ESQUEMA CORREGIDO

COLORANTES

Simple

Combinada

ANA RODRÍGUEZ CLAVIJO

Progresiva

Origen

Regresiva

Procedimientos de coloración

Grupos auxocromos y apetencia tisular

Clasificación de los colorantes según su:

Directa

Indirecta

Grupo cromóforo

Terminal

TÉCNICAS DE COLORACIÓN

Finalidad

En bloque

Físicos

Hematoxilinas

Nuclear

Mecanismos generales de tinción

Químicos

Otros

Técnicas específicas

Físico-Químicos

Eosina

Citoplasmática

Naranja G

De conjunto

Regresiva

1. Se sobrecolorea 2. Se elimina el exceso de colorante por diferenciación (proceso controlado por microscopio).

Azocarmín

COMBINADA: Se utilizan 2 o más colorantes ácidos y básicos.

C.SIMULTÁNEA

C.SUCESIVAS

Se usan todos los colorantes a la vez (tinción Pancrómica, se produce la actividad de los colorantes neutros). - Azul de anilina-Naranja G

Se usan varios colorantes, uno tras otro sin mezclarlos (tinción Panóptica, con colorantes neutros). - May Grünwald-Giemsa

Simple

- Se produce por un colorante simple que tiñe el tejido en tonos variables de un mismo color. - Sólo interviene la afinidad particular del tejido por el colorante. - Son sencillas pero poco selectivas.

Azul de metileno

Progresiva

Se deja actuar el colorante hasta que la coloración alcanza la intensidad deseada. Se lleva el control exacto de los tiempos y el punto exacto de tinción se controla con el microscopio.

Orceína

INDIRECTA: Necesita mordiente (aumenta la fijación selectiva de los colorantes).

EN 2 TIEMPOS

EN 1 TIEMPO

El tratamiento del tejido con el colorante y el mordiente o acenturador se hace simultáneamente en una misma solución, que recibe el nombre de laca. -Hematoxilina de Carazzi

El colorante y el mordiente o acentuador actúan por separado. -Hematoxilina de Regaud

SEGÚN SU GRUPO CROMÓFORO

Colorante natural de rojo púrpura. Se extrae de cochinillas hembras secadas al calor. Tiñe las mismas estructuras que las lacas de hemateína.

Carmín

Con él son posibles todas las fijaciones. El núcleo se tiñe de rojo vivo. Muy útil en coloraciones del conjuntivo azules para resaltar los núcleos.

Colorante de carga positiva. Colorea la cromatina, por lo que se usa para estudiar los cromosomas.

Rojo neutro

Safranina

Fucsina

Se utilizan la básica y la ácida para teñir núcleos.También se usan para teñir sustancias extracelulares.

FÍSICOS: Están ligados a las propiedades de disolución e impregnación del colorante sobre el tejido.

IMPREGNACIÓN

DISOLUCIÓN

El colorante es más soluble en el tejido que el disolvente, por lo que pasa del medio al tejido (tinción de lípidos).

El colorante por su gran volumen molecular o por una precipitación selectiva en forma de agregados insolubles, queda atrapado entre la malla de células y fibras que forman los tejidos.

Sudán III

Sales de plata

Directa

Existe verdadera afinidad entre el colorante y la sustancia a colorear. No necesita mordiente.

Eosina

Citoplasmática

Permite el estudio de núcleos + Estructuras citoplasmáticas. No hay coloraciones selectivas de este tipo (el ácido acético mejora el contraste).

ARTIFICIALES

NATURALES

• La mayoría derivan de la anilina.

• También derivan de la destilación de la hulla.

• Constituyen la base de muchas coloraciones histológicas.

• Son escasos.

• Se obtienen como extractos a partir de plantas o insectos.

• Se usan mucho es histotecnología de rutina.

VS

TIPOS

TIPOS

- Azul de metileno- Orange G - Azul de anilina

Citoplasmático: - Safranina - Orceína

Nuclear: - Hematoxilina - Carmín

En bloque

El tejido se tiñe en fresco o inmediatamente después de la fijación, realizando después la inclusión y el corte. Es la base de la IHQ ultraestructural.

Fisico-químicos

Se basan en la formación de uniones intermoleculares por atracción electrostática o por fuesza de tensión superficial.

Hematoxilinas: Componente natural obtenido de una leguminosa (palo del campeche). Se encuentra como cristales solubles en agua o alcohol. Para ser empleada como un colorante debe ser oxidada exponiéndose al aire o luz para convertirla en hemateína, que colorea de forma muy activa.

La más usada. Coloración nuclear de rutina. Es regresiva, por lo que requiere diferenciación ácida para obtener intensidad de coloración. Se añade ácido acético glacial para aumentar la especificidad de coloración nuclear.

De Harris

De Mayer

Muy selectiva para colorear la cromatina nuclear. Es progresiva, por lo que no requiere diferenciación. Muy apropiada para IHQ (intraoperatorias).

VS

De conjunto

LO VEREMOS EN EL TEMA 8

Químicos

Se produce por una reacción química entre el colorante y el tejido, formándose un nuevo cromógeno.

Nuclear

La mayoría de coloraciones contienen un colorante que tiñe específicamente el núcleo. Para ello se usan colorantes básicos con apetencia por los grupos fosfóricos del ADN, con carga negativa (auxocromos básicos). Naturales: Carmín, Safranina y Hematoxilina. Artificiales: Verde de metileno, Fucsina básica y Rojo nuclear.

Naranja G

- Buen colorante del citoplasma (lo colorea de naranja) - Ácido - Soluble en agua.

TOPOGRÁFICAS

ESTRUCTURALES

HISTOQUÍMICAS

Dan una visión en conjunto de las estructuras y de la arquitectura. Son coloraciones de rutina.

Ponen en evidencia los componentes íntimos de ciertas estructuras tisulares como fibras elásticas, de reticulina, núcleos...

Ponen de manifiesto determinadas funciones químicas como glucógeno, lípidos, pigmentos, minerales...

• Hematoxilina

CITOLÓGICAS

ULTRAESTRUCTURALES

Permiten el estudio íntimo de las estructuras celulares.

Ponen de manifiesto las estructuras de microscopía electrónica como: aparato de Golgi, mitocondrias...

• Eritrosina naranja
• Azul de toluidina
• Papanicolau
• Azocarmín

Terminal

La intensidad del color no depende del tiempo de actuación del colorante.

Eosina

Pertenece a las fluoresceínas. Ácido débil. Tiñe de rojo fuerte: citoplasma, t.conjuntivo y fibras de colágeno. Se debe diferenciar con agua para que no penetre en la glicerina.

Moléculas básicas que tiñen estructuras ácidas (basófilas por su apetencia por colorantes básicos). Tiñen los ácidos nucleicos.

Básicos

Colorean por mecanismos físicos, porque son solubles a la sustancia que tiñen.

Son sales cuya propiedad colorante va unida tanto al colorante básico como al ácido. Tiñen las partes ácidas de un color y las básicas de otro.

Indiferentes

Neutros

Ácidos

Moléculas ácidas que tiñen estructuras básicas (acidófilas por su apetencia por colorantes ácidos).Tiñen el citoplasma.

• Fucsina básica

• Azul de metileno

• Azul de toluidina

• Lacas de hematoxilina

• Verde de metileno

• Eosina

• Fucsina ácida

• Naranja ácida

• Verde brillante

• Eritrosina

• Impregnación argéntica

• Sudán

• Eosinato

• Azul de metileno

• Panóptico rápido (Giemsa)