RETOS

Mª TERESA CHECA MARTÍN

#ACC-SPE

DIARIO DEMISIÓN

ETAPAS DE SPE

TERMINOLOGÍA DE SPE

¿QUÉ ES LA SPE?

RETO 1

• RESULTADOS

• PROCESO DE SPE QUE SE LLEVA A CABO

• OBJETIVO

DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN MÉTODO DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA PARA LA DETERMINACIÓN DE PLAGUICIDAS CATIÓNICOS (CUATS) EN ALIMENTOS

RETO 2

4. ¿Por qué se adiciona hexano? ¿Qué tipo de extracción se está realizando en esta parte del protocolo? Justifica y razona las respuestas.

3. ¿Por qué se ajusta el pH antes de la SPE? ¿Por qué se eluye a pH 2,0? Justifica y razona las respuestas.

2. ¿Qué tipo de cartucho de SPE se utiliza? ¿Qué propiedades tiene? ¿Cómo será́ su interacción con el analito? ¿Es selectivo? Justifica y razona las respuestas.

1. ¿Cuál es la concentración de antibiótico en la muestra de carne inicial expresada en μg/Kg y sabiendo que el porcentaje de recuperación de todo el proceso es del 50%?

RETO 3

8. Según las condiciones cromatográficas, ¿la separación del analito se lleva a cabo en fase reversa o en fase normal? ¿Crees que el modo cromatográfico empleado es el adecuado? Justifica y razona las respuestas.

7. ¿Qué tipo de detector se emplea en este método? ¿Es adecuado para el tipo de analitos? ¿Qué otro detector podría emplearse para la detección y cuantificación de los compuestos? Justifica y razona las respuestas.

6. ¿Por qué se adiciona orto-ftaldialdehido (OPA) a la muestra antes de inyectarla en el cromatógrafo? ¿Qué función tiene este compuesto? Justifica y razona las respuestas.

5. ¿Se produce preconcentración en alguna etapa del proceso? Justifica y razona las respuestas.

RETO 3

MATERIALES

VIABILIDAD

VENTAJAS

PROBLEMAS

PROTOCOLO SPE PARA DETERMINAR AFLATOXINA M1 EN LECHE

RETO 4

La alícuota se purifica por extracción en fase sólida utilizando un cartucho de tipo MAX de 200 mg. Este se acondiciona 1º con 2 mL de agua, seguido de 2 mL de acetonitrilo:agua (3:1, v/v) a pH 9,0. Después, se carga la muestra a un flujo de 1 mL/min, y después se pasan 5 mL de agua por el cartucho de extracción para eliminar las impurezas. El cartucho se deja secar a vacío durante 5 min y finalmente se lleva a cabo la elución del analito con 4 mL de acetonitrilo acidificado a pH 2,0 con ácido fórmico.

El extracto purificado se lleva a sequedad por corriente de nitrógeno y se reconstituye en 300 μL de fase móvil y se hace reaccionar con orto- ftaldialdehido (OPA). El producto resultante se inyecta en un cromatógrafo de líquidos acoplado a un detector de fluorescencia, obteniendo el cromatograma que se muestra en la imagen. Tras el análisis, el área obtenida se interpola un su calibrado correspondiente y se obtiene una concentración de antibiótico de 10 ng/mL.

En un laboratorio de control de calidad de alimentos se lleva a cabo la determinación de un antibiótico en una muestra de carne. Se pesan 2 g de carne picada y homogenizada, que se mezclan con 10 mL de acetonitrilo.Se agita 5 min en ultrasonidos y después se centrifuga 10 min a 6000 rpm. El sobrenadante se recoge en un tubo falcon, pero el residuo sólido vuelve a ser sometido a una 2ª extracción con 5 mL de acetonitrilo:agua (3:1, v/v), se agita 5 min en ultrasonidos y se centrifuga 5 min a 6000 rpm. El sobrenadante resultante se junta con el 1º recogido en el tubo falcon y el residuo sólido se descarta. Luego se añaden 20 mL de hexano en el tubo falcon, se agita y se añade la mezcla a un embudo de decantación, el cual se vuelve a agitar y se deja reposar. Tras unos minutos, se observa la separación de fases, se descarta la fracción de hexano y se recupera el resto. De lo recuperado se toma una alícuota de 10 mL y se ajusta a pH 10 con disolución de amoníaco.

En este caso vamos a determinar la cantidad de aflatoxinas M1 que nos encontramos en una muestra de leche. Lo 1º que tenemos que hace es preparar la muestra que mas tarde vamos a cargar en el cartucho.- Pesamos 50 ml de leche - Se calienta a una temperatura de 80ºC en un baño de agua termoregulable. - La aflatoxina M1 se eluye usando una columna de extracción de fase sólida con el tipo de cartucho C18, luego se lava la columna con una solución acetonitrilo:metanol.- La aflatoxina M1 se extrae con cloroformo y se lleva a sequedad por rotaevaporación.Derivatización:- Al extracto seco se le añade hexano y se agitó en vortex un minuto, - Luego se añaden ácido trifluoroacético (TFA) y se vuelve a agitar un minuto y se colocó en baño térmico. - Posteriormente se evaporó con nitrógeno y se resuspendió en 500 μL de la fase móvil para su análisis por HPLC. Una vez tenemos la ecuación de la recta obtenida en la curva de calibrado, podremos determinar la cantidad de aflatocinas m1 que tiene la muestra.Fase móvil usada -> agua, acetonitrilo y metanol.