USO DE REACTIVOS Y PREPARACIÓN DE SOLUCUIONES LAB CALIDAD DE LECHEDE

Laboratorio

Guia para el uso de reactivos químicos y preparación de soluciones

Índice

Introducción

Objetivos

Reactivos de uso y su clasificación

Uso y preparación de soluciones

Referencias

Introducción

Laboratorio de calidad de leche

La Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria "AGROSAVIA" cuenta con una Red de Laboratorios compuesta por 7 unidades : Entomología, Genética Molecular, Microbiología Agrícola, Microbiología Pecuaria y Salud Animal, Producción Vegetal, Químca Analítica y Reproducción Animal. El laboratorio de Calidad de leche forma parte de la red de labobarotorios de Microbiología Pecuaria y Salud Animal, este cuenta con una infraestructura moderna, equpos especializados, personal calificado y a su vez los laboratorios se encuentran articulados mediante un Sistema de Gestión y con Acreditación bajo la norma internacional ISO/IEC 17025 en los parámetros higiénicos , sanitarios y Composicionales de leche cruda.

Uso de Reactivos y Preparación de soluciones

El uso de reactivos y la preparación de soluciones en los laboratorios de Calidad de de leche, son parte fundamental en la calidad de los métodos de prueba que en ellas se realizan; la importancia radica en que una solución que no ha sido preparada con los estándares de calidad puede generar resultados incorrectos en los análisis. Los análisis a desarrollar en cada uno de los métodos analíticos del laboratorio, contienen preparación de soluciones las cuales están establecidas como parte integral de las normas específicas para cada método de prueba.

Reactivo: es un término general usado para referirse a soluciones o sustancias que se requieren para llevar a cabo una reacción particular. Cada reactivo se especializa para una determinada prueba de reacción. Para preparar los reactivos en el laboratorio, es necesario comprender sus propósitos y la química detrás de sus protocolos de preparación. Cada protocolo sirve para preparar un reactivo que trabaja con los otros componentes de la muestra.

Las soluciones: son sistemas homogéneos formados básicamente por dos componentes. Solvente y Soluto. El segundo se encuentra en menor proporción. La preparación de soluciones es una de las actividades más desarrolladas dentro y fuera de la ciencia experimental, especialmente a lo que concierne a química, biología, bioanálisis, medicina y farmacia. En el ámbito comercial, muchos de los productos que compramos, sean alimenticios o destinados para los baños, consisten de soluciones acuosas.

Objetivos

Contribuir en la organización y gestión adecuada del uso de reactivos en el laboratorio de calidad de leche, en el marco de la mejora continua de la calidad de la red de laboboratorios de microbiología pecuaria y salud animal de AGROSAVIA

Identificar todos los reactivos que se utilizan en cada uno de los análisis que se realizan a la leche cruda en el laboratorio.

Señalar los conceptos básicos de seguridad, clasificación y almacenamiento de los reactivos de uso en el laboratorio de calidad de leche

Describir los procedimientos detallados para la preparación de aquellos reactivos de mayor aplicación en las prácticas analíticas habituales en el laboratorio de calidad de leche, comprender sus propósitos y la química detras de sus protocolos de preparación

01

reactivos de uso en el laboratorio de calidad de leche y su clasificación

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reactivos de uso en el laboratorio de calidad de leche y su clasificación

Listado de reactivos y su clasificación

Listado de reactivos y su clasificación

Listado de reactivos y su clasificación

Clasificación

El SGA "Sistema Globalmente Armonizado de clasificación y etiquetado de productos químicos”clasifica los productos químicos según la peligrosidad. Esta información se encuentra disponible en la etiqueta y la hoja de seguridad, la clase de peligro se representa con símbolos como se muestra a continuación:

