistema nervioso central, más concretamente, en la función de las uniones neuromusculares periféricas.

Deshidrogenasa succínica

Objetivo

Útil en biopsias musculares en el diagnóstico de “central core”, fibras en tiro al blanco y enfermedades mitocondriales.

Fundamento

Es una enzima oxidativa mitocondrial, la cuál tiñe tanto mitocondrias normales como anormales dando lugar a una reacción punteada distribuida uniformemente en las fibras