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Marcadores Moleculares

Karla Baca Muñoz

Created on February 7, 2024

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Transcript

MARCADORES MOLECULARES

¿Qué son?

Son biomoléculas que están relacionadas a un rasgo genético.Nos permiten identificar polimorfismos entre individuos. Pueden ser caracteres morfológicos, proteínas, o ADN.

Polimorfismo

Un lugar en la secuencia de ADN donde existe una variación. Pueden ser cambios de una sola base, como una C en vez de una T, o pueden ser algo más complejo, como la presencia o ausencia de un tramo entero de ADN (alteraciones en el número de copia).

Polimorfismo

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Littorina saxatilis

Clasificación

Marcadores Moleculares

Genotípicos/Moleculares

Fenotípicos

Amplificación (PCR)

Restricción-Hibridación

No Específica: RAPDs, AFLPs

MorfológicosBioquímicos (Isoenzimas)

Específica: SSRs-ISSR

DIFERENCIAS

Fenotípicos
Genotípicos

Con influencia del medioPoco informativo Complicados y subjetivos Cantidad limitada Baja cobertura del genóma Caracteres de madurez

Sin influencia del medio Muy informativos Sencillos y objetivos Cantidad ilimitada Amplia cobertura del genoma Análisis en fases tempranas

RFLPs

Los RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism) se basan en las diferencias que presentan los fragmentos de ADN después de una digestión con enzimas de restricción.Pueden basarse en la mutación de uno o varios nucleótidos, o en inserciones o delecciones, dentro del sitio de restricción .

Marcadores basados en amplificaciones No específicas

Se basan en amplificar regiones del genoma con cebadores no específicos. Se obtienen marcadores sin la necesidad de conocimientos previos, aunque no son específicos de cierto locus.

RAPDs

Los RAPDs (Random Amplification of Polymorphic DNA) se basan en amplificaciones al azar del genoma con cebadores muy cortos (10-12 nucleótidos). El polimorfismo se basa en presencia o ausencia de bandas.

AFLPs

Los AFLPs (Amplified Fragment Length Polymorphism) se basan en la digestión del genoma con enzimas de restricción y la amplificación posterior de una selección de los fragmentos. Para amplificar los diferentes fragmentos se recurre a una ligación de secuencias conocidas (adaptadores) a todos los fragmentos y luego se realizan amplificaciones con cebadores localizados en estas secuencias.

Marcadores basados en locus específicos

Se sabe a qué locus pertenece cada uno. El mayor problema de este tipo de marcadores, es que en un principio eran muy difíciles y costosos de identificar, sobre todo en especies de las que no se tenía información previa, como secuencias o mapeos genéticos.

SSR

Los microsatélites son secuencias cortas (2 a 6 b) repetidas en tandem (3-50 veces). Se encuentran repartidos por todo el genoma, tanto en regiones génicas como intragénicas. A los marcadores basados en diferencias en el numero de repeticiones, se les conocen como SSR (Short Sequence Repeat), STR (Short Tandem Repeat), o microsatélites.

ISSR

Los ISSRs (inter-simple sequence repeat) se basan en la amplificación del genoma utilizando cebadores que contienen regiones repetitivas tipo microsatélite. El polimorfismo es la existencia del amplificado y su tamaño.

CAPs

Los CAPs (cleaved amplified polymorphic sequences) son como los RFLPs pero analizados mediante PCR. Se basan en la amplificación de una región concreta del genoma.

SNPs

Los SNPs (single-nucleotide polymorphism) son polimórfismos de la identidad de un único nucleótido. A diferencia de los RFLPs o CAPs, en este caso conocemos exactamente el cambio. Si el cambio es ausencia/presencia de una o más bases seconoce como delección o insercón (indel). Cuando se contempla tanto la sustitución como la inserción/delección seconoce como SNVs (Single nucleotide variation).

RAPDs/SCAR

A partir delos RAPDs se pueden clonar y secuenciar las bandas polimórficas, y transformarlos en un nuevo marcador específico: SCAR (Sequenced Characterized Amplified Region Marker).

Marcadores DE ADN MITOCONDRIAL

Se basa en la amplificación de un fragmento del ADN mitocondrial, y se observan las bandas en un gel.Gracias a que está ligado al sexo, por herencia uniparental (materna), puede brindar información distinta y complementaria a la que ofrecen los marcadores de ADN nuclear.

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