Peligros para el Medio Ambiente

Peligros Físicos

Peligros para la Salud

INSTRUMENTO BACTOSCAN

Citometría de Flujo

El instrumento BactoScan FC+ es el único método electrónico de conteo rápido para probar el recuento de bacterias en la leche cruda aprobado tanto por: EU-RL(Laboratorio de referencia de la Unión Europea) en Europa como por NCIMS/FDA (Administración de Alimentos y Medicamentos) en EE. UU. La prueba rápida BactoScan FC+ mide células bacterianas individuales mediante una técnica llamada citometría de flujo. Con esta técnica, se tiñe una suspensión de células y se hace pasar a través de un tubo capilar, que se ilumina frente al objetivo de un microscopio. Luego, cada célula que pasa se registra mediante una fotoelectrónica instalada en el microscopio. Dado que el instrumento BactoScan™ FC+ cuenta todas las bacterias como células individuales y no como grupos, ofrece un alto rendimiento uniforme con precisión, repetibilidad y reproducibilidad de los resultados y puede analizar muestras de leche cruda directamente sin calentamiento o dilución previa.(Foss , 2017) Este es el unico método que cuenta con las 2 cerfificaciones EU-RL y NCIMS/FDA.

BactoScan Fc200

El principio detrás de la citometría de flujo

1.

4.

Luz dispersa lateral y luz fluorescente

Un detector altamente sensible, que emite impulsos electrónicos, detecta la luz fluorescente

Al incubar la leche con un líquido de incubación único y al emplear un tratamiento mecánico, todos los componentes de la leche se descomponen. excepto las bacterias. Los grupos de bacterias también se separan en bacterias individuales

Muestra

Luz dispersada hacia adelante

5.

Se cuentan los pulsos y se muestran en un diagrama de análisis de altura de pulsos (PHA) en la pantalla del instrumento.

2.

Se utiliza un sistema de jeringuilla precisión para pasarlas a través de una celda de flujo una tras otra como un collar de perlas , donde se exponen a un haz de luz procedente de una fuente láser.

Inyector

Espejo Dicroico

Rayo Láser

Lentes condensadores

Filtro de banda

3.

Flujo de calor

Cuando las bacterias pasan a travez del tubo son iluminadas por un láser que estimula la fluorescencia del tinte y las células tintadas emiten un pulso de luz por cada célula que pasa por el haz.

Se utiliza un sistema de jeringuilla para pasar las células a través de una celda de flujo una a una, donde se exponen a un haz de luz procedente de una fuente láser

Sistema de flujo del BactoScan

1. Se homogeniza bien la muestra con una varilla mezcladora de elevada eficacia. 2. La pipeta extrae 4,5 ml de leche, que pasa por un filtro y se homogeneiza a través de un filtrado grueso. 3. Se mezcla una submuestra representativa de 0,4 ml de leche (volumen de incubación de la muestra) con el reactivo de incubación (1,1 ml) y se lleva al rotor de incubación. La incubación se realiza durante 8 minutos a 42 ºC. 4. Durante la incubación, la muestra y el líquido de incubación se mezclan, lo que hace que se desintegre la muestra. Los elementos que no son bacterias (células somáticas, proteínas y glóbulos lipídicos) se descomponen y las bacterias se tiñen. 5. Tras la incubación, la mezcla completa se filtra y la submuestra representativa se pasa a través de la célula de flujo, donde se pueden contar las bacterias por separado.

Celda de Flujo

Solución de lavado Rinse

Homogenizador

Muestra de leche

Incubación a 42°C

Geringa de Medición

Geringa de Muestra

Reactivo medio colorante

Solución li quido de Transporte

Reactivos necesarios para el uso del BactoScan

+ INFO

Para tener en cuenta

Importancia del agua para el análisis

Condiciones de seguridad

Hay que familiarizarse con los elementos de seguridad disponibles y localizar las salidas principales de emergencia. Deben respetarse siempre sin ser invadidas por objetos innecesarios. Además, se debe conocer la localización exacta de extintores, mangueras, duchas de seguridad y lavaojos.

El agua es el reactivo más importante dentro del laboratorio y está presente en la mayoria de los procesos y soluciones que se realizan en el laboratorio. El agua desionizada o desmineralizada, el agua destilada y el agua ultrapura son los tipos más comunes en el laboratorio, el uso de agua de calidad en los análisis es capaz de minimizar y/o evitar errores analíticos, reducir el desgaste de los instrumentos de medida y prporcionar resltados más confiables

Es obligatorio usar: Gafas de seguridad

• Tapabocas
• Guantes
• Bata, deberá estar siempre cerrada
• Zapato cerrado

Para el caso de la citometría de flujo el agua a utilizar para la preparación de reactivos debe ser grado reactivo tipo 1

Debe consultarse previamente la información en materia de prevención, tales como las fichas de datos de seguridad, y la información de la etiqueta de los productos. Todos los productos deben ser manipulados con cuidado.

Todas las soluciones de uso diario deben estar a una temperatura superior a 15 ºC durante las mediciones.

02

preparación de soluciones instrumento bactoScan

Solución Madre o Stock Preservacion Muestra Control Bacteriano

Sln Stock Preservacion Muestra Control Bacteriano

Se usa para la preparación de las soluciones:

• Rehidratación Muestra Control Bacteriano
• Muestra control Bacteriano, pra el instrumento BactoScan

Preparación Solución Stock Preservación Muestra Control Bacteriano

2 Litros

Pesar:

• 53g de ácido Bórico
• 0,4g de Sorbato de potasio
• 10g de glicerol al 85% u 87%

Colocar los reactivos anteriormente pesados en un recipiente y aforar o agregar agua desionizada hasta 2 Litros

Sln Stock Preservacion Muestra Control Bacteriano

Sln Stock Preservacion Muestra Control Bacteriano

Agitar hasta que se disuelva; se puede acelerar el proceso calentando la mezcla a 40 ºC.

Etiquetar y almacenar

Almacenar a temperatura ambiente(<25 ºC). Usar durante un periodo de 10 semanas.

Solución Rehidatación Muestra Control Bacteriano

Sln Rehidratacion Muestra Control Bacteriano

Tabletas Ringer Solution

Se usa para reconstituir el vial liofilizado

• Muestra control Bacteriano para el instrumento BactoScan

Preparación Solución Rehidratación Muestra Control Bacteriano

300 mL

500 mL

500 mL

Disponer un frasco limpio y esteril

• Agregar 1 tableta Ringer solution

Medir 300mL de agua desionizada y agregar al frasco que contiene la pastilla Ringer

Sln Rehidratación Muestra Control Bacteriano

200 mL

500 m L

Sln Rehidratacion Muestra Control Bacteriano

500 m L

Agregar a la mezcla 200mL de solución Stock Preservación Muestra Control Bacteriano y agitar hasta que se disuelva la tableta completamente

Tener en cuenta el orden de adición de los reactivos Etiquetar y almacenar

Almacenar a temperatura ambiente(<25 ºC). Usar durante un periodo de 1 semana.

Solución Muestra Control Bacteriano

Sln Rehidratacion Muestra Control Bacteriano

Vial Bacterial Control Sample

La muestra de Control de Bacterias (BCS) garantiza el correcto funcionamiento del instrumento BactoScan y los reactivos durante todo el proceso, estandariza los instrumentos dentro y entre laboratorios.

Preparación Solución Muestra Control Bacteriano

100 mL

100 mL

100 mL

4-5 mL

Disponer un frasco limpio y esteril

• Agregar 100 mL de solución Rehidratación Muestra Control Bacteriano

Tomar 4-5 ml de la solución rehidratación MCB de 100 ml y adicionarlos al vial BCS. Cerar el vial, agitar y darle la vuelta 3 veces

Sln Muestra Control Bacteriano

Sln Muestra Control Bacteriano

100 m L

100 m L

Agregar el vial reconstituido al frasco donde se encuentran los 100 mL de la Solución Rehidratación Muestra Control Bacteriano y agitar hasta que se disuelva todo el contenido

Etiquetar y almacenar

Almacenar en refigeración (2-5 ºC). Usar durante un periodo de 1 semana.

Solución Stock Colorante

Se usa para la preparación de la Solución de Uso Diario Líquido de Incubación para el instrumento BactoScan

Preparación Solución Stock Colorante

10 L

10 L

• Disponer un recipiente limpio de 10L, agregar 8 L de agua desionizada tipo 1
• Agregar lentamente 1 paquete de polvo Buffer Powder BactoScan

A gitar la mezcla hasta que se disuelva el polvo; se puede acelerar el proceso calentando la mezcla a 40 ºC mientras remueve

10 L

Sln Stock Colorante

Sln Stock Colorante

10 L

10 L

Aforar el recipiente con cuidado (para evitar que salga espuma) hasta 10 litros (±2 %) con agua desionizada, agitar, etiquetar y almacenar

Añadir una botella de medio de coloración Staining Medium y 500 ml de detergente BactoScan (una botella) y agitar.

Almacenar a temperatura ambiente, en un recipiente ambar y evitar que le llegue la luz. Usar durante un periodo de 6 semanas.

Solución Uso diario liquido de Incubación

Sln Uso diario líquido de Incubación

550 m L

Realiza el proceso de cultivo de células microbianas en un entorno controlado, con el fin de promover su crecimiento y desarrollo

Preparación Solución Uso Diario Líquido de Incubación

550 mL

1 L

550 mL

Enzyme 50

Adicionar un fco de 15.5 mL de Enzyme 50 a los 550 mL de solución Stock colorante anteriormente medidos

• Disponer un recipiente limpio y esteril de 1L.
• Medir 550 mL (± 2 %) de Solución Stock Colorante

10 L

Sln Stock Colorante

Solución Uso Diario Líquido de Incubación

Solución Uso Diario Líquido de Incubación

Enzyme 50

550 mL

Mezclar y darle vuelta a la botella 10 veces antes de usar

Etiquetar y almacenar

Almacenar en refrigeración (2-8°C), en un recipiente ambar y evitar que le llegue la luz. Usar durante un periodo de 5 días.

Solución Stock Líquido de Transporte

Se usa para la preparación de la Solución de Uso Diario Líquido de transporte y la Solución de Fondo o Blanco para el instrumento BactoScan

Preparación Solución Stock Liquido de Transporte

8 L

8 L

Disponer un recipiente limpio de 10L.

• Agregar 8 L de agua desionizada tipo 1
• Agregar lentamente 1 paquete de polvo Buffer Powder BactoScan

Remover bien la mezcla hasta que se disuelva el polvo; se puede acelerar el proceso calentando la mezcla a 40 ºC mientras remueve

10 L

Sln Stock Colorante

10 L

Solución Stock Líquido de Transporte

10 L

Solución Stock Líquido de Transporte

550 mL

Aforar el recipiente con cuidado (para evitar que salga espuma) hasta la marca de 10 litros (±2 %) con agua depurada.Etiquetar y almacenar

Añada 500 ml de detergente (una botella).

Almacenar a Temperatura ambiente (<25°C). Usar durante un periodo de 6 semanas.

Preparación Solución Uso Diario Líquido de Transporte

2L

8L

8L

Medir 2 litros (± 10 %) de solución Stock Líquido de Transporte y agregarlos al recipiente de 8L de agua

Disponer un recipiente limpio

• Agregar 8L (± 10 %) de agua desionizada tipo 1

10 L

(± 10 %)

Solución Uso Diario Líquido de Transporte

Sln Uso Diario Líquido de Transporte

10 L

Etiquetar y disponer en el compartimiento correspondiente del instrumento BactoScan para su uso

Su función es llevar la muestra a la célula de flujo y hacer pasar las bacterias por el láser y el detector

Agitar muy bien la mezcla

Almacenar a temperatura ambiente (< 25ºC). Usar durante un periodo de 1 semana.

Preparación Solución de Fondo o Blanco BactoScan

50 mL

1L

1L

Disponer un recipiente limpio y esteril

• Agregar 1L (± 10 %) de agua desionizada tipo 1

Medir 50 mL (± 10 %) de solución Stock Líquido de Transporte y agregarlos al recipiente de 1L de agua

1L

Sln Blanco BactoScan

Sln Blanco BactoScan

1 L

1 L

La Solución de fondo o blanco permite verificar las pruebas de pureza y arrastre del instrumento indica el estado higiénico del analizador, para comprobar si se ha ajustado correctamente y si el sistema no presenta ninguna impureza.

Etiquetar y disponer para uso del instrumento BactoScan

Agitar muy bien la mezcla

Almacenar en refrigeración (2-8ºC). Usar durante un periodo de 5 días.

Solución de Lavado Rinse

Su función es limpiar el sistema de flujo entre las muestras

Preparación Solución de lavado Rinse

100 mL

8L

50 L

50 L

Disponer un recipiente limpio de 50 L

• Agregar 100 mL de Rinse Concentrate

Añada 50 litros de agua depurada para asegurar que los dos líquidos se mezclan por completo.

