Hemoglobina libre en plasma
por espectrofotometría directa
Romero Alvarez Brenda Dayana 3IM5 Producto final
EMPEZAR
Índice
Principio del método y significado clínico
Materiales
Resultados
Tutorial
Procedimiento
Fundamento
Referencias
Conclusión
SECCIÓN 01
Principio del método y significado clínico
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud1,5,6. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
Fundamento
Este método espectrofotométrico directo para el dosaje de Hb libre plasmática denominado polinomio empírico, fue desarrollado por Fairbanks está basado en la medida de la absorbancia en tres longitudes de onda en un espectrofotómetro UV/ Vis. El cálculo de la concentración de hemoglobina libre se realiza con la siguiente ecuación:Hb libre = Factor1 x Abs415 - Factor2 x Abs450 - Factor3 x Abs70 La prueba de Hb libre es un análisis de sangre que mide el nivel de Hb en el plasma, fuera de los eritrocitos. Esta determinación es esencial para diagnosticar y monitorear la hemólisis intravascular la lectura de la absorbancia de la muestra a 415 nm corresponde a uno de los picos del espectro de absorción de la oxihemoglobina. Para minimizar la interferencia por la bilirrubinemia se le sustrae un término que
incluye la absorbancia a 450 nm y para compensar
por la turbidez se le sustrae otro término que incluye
la absorbancia obtenida a 700 nm.
Mareriales
- Solución madre: CO3 Na2 1 g/dL. Estabilidad: 1 año a temperatura ambiente.
- Solución de trabajo: CO3 Na2 10 mg/dL.
Reactivos
- Espectrofotómetro Beckman DU® 520. Mide la absorbancia y la transmitancia en todo el rango UV-Vis (190 a 1100 nm +/- 1 nm). Ancho de banda espectral: <4.5 nm
Equipamiento
Procedimiento
Se enciende el espectrofotómetro y se deja estabilizar.
Leer la absorbancia en las siguientes longitudes de
onda: 415, 450 y 700 nm, utilizando como blanco la
solución de trabajo de CO3
Na2 10 mg/dL. Para el cálculo de la Hb libre medida se aplica la ecuación.
Se prepara la solución de trabajo diluyendo 1/100
la solución madre, para obtener una concentración
final de 10 mg/dL de CO3
Na2 Dilución de la muestra: 1 parte de plasma + 10 partes de CO3 Na2: 500 µl de plasma en 5 ml de CO3 Na2 10 mg/dL.
+ info
La concentración de Hb libre final se obtiene a partir este dato de Hb libre medida, utilizando la ecuación de la recta obtenida en la calibración.
+ info
Calibración
Para realizar la curva de calibración se utiliza un estándar comercial o, en su defecto, una muestra de sangre entera anticoagulada con EDTA de la corrida del día, con una concentración cercana a 10 g/dL, medida en el contador hematológico Sysmex XN-1000. Se realizan 6 diluciones por duplicado.
Diluciones seriadas para la calibración.
A partir de esta solución de 100 mg/dL de Hb se realizan las diluciones seriadas.Se procesan todas las diluciones por duplicado
como muestras siguiendo el procedimiento descripto. Con las lecturas de las absorbancias se calculan las concentraciones de Hb libre medidas. Se grafica la concentración de Hb teórica de las diluciones vs la concentración de Hb libre medida. Por el método de regresión lineal se obtiene la ecuación de la recta que se utilizará para calcular la concentración final de hemoglobina libre.
Curva de calibración para Hb libre en plasma.
Para el cálculo de la concentración de Hb libre final se aplica la ecuación de la recta obtenida:
+ info
Procesando una serie de muestras de plasma de donantes aparentemente sanos (n=56) los autores obtuvieron una media de 2.8 mg/dL con un desvío estándar (SD) de 2.2 mg/dL. La linealidad del ensayo fue excelente en el rango de importancia clínica:
8-200 mg/dL.
Tutorial
Vídeo
De la determinación de la hemoglobina con el uso del espectofotómetro
Conclusión
El espectofotómetro lo vimos en clase el cual tuvimos varias prácticas en el cual podemos decir que es un instrumento de laboratorio utilizado para medir la capacidad de luz absorbida o transmitida por muestra diferentes longitudes de onda. Este es mas utilizado en los laboratorios de clínicos además determina la concetración de una sustancia en una muestra, identifica también los compuestos quimicos.En este procedimiento de hemoglobina libre de plasma podemos ver que ocupamos el espectofotrometro para medir en la absorbancia en múltiples longitudes de onda se han utilizado para determinar los niveles de Hb libre, el cual tambien podemos realizar una curva tipo, e igualmente una tabla en donde podemos ver la concentracion y la absorvancias de las muestra aqui tambien usamos las diluciones en este caso el este procedimiento fue dilución seriada, y con esto podemos hacer las absorvancias y asi con estos datos poder realizar la curva tipo.
Referencias
- Vista de Hemoglobina libre en plasma por espectrofotometría directa. (s/f). Recuperado el 20 de diciembre de 2023, de Com.ar website: https://revistahematologia.com.ar/index.php/Revista/article/view/300/352
- (S/f). Recuperado el 20 de diciembre de 2023, de http://file:///C:/Users/Lap/Downloads/Dialnet-HemoglobinaLibreEnPlasmaPorEspectrofotometriaDirec-7863817.pdf
- Rosa, C. M., Mereles, S. M., Rigacci, M. F., & Colimodio, D. C. (2020). Hemoglobina libre en plasma por espectrofotometría directa. Revista Hematología, 24(2), 91–96. Recuperado de https://revistahematologia.com.ar/index.php/Revista/article/view/300
- Pipetear:, 3. (s/f). Determinación cuantitativa de hemoglobina. Recuperado el 20 de diciembre de 2023, de Com.mx website: https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001230%20HEMOGLO.pdf
- 8miri [@8miri28]. (2012, febrero 9). Determinación de hemoglobina, espectrofotómetro. Recuperado el 20 de diciembre de 2023, de https://www.youtube.com/watch?v=hOau9k2oyI8
GeHemoglobina libre en plasma por espectrofotometría lo
Brenda R
Created on December 19, 2023
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Hemoglobina libre en plasma por espectrofotometría directa
Romero Alvarez Brenda Dayana 3IM5 Producto final
EMPEZAR
Índice
Principio del método y significado clínico
Materiales
Resultados
Tutorial
Procedimiento
Fundamento
Referencias
Conclusión
SECCIÓN 01
Principio del método y significado clínico
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud1,5,6. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
Fundamento
Este método espectrofotométrico directo para el dosaje de Hb libre plasmática denominado polinomio empírico, fue desarrollado por Fairbanks está basado en la medida de la absorbancia en tres longitudes de onda en un espectrofotómetro UV/ Vis. El cálculo de la concentración de hemoglobina libre se realiza con la siguiente ecuación:Hb libre = Factor1 x Abs415 - Factor2 x Abs450 - Factor3 x Abs70 La prueba de Hb libre es un análisis de sangre que mide el nivel de Hb en el plasma, fuera de los eritrocitos. Esta determinación es esencial para diagnosticar y monitorear la hemólisis intravascular la lectura de la absorbancia de la muestra a 415 nm corresponde a uno de los picos del espectro de absorción de la oxihemoglobina. Para minimizar la interferencia por la bilirrubinemia se le sustrae un término que incluye la absorbancia a 450 nm y para compensar por la turbidez se le sustrae otro término que incluye la absorbancia obtenida a 700 nm.
Mareriales
Reactivos
Equipamiento
Procedimiento
Se enciende el espectrofotómetro y se deja estabilizar. Leer la absorbancia en las siguientes longitudes de onda: 415, 450 y 700 nm, utilizando como blanco la solución de trabajo de CO3 Na2 10 mg/dL. Para el cálculo de la Hb libre medida se aplica la ecuación.
Se prepara la solución de trabajo diluyendo 1/100 la solución madre, para obtener una concentración final de 10 mg/dL de CO3 Na2 Dilución de la muestra: 1 parte de plasma + 10 partes de CO3 Na2: 500 µl de plasma en 5 ml de CO3 Na2 10 mg/dL.
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La concentración de Hb libre final se obtiene a partir este dato de Hb libre medida, utilizando la ecuación de la recta obtenida en la calibración.
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Calibración
Para realizar la curva de calibración se utiliza un estándar comercial o, en su defecto, una muestra de sangre entera anticoagulada con EDTA de la corrida del día, con una concentración cercana a 10 g/dL, medida en el contador hematológico Sysmex XN-1000. Se realizan 6 diluciones por duplicado.
Diluciones seriadas para la calibración.
A partir de esta solución de 100 mg/dL de Hb se realizan las diluciones seriadas.Se procesan todas las diluciones por duplicado como muestras siguiendo el procedimiento descripto. Con las lecturas de las absorbancias se calculan las concentraciones de Hb libre medidas. Se grafica la concentración de Hb teórica de las diluciones vs la concentración de Hb libre medida. Por el método de regresión lineal se obtiene la ecuación de la recta que se utilizará para calcular la concentración final de hemoglobina libre.
Curva de calibración para Hb libre en plasma.
Para el cálculo de la concentración de Hb libre final se aplica la ecuación de la recta obtenida:
+ info
Procesando una serie de muestras de plasma de donantes aparentemente sanos (n=56) los autores obtuvieron una media de 2.8 mg/dL con un desvío estándar (SD) de 2.2 mg/dL. La linealidad del ensayo fue excelente en el rango de importancia clínica: 8-200 mg/dL.
Tutorial
Vídeo
De la determinación de la hemoglobina con el uso del espectofotómetro
Conclusión
El espectofotómetro lo vimos en clase el cual tuvimos varias prácticas en el cual podemos decir que es un instrumento de laboratorio utilizado para medir la capacidad de luz absorbida o transmitida por muestra diferentes longitudes de onda. Este es mas utilizado en los laboratorios de clínicos además determina la concetración de una sustancia en una muestra, identifica también los compuestos quimicos.En este procedimiento de hemoglobina libre de plasma podemos ver que ocupamos el espectofotrometro para medir en la absorbancia en múltiples longitudes de onda se han utilizado para determinar los niveles de Hb libre, el cual tambien podemos realizar una curva tipo, e igualmente una tabla en donde podemos ver la concentracion y la absorvancias de las muestra aqui tambien usamos las diluciones en este caso el este procedimiento fue dilución seriada, y con esto podemos hacer las absorvancias y asi con estos datos poder realizar la curva tipo.
Referencias