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Frammenti di Okazaki
Annalisa Cavada
Created on November 9, 2023
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Transcript
FRAMMENTI DI OKAZAKI
L'esperimento di Reiji Okazaki e di alcuni suoi collaboratori-1967/8
01
03
05
fase attiva di replicazione del dna
Aggiunta di timidina non radioattiva
SOLuzione centrifugata
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02
04
06
esposizioni alla timidina triziata
Denaturazione del DNA
Analisi delle bande radioattive
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osservazioni sull'ESPERIMENTO
Quando l'esposizione al nucleotide marcato era molto breve, la maggior parte della radioattività era localizzzata in corti frammenti di DNA. Aumentando il tempo di pulse o chase aumentava la frazione di DNA marcato, con più peso molecolare.
CONCLUSIONI DELL'ESPERIMENTO
Dalle precedenti osservazioni si dedusse che il DNA era sintetizzato sotto forma di piccoli frammenti nella prima fase, che poi erano saldati per formare filamenti più lunghi.I n conclusione, la duplicazione del DNA non è lineare, ma è un processo discontinuo e frammentato.
GRAZIE PER L'ATTENZIONE!
Bibliografia-Wikipedia; Paper 10lab
Si aggiungeva poi timidina non radioattiva(cold chase)
Le bande venivano quindi analizzate per la presenza di radioattività. L'ersperimento venne ripetuto più volte, allungando i periodi delle fasi di pulse e/o chase.
La soluzione veniva centrifugata in gradiente di saccarosio, che separava i filamenti di DNA in base al peso molecolare.
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Subito dopo il DNA veniva isolato e denaturato in soluzione alcalina.
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Le colture vennero sottoposte a brevi esposizioni di timidina triziata (3H-timidina), incorporata nel DNA nascente(pulse).
Vennero allestite colture del batterio Escherichia coli che si trovavano nella fase di attiva sintesi del DNA