Solución de lavado Rinse

Solución de lavado Rinse

50 L

10 L

50 L

50 L

Etiquetar y disponer en el compartimiento correspondiente del instrumento BactoScan para su uso

Agitar muy bien la mezcla

Almacenar a temperatura ambiente (< 25ºC). Usar durante un periodo de 1 mes.

Solución Final de Lavado

Su función es limpiar el sistema de flujo al finalizar el día de trabajo

Preparación Solución Final de Lavado

50 mL

8L

10 L

10 L

Disponer un recipiente limpio de 10 L

• Agregar 10 L(± 10 %) de agua desionizada tipo 1

Añadir 50 mL(± 10%) de Amoniaco al 25% al recipiente de 10L de agua

10 L

Solución Final de lavado

Solución Final de lavado

10 L

10 L

10 L

Etiquetar y disponer en el compartimiento correspondiente del instrumento BactoScan para su uso

Agitar muy bien la mezcla

Almacenar a temperatura ambiente (< 25ºC). Usar durante un periodo de 1 semana.

Solución Muestra de Control de Partículas

La muestra de Control de Partículas se emplea normalmente para determinar dónde se encuentra el problema si la BCS se encuentra fuera de los límites, permite monitorear el estado técnico del instrumento, indica si es necesario al ajustar el sistema óptico y es principalmente una herramienta de servicio para el mantenimiento y reparar

Preparación Solución Muestra Control de partículas

20 mL

Coloque la botella con concentrado de la PCS en agitación durante 10 minutos

Medir 20 ml de solución en blanco en el recipiente correspondiente

Si es necesario un volumen mayor, dispense la misma proporción de concentrado de la PCS y solución de fondo en mayor cantidad, por ejemplo, 10 gotas en 40 mL en solución blanco

Dispense 5 gotas de concentrado PCS en los 20 ml de solución blanco medidos. Agitar muy bien la mezcla

Programar la tarea y disponer para su uso . Usar durante un periodo de 1 hora.

INSTRUMENTO FOSSOMATIC

¿Qué son las Células Somáticas?

Las células somáticas son principalmente glóbulos blancos de la sangre con el propósito de combatir a los microorganismos infectantes mediante un proceso llamado fagocitosis (los envuelve y destruye); así como intervenir en la reparación del tejido secretor que ha sido dañado por alguna infección o lesión. Aunque varios factores son determinantes en la presencia y cantidad de estas células, el más importante es la mastitis. El recuento de estas células es una de las medidas que se emplean para medir la calidad sanitaria de la leche del ganado bovino.

Recuento de Células Somáticas

El RCS es un indicador de la presencia de mastitis en la glándula mamaria y es el parámetro más aceptado para valorar la calidad sanitariade la leche en hatos, cooperativas lecheras y ganaderos en general. Un alto valor de RCS en la leche cruda recién sacada del ordeño es unindicador no sólo de que la vaca tiene mastitis,si no que a la vez brinda información indirectasobre las pérdidas en producción, las modificaciones bioquímicas que experimenta la leche y hasta de cuándo efectuar un descarte voluntario de los animales

Método fluoro-opto-electrónico Fossomatic

Microscopía Directa

Prueba California

La prueba consiste en el agregado de un detergente a la leche, el alquilauril sulfonato de sodio, causando la liberación del ADN de los leucocitos presentes en la ubre, y éste se convierte, en combinación con agentes proteicos de la leche, en un complejo gelatinoso

Es un ensayo cuantitativo de laboratorio, por el cual se examinan bajo el microscopio un frotis teñido de leche problema y se cuenta el número de células somáticas. El recuento microscópico directo de células somáticas de la leche, denominado también método óptico, si bien es de referencia actualmente es de poca utilidad cuando se trata de un gran número de muestras, por que es una metodología muy demorada

Utiliza un equipo denominado fossomatic, el cual está basado en la tinción fluorométrica del material nuclear y posee alta correlación con la microscopía óptica, por lo que proporciona una medida segura en el recuento de células somáticas

Instrumento Fossomatic

7. Después de cada muestra se lavan todos los tubos a fondo y se enjuaga el filtro en línea. Los desechos del flujo se separan en desechos de alta y baja concentración

1. Aspiración de muestras

2. La jeringa de toma de muestras recoge la cantidad de leche que hay que mezclar con el colorante.

El instrumento Fossomatic 7 cuenta las células somáticas basándose en el reconocimiento del ADN, mediante la aplicación de la citometría de flujo para detectar ADN en las células. Se rodea una mezcla de leche y solución colorante con un líquido envolvente y se pasa a través de un celda de flujo. En la celda de flujo, las células somáticas teñidas se exponen a luz de una longitud de onda específica. Luego, las células emiten pulsos de luz fluorescente en una longitud de onda diferente, los pulsos se cuentan y se muestran. El diseño de la celda de flujo garantiza que solo se detecte una célula somática a la vez.

6. Los impulsos procedentes de las células somáticas tintadas se amplían, se cuentan y se convierten en número de células somáticas por ml.

3. La jeringa del colorante/buffer absorbe el colorante/buffer de la cámara de mezcla (mezcla de reactivo automática) o del recipiente del día (mezcla de reactivo manual). Se mezcla la leche y el colorante/buffer, y se bombea a través del filtro en línea

4. La jeringa para medir se llena de líquido de limpieza/portador

5. La jeringa para media inyecta la mezcla leche/colorante en la célula de flujo, por la que pasa como una fina y bien definida cadena de muestro, rodeada por un líquido portador a vista de microscopio.

Reactivos de uso en el Instrumento Fossomatic

Preparación de Soluciones para el funcionamiento del instrumento FOSSOMATIC

Muestra de Control de Ajustes FMA

Solución Stock Fossomatic

Solución Buffer Diluyente

Solución Líquido Portador

Reactivo C Colorante Dye

Solución de Fondo o Blanco

Se usa para verificar el ajuste del sistema óptico del instrumento y la calidad de los reactivos

se usa para verificar el estado higienico del sistema de flujo del instrumento

Su función es teñir el ADN y ARN de las células

Su función es transportar la muestra a la celda de flujo

Su función es estabilizar el pH.

Se usa para la preparación de las soluciones:

• Liquido portador
• Solución blanco o de fondo
• Solución Bufer diluyente

Solución Stock Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

Preparación Solución Stock Fossomatic

125 g

1125 mL

1125 mL

• Disponer un recipiente ambar limpio y esteril.
• Pesar 125 g de Detergente Fossomatic

Disolver los 125 g de detergente en 1125 ml de agua desionizada tipo 1.

10 L

Sln Stock Colorante

Solución Stock Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

Detergente Fossomatic

1125 mL

1125 mL

Agitar vigorozamente la mezcla hasta que se haya disuelto completamente

Etiquetar y almacenar en un lugar fresco sin exponer a la luz

Almacenar a temperatura ambiente (>15.0°C), en un recipiente ambar y evitar que le llegue la luz. Usar durante un periodo de 16 semanas.

Solución Buffer Diluyente

Solución Stock Fossomatic

Se usa para como tampon (disolución amortiguadora, disolución buffer o disolución reguladora) para la electroforesis, es decir es capaz de separar las moleculas de ADN y ARN

Preparación Solución Buffer Diluyente

100mL solución Stock Fossomatic

35,4g

• Disponer un recipiente limpio y esteril de 1L.
• Pesar 35,4 g de Buffer Fossomatic

Disolver los 35,4 g de Buffer en 100 ml de Solución Stock Fossomatic.

10 L

Sln Stock Colorante

1L

Solución Stock Fossomatic

Solución Buffer Diluyente

Solución Buffer Diluyente

1L

1125 mL

Agitar vigorozamente la mezcla hasta que se haya disuelto completamente y aforar hasta 1litro con agua desionizada tipo 1

Etiquetar y disponer en el compartimento del instrumento para su uso

Almacenar a temperatura ambiente (>15.0°C). Usar durante un periodo de 3 semanas.

Solución Líquido Portador y Blanco o Solución de Fondo

Solución Líquido Portador y Blanco Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

20L

Se usa para el transporte de la muestra a la celda de flujo, y a su vez como solución Blanco para verificar el estado higienico del analizador y si no se encuentran impurezas en el sistema de flujo

Preparación Solución Líquido Portador Blanco Fossomatic

100mL solución Stock Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

• Disponer un recipiente limpio de 50L.
• Medir 100mL de Solución Stock Fossomatic

Disponer los 100 ml de Solución Stock Fossomatic en el recipiente de 50L

10 L

1L

Solución Líquido Portador y Blanco Fossomatic

Solución Líquido Portador y Blanco Fossomatic

20L

1125 mL

20L

20L

Agregar 20 l de agua desionizada tipo 1 para que la mezcla se homogenice y agitar

Etiquetar y disponer en el compartimento del instrumento para su uso

Almacenar a temperatura ambiente (>15.0°C). Usar durante un periodo de 3 semanas.

Reactivos listos para Uso Directo

Solución Stock Fossomatic

Solución Stock Fossomatic

Punto Crioscópico

Instrumento milkoscan

Parámetros Físico-Químicos Importantes de la leche

MilkoScan

Espectoscropía Infrarrojo FTIR

El MilkoScan 7 RM se basa en el análisis con infrarrojos por transformada de Fourier (FTIR), es un espectrofotómetro FTIR para la determinación de la composición de la leche que cumple las normas de la FIL y la AOAC (Association of Official Analytical Chemists). La espectroscopia de infrarroja por transformada de Fourier se basa en la interacción entre la radiación infrarroja y las moléculas de una muestra. Cuando se ilumina una muestra con luz infrarroja las moléculas absorben ciertas frecuencias de esa luz y resulta en un espectro que muestra picos característicos, cada pico del espectro representa las vibraciones moleculares específicas de los enlaces químicos presentes en la muestra. Mediante el análisis FTIR, es posible identificar los componentes químicos de una muestra y obtener información sobre su estructura y composición.

Instrumento MilkoScan

1. Aspiración de muestra y preparación de la carga de la nueva muestra en el acumulador. Mientras que la prueba anterior se analiza en la cubeta, el homogeneizador absorbe la nueva muestra a través del filtro de la pipeta. La muestra se somete a una homogeneización de tres fases. Una vez acabadas las fases 1 y 2 de 125 bar, la muestra se calienta y termostata antes de pasar a la tercera fase de homogeneización de 30 bar
2. Carga del acumulador con leche.
3. Carga de la cubeta con leche del acumulador.
4. Análisis FTIR de muestra. El interferómetro envía un haz de energía IR con una secuencia de más de 1000 longitudes de onda diferentes a través de la leche en la cubeta. El detector de IR mide la energía después de que el haz haya atravesado la leche, el interferograma se haya transformado en espectro y se sometan a una serie de cálculos, lo que da como resultado el valor medido y calibrado final.

Reactivos de uso en el Instrumento Fossomatic

MSC WASH 24g

MSC ZERO Concentrate 5mL

MSC WASH

MSC ZERO

El líquido de cero facilita una referencia espectral para los ajustes de cero, es decir coloca en "cero" la absorbancia del espectrofotometro, sirve para hacer la calibración del espectrofotómetro, desechando la absorbancia de todos los componentes diferentes de la sustancia de estudio, lo cual se logra haciendo que, en presencia de esta cubeta óptica en el recipiente respectivo del fotómetro se ajuste la absorbancia de la pantalla en “cero”.

El agente limpiador MCS Wash se usa para limpiar el sistema de flujo

Preparación Solución Ajente Ajuste de Zero "MSC Zero"

Disponer un recipiente limpio y medir 5L de Agua desionizada

Añadir un sobre "MSC Zero 5mL y agitar bien

Solución Ajente Ajuste de Zero "MSC Zero"

5 L

Etiquetar y disponer en el compartimiento del instrumento para su uso

Usar durante una semana

Preparación Solución Ajente Limpiador Clean "MSC Wash"

Disponer un recipiente limpio y medir 5L de Agua desionizada

Añadir un sobre "MSC Wash y agitar bien. Usar la cabina de extracción.

