Métodos de Identificación Microbiana

Metodos de Identificacion Microbiana

Metodos Fenotipicos

Tipificacion con fagos

Tincion Diferencial

Pruebas Bioquimicas

Rasgos Morfologicos

Procedimiento

Concepto

Pruebas serologicas

Deteccion Molecular

Procedimiento

Procedimeinto

Concepto

Concepto

Bibliografía (Pruebas de serología de anticuerpos, s/f) Pruebas de serología de anticuerpos. (s/f). Medlineplus.gov. Recuperado el 2 de diciembre de 2023, de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/pruebas-de-serologia-de-anticuerpos/ (s/f) (S/f). Recuperado el 2 de diciembre de 2023, de http://file:///C:/Users/Invitado/Downloads/seimc-procedimientomicrobiologia37%20(1).pdf

Rasgos Morfologicos

Morfología microscópicas

Morfología macroscópicas

El estudio microscopico en fresco y tras tincion revela la forma, la manera de agruparse, la estructura de las celulas y su tamaño. Las tinciones son el primer paso, y ocasionalmente el unico, para la identificacion bacteriana. • Morfoligia Microscopica

La morfología de las colonias es fundamental en la identificaciÛn preliminar y para la diferenciacion de los microorganismos. Para la observacion morfologica es preferible examinar colonias de cultivos frescos crecidas en medios no selectivos. En este paso de la identificacion es muy importante el aislamiento de las bacterias en cultivo puro ya que esta deberÌa estar compuesta por un solo tipo de microorganismos y procederÌa de una unica célula. Las colonias de una única especie, cuando crecen en medios especÌficos y bajo condiciones iduneas se describen por sus.caracterÌsticas de tamaño, forma, consistencia, y a veces por su color. El tamaño de las colonias bacterianas es generalmente uniforme entre una misma especie. Colonia, abultada o plana. La textura de la colonia es también lo importante. Puede variar desde seca a viscosa, con superficie lisa o granular. Algunos microorganismos producen una colonia pigmentada, lo que puede ser de ayuda en el proceso de identificación

• Forma: cocos, bacilos, cocobacilos,
• filamentosos, bacilos curvos, etc.
• - c·psula: presente o ausente - endosporas: ovales, esfÈricas, terminales, subterminales - tamaño: cortos, largos, etc.
• - bordes laterales: abultados, paralelos,
• concavos, irregulares
• - extremos: redondeados, puntiagudos
• - disposición: parejas, cadenas, tÈtradas,
• racimos, etc.
• - formas irregulares: variaciÛn en forma y
• tamaño, ramificados, fusiformes, etc.

Pruebas Bioquimicas

Pruebas de lectura inmediata

• Catalasa
• Oxidadasa
• Ureasa
• LAP
• Indol

Las pruebas bioquimicas permiten determinar las caracteristicas metabolicas de las bacterias objeto de identificacion. Algunas de estas pruebas son tecnicas rapidas, ya que eval˙an la presencia de una enzima preformada y su lectura varÌa entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su ectura el crecimiento del microorganismo con una incubacion previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayoria de las pruebas que detectan componentes metabolicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un microorganismo a unasustancia dada tras cultivo en medios de identificacion que contienen el sustrato a metabolizar. No obstante, algunas de estas pruebas pueden realizarse de forma rapida tras incubacion de unas 2-6h; en general, se trata de reacciones enzim·ticas cromogenicas o pruebas convencionales modificadas (hay discos o tabletas comercializados con substratos cromogenicos para uso individualizado).

Pruebas de lectura inmediata

• ”oxido-FermentaciÛn.
• Reduccion de nitratos
• Rojo de metilo.
• Voges-Proskaue
• Agar hierro de Kligler
• Utilizacion de citrato
• Descarboxilasas

Tincion Diferencial

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos –en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos. Ejempplos:

• Tincion de Gram
• Tinción de Wright
• Tinción de Ziehl-Neelsen
• Tinción negativa

Tipificacion con fagos

La tipificación microbiana es el principio de identificación de organismos a nivel de cepa y es importante para identificar cepas virulentas, confirmar brotes potenciales, determinar la fuente y ruta de infecciones, y seguir la contaminación cruzada de patógenos en el ámbito sanitario. Además, permite la evaluación de medidas de control para determinar su eficacia

La fagotipificación es un método utilizado para detectar cepas únicas de bacterias. Se utiliza para rastrear la fuente de brotes de infecciones. Los virus que infectan a las bacterias se denominan bacteriófagos ("fagos" para abreviar) y algunos de ellos solo pueden infectar una única cepa de bacterias. Estos fagos se utilizan para identificar diferentes cepas de bacterias dentro de una sola especie.

Procedimientos

• Cultivo de Bacterias: Las cepas bacterianas se cultivan en un medio de cultivo adecuado.
• Ataque de Fagos: Luego, se someten al ataque de una serie de diferentes fagos conocidos.
• Resultados de Lisis: Algunos fagos matarán a las bacterias y lisarán su colonia, lo que puede visualizarse y medirse. Otros no podrán matar una bacteria determinada.
• Asignación de Tipos Fago: Dependiendo de qué grupos de fagos pueden lisar o no lisar la cepa bacteriana, a las bacterias se les asigna un número o tipo fago específico.

Imgane 1. Fagotipificacion

Identificacion Microbiana

Genes empleados en la Identificacion Microbiana

Dados los problemas inherentes que presentan los sistemas de identificacion fenotÌpicos (no todas las cepas de una misma especie muestran caracterÌsticas homogeneas, una misma cepa puede generar diferentes patrones en ensayos repetidos y tambien las limitaciones en las bases de datos, entre otros), los metodos moleculares se han erigido como procedimientos complementarios, alternativos o incluso de referencia a los fenotipicos. En la decada de los 80, comenzo la busqueda de candidatos que, siendo genes estables, permitieran establecer relaciones filogeneticas entre las bacterias, como los genes que codifican para las subunidades ribosÛmicas 5S, 16S, 23S y sus espacios intergenicos.

Se han utilizado una amplia variedad de genes como dianas moleculares en los estudios taxonomicos o de filogenia en los distintos generos y distintas especies bacterianas, constituyendo el an·lisis del ARNr 16S el marcador inicial y en numerosas situaciones suficiente para realizar una identificaciÛn precisa. Sin embargo, en otras situaciones, la alta homologia genetica en determinados generos bacterianos o un reciente cambio en su asignaciÛn taxonÛmica, no permite utilizar el ARNr 16S como para laidentificaciÛn a nivel de especie (o incluso de genero). En estos casos, puede recurrirse a otros genes dianas.

• ARNr 16S (rrs)
• ARNr 16S-23S y ARNr 23S
• rpoB (subunidad β de la ARN polimerasa)

Procedimiento

1. Procedimiento: -extrae el ADN de la muestra microbiana.
2. -Se utilizan técnicas como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar regiones específicas del ADN.
3. -Se determina la secuencia de nucleótidos del ADN amplificado.
4. -Se comparan las secuencias obtenidas con bases de datos de referencia.
5. -Los resultados se evalúan según criterios establecidos.

Pruebas Serologicas

• Areas de Aplicacion:
• - Diagnostico de enfermedades infecciosas
• -Estudios epidemiologico

Las pruebas de serología de anticuerpos comprueban la presencia o el nivel de anticuerpos específicos en la sangre. Los anticuerpos son proteínas que el sistema inmunitario produce para combatir sustancias extrañas. Estas sustancias suelen ser patógenos (gérmenes que causan enfermedades) como virus y bacterias. Cuando tiene una infección, su cuerpo produce anticuerpos dirigidos al patógeno causante. Estos anticuerpos pueden protegerle de otra infección o de tener síntomas graves. Una vacuna también puede ofrecer protección haciendo que su sistema inmunitario produzca anticuerpos contra el patógeno.

Procedimiento

• -Se extrae una muestra de sangre y se centrifuga para obtener el suero.
• -Las técnicas más comunes son:

ELISA (ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima): Requiere un laboratorio de microbiología y personal capacitado. Se basa en reacciones antígeno-anticuerpo. Pruebas de flujo lateral (test de inmunocromatografía): Detectan complejos antígeno-anticuerpo sin equipos especializados. Son rápidas y se utilizan en contextos como la pandemia por SARS-CoV-212.