Exposé Electrophorèse Native et SDS-PAGE

éLECTROPHORESE DES PROTÉINES SÉRIQUES EN CONDITIONS NATIVES éLECTROPHORESE SDS-PAGE

Par Julie & Léo

Sommaire

1. Electrophorèse des protéines Native
2. Electrophorèse SDS-PAGE

• Principe
• Objectif
• Protocole
• Exemple de resultats

• Principe
• Objectif
• Protocole
• Exemple de resultats

Conclusion

Electrophorèse des protéines Native

(Ou NATIVE-PAGE)

Définitions

Migration de particules chargées électriquement sous l'effet d'un champ électrique afin de les séparer. Protéines à l'état natif, c'est à dire, sous leurs formes fonctionnelles (forme tridimensionnelle) Protéines contenues dans le sérum ou le plasma sanguin (Ex: Albumine, globuline,..)

• Electrophorèse :
• Protéines native :
• Protéines sériques :

Electrophorèse des protéines Native

(Ou NATIVE-PAGE)

Principe

Technique de séparation des protéines du sérum sanguin en fonction de leur :

• Taille
• Forme
• Charge
• Poids moléculaire

Structure quaternaire de l'Hémoglobine

Tout en préservant leur structure tridimensionnelle native.

Electrophorèse des protéines Native

(Ou NATIVE-PAGE)

Objectif

Cette technique est utilisé comme examen de biologie médicale dans le but de :

• d'identifier les protéines sériques
• Les quantifier
• Repérer les anomalies du sérum sanguin
• Suivre l'évolution de certaine maladie

Electrophorèse des protéines Native

(Ou NATIVE-PAGE)

Protocole

I. Préparation des gels :

• Gel d'empilage
• Gel de séparation

Même composition, seul la concentration en acrylamide change

II. Préparation de l'échantillon

III. Dépot de l'échantillon dans le puit

IV. Lancer l'électrophorèse

V. Traitement des résultats

Electrophorèse des protéines Native

(Ou NATIVE-PAGE)

Exemple de résultats

Electrophorèse de protéines dénaturée

(Ou SDS-PAGE)

Principe

Technique de séparation des protéines en fonction de leur :

• Poids moléculaire

Pour permettre cela les protéines sont dénaturée par le détergent SDS.

Détergent SDS

Partie donnant la charge négative

Partie se liant aux protéines

Electrophorèse de protéines dénaturée

(Ou SDS-PAGE)

Objectif

Cette technique est la plus utilisé pour analyser qualitativement les mélanges de protéines. Elle est utilisée pour :

• Déterminer le poids moléculaire
• Séparer des protéines

On peut au final purifier un mélange protéique pour n'avoir que la protéine recherchée

Electrophorèse de protéines dénaturée

(Ou SDS-PAGE)

Protocole

Même protocole que pour NATIVE-PAGE sauf que l'échantillon est traité avec le SDS avant d'être déposé sur gel.

Electrophorèse de protéines dénaturée

(Ou SDS-PAGE)

Exemple de résultats

Marqueur de taille

échantillon épuré

Marqueur de taille

échantillon complexe (brute)

échantillon purifié

1 Bande = 1 chaine péptidique

CONCLUSION

Electrophorèse de protéines dénaturée

Electrophorèse des protéines Native

Permets l'analyse d'une protéine spécifique en :

• Déterminant son poids moléculaire
• La séparant d'un mélange de protéines et ainsi l'identifier

Permets l'analyse des protéines sérique d'un patient en :

• Identifiant ces protéines
• Les quantifiant
• Repérant les anomalies
• Suivant l'évolution de la concentration de ces protéineschez un patient malade.

Source

https://sms-bse-bgb.ac-normandie.fr/Electrophorese-SDS-PAGE-principe-et-exemple-d-application-en-STLLivre de biochimie “principles and techniques of biochemistry and molecular biology”Livre de biochimie "Introduction aux techniques de biochimie" de David T. PLUMERhttps://youtu.be/J86IgcQMWYE?si=Z2ubDiGlkHv0-8B2https://youtu.be/pnljUrDsqJ4?si=sbLlavUhLraReI5ahttps://fr.wikipedia.org/wiki/Électrophorèse_sur_gel_de_polyacrylamidehttps://youtu.be/_an9ENPiYjQ