Solución Ajente Limpiador Clean "MSC Wash"

5 L

Etiquetar y disponer en el compartimiento del instrumento para su uso

Usar durante una semana

FOSS CLEAN

MSC DESCALER

El agente limpiador Enzimático Fossclean se usa para realizar una limpieza más a fondo,elimina los restos de proteína formados en el sistema de flujo. FossClean se usa en situaciones en las que, el analizador no se haya utilizado durante un largo periodo de tiempo, o la leche o los procedimientos del laboratorio requieran una limpieza adicional

El agente limpiador MCS Wash se usa para limpiar el sistema de flujo

Preparación Solución Ajente Limpiador Descaler

Disponer un recipiente limpio y medir 1L de Agua desionizada

Añadir un sobre "MSC Descaler y agitar bien.

Solución Ajente Limpiador Descaler

Etiquetar y Almacenar a temperatura ambiente

1 L

Vigencia 3 meses despues de su preparación

Preparación Solución Ajente Limpiador Enzimático "Foss Clean"

Disponer un recipiente limpio y medir 500 mL de Agua desionizada. Añadir 0,5g de Buffer Fossclean y agitar hasta que se disuelva completamente

Añadir 10mL de la botella solución Fossclean a los 50mL de solución Buffer y agitar

Solución Ajente Limpiador Foss Clean

Etiquetar y Almacenar en refrigeración (2-8°C)

500mL

Vigencia 1 semana despues de su preparación Calentar a 40°C cuando se vaya a usar

EQUALIZER

Este reactivo se emplea para realizar la estandarización del equipo, el procedimiento de estandarización de FOSS es capaz de corregir las diferencias de la óptica de los instrumentos a través del tiempo. Para estandarizar un instrumento, se debe analizar un líquido de estandarización (ecualizador). El espectro del ecualizador se compara luego con un 'espectro de ecualizador dorado' que se almacena en cada analizador FTIR. De la diferencia entre el ecualizador de oro espectro y el espectro del ecualizador del presente instrumento, la estandarización se calculan los parámetros de corrección A, B y α y β. Los coeficientes A y B correctos para el desgaste, mientras que α y β ajustan el eje de longitud de onda. Los parámetros de corrección del procedimiento de estandarización se pueden monitorear para asegurar un rendimiento óptimo. De los cuatro parámetros de corrección, el valor A que corrige el desgaste de la cubeta es el parámetro más importante ya que tiene el mayor impacto en los resultados. El valor 'A' es un factor de corrección de pendiente que ajusta los espectros a una longitud de trayectoria de cubeta estandarizada. Para una cubeta nueva, el valor A es 0.85 - 1.15 dependiendo del tipo de instrumento. Con el tiempo, a medida que se desgasta la cubeta, el valor A disminuye cuando alcanza el 80 % de su tamaño original, FOSS recomienda cambiar la cubeta, ya que la compensación con el proceso de estandarización no será suficiente. Esto se debe a que el ruido del instrumento permanece igual al aumentar la ruta, pero la relación señal-ruido disminuirá.

Reactivo de uso directo, usar una botella por cada estandarización, almacenar en refrigeración (2-8°C)

Consideraciones

Se pueden preparar cantidades inferiores o superiores deacuerdo con el flujo de trabajo

Tener en cuenta la vigencia de las soluciones preparadas y realizar el descarte adecuado de las mismas

Tener en cuenta los pasos descritos para la preparación de las soluciones, de la calidad de las soluciones depende el aseguramiento de los resultados

Tener en cuenta las fecha de vencimiento de los reactivos al momento de su recepción

Referencias

Enlaces web

Bibliografía

https://repository.agrosavia.co/bitstream/handle/20.500.12324/37606/Ver_Documento_37606.pdf?sequence=1&isAllowed=y

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• FOSS Analytical A/S. (2019). Manual de usuario MilkoScan 7. Copyright.
• Hanne Winning, P. (2014). Standardization of FT-IR instruments. A White Paper from FOSS .

https://biblioteca.colanta.com.co/pmb/opac_css/doc_num.php?explnum_id=1146

Sorbato de Potasio: https://www.lifeder.com/acido-sorbico/

https://www.fishersci.es/shop/products/oxoid-ringers-solution-tablets/10239632

Muchas Gracias

Yaneth Cristina Arcos

Auxiliar de laboratorio Laboratorio de calidad de Leche AGROSAVIA - C.I. Obonuco

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