GALERÍA DE FOTOS

El objetivo es reconocer grupos fisiologicos de microorganismos en el suelo mediante su cultivo en medio selectivos.

Un título genial

NITRIFICACIÓN

PARTE 2

INTRODUCCION

AMONIFICACIÓN Y CELULOLISIS

FIJACIÓN DE N

SULFATO OXIDACIÓN Y REDUCCIÓN Y SOLUBILIZACIÓN DE FOSFATOS

AMILOLISIS

DESNITRIFICACIÓN

Microorganismo del suelo

FIJACIÓN DEL N MOLECULAR

DESNITRIFICACIÓN

NITRIFICACIÓN

AMONIFICACIÓN

El nitrógeno orgánico se covierte en amoniaco por el proceso de desaminación. La urea se hidroliza a amoníaco y CO2 por la enzima ureasa producida por los microorganismos. La evolución de la microbiota varia según la materia nitrogenada transformada, primero aparecen bacilos, cocos y luego los actinomicetos y mohos

El N tiene 3 formas estables de oxidación en la naturaleza, cuya interconversión está dada por bacterias. Algunos utilizan amonio para sintetizar sus aminoácidos y otras moléculas nitrogenadas de la célula, en el caso de la plantas, prefieren el nitrato. La oxidación del amonio a nitrato se denomina nitrificación

Proceso en el cual algunos organismos utilizan el nitrato como aceptor final de electrones durante la respiración anaeróbica, producen moléculas reducidas a gases que desaparecen del ecosistema. Si en un suelo queda anegado se producen condiciones anaeróbicas y ocurre la desnitrificación. En el caso de laboratorio los gases quedan atrapados en la campanita del medio de cultivo.

El N es reducido a amonio en el proceso de fijación catalizado por el complejo nitrogenasa, cuyo componente proteíco es el molibdeno. La enzima es inactivada por el O. El N es muy inerte y su fijación requiere mucha energía.

Azotobacter crece en un medio líquido sin agitación en forma de una película superficial. Es sensible a la acidez por lo que no crece por debajo de un pH=6.

Se siembra gránulos de suelo en medio manitol y se incuba a 25-27°C durante 7 días.

FIJACIÓN DEL NITROGENO

• El medio contiene: 10gr manitol, 0,5 grcarbonato de calcio, 50ml de solución salina, 1ml de solució de oligoelementos y 1 ml de agua. Se distribuye en el Erlen Meyer y se esteriliza a 110°C durante 20 min

En el tercer día el medio se enturbia ligeramente y el la superficie aparece un velo grisáceo. Luego ese velo se pliega dando una superficie rugosa que se vuelve parda. Finalmente caen trozos de velo dentro del líquido, este se enturbia y suelen parecer burbujas en el fondo, Esto me dice que la fijación fue positiva.

Para la formación de nitritos se vuelva 5ml del cultivo en tubo de ensayo y agregar 1ml del reactivo de Griess. Aparecerá un color rosado si hay nitritos.

NITRIFICACIÓN

Por otro lado, para la formación de nitratos se debe transferir unos 5ml de cultivo a un tubo de ensayo y agregar 1ml del reactivo de Griess. Si la reaccion es negativa los microorganismos han oxidado de nitritos a nitratos.

Por lo que se coloca 5ml de cultivo en un tubo, se agrega 50mg de urea y 10 gotas de acido sulfúric. Calentar para eliminar los nitritos, y luego añadir 1ml de reactivo difenilamida por las paredes del tubo por las paredes del tubo y ver si aparece un color azul, lo que indica presencia de nitrato.

Se inocula gránulos de suelo en tubos que llevan dentro una campanita de vidrio sin agitar y se incuba por 7 días a 25-27°C.

DESNITRIFICACIÓN

Si se ha reducido el nitrato hasta el estado nitrógeno molecular u oxido de nitrógeno quedaran retenidos en la campanita inmersa en el tubo. En este caso fue negativo. La comprobación de nitritos se comprueba agregando 1ml del reactivo de Griess al tubo de cultivo.

Para la amonificación(1er tubo) el medio de cultivo contiene peptona 0,2 g, solución salina 50 mL, solución de oligoelementos 1mL, agua 1L. Se distribuye en tubos y se esteriliza a110ºC durante 20 minutos. Se siembra unos gránulos de suelo y se incuba por siete días 25-27ºC.

AMONIFICACIÓN Y CELULOLISIS

Primera clase-->

Segunda clase-->

Después agregar 1 mL de reactivo de Nessler a cada tubo a ensayar. La aparición de un color ladrillo indica la presencia de amoniaco(1er tubo)-->

En el caso de la celulosis(2do tubo) el medio de cultivo contiene: nitrato de amonio 1 g, solución salina 50mL, solución de oligoelementos 1 mL, agua 1 L. Se siembra unas gotas de una suspensión de suelo, que haya sido abonado con estiércol, e incubar dos a tres semanas a 25-27C.

Donde el papel sobresale del líquido se acumulan las bacterias celulolíticas aerobias y suele colorearlo(2do tubo). Sacar la tira de papel y colocarla en un portaobjetos para observar el ataque de las fibras bajo la lupa.Comprobar si se disgrega con facilidad al tocarla con el asa.

Medio de cultivo: almidón soluble 2 g, nitrato de amonio 1 g, solución salina 50mL, solución de oligoelementos 1mL, agar 15 g, agua 1 L. Esterilizar a 110ºC durante 20 minutos. Distribuir en cajas dePetri. Se siembra unos gránulos de suelo por siete días e incubara25-27ºC.

AMILOLISIS

Cubrir la superficie con Lugol. La zona de hidrólisis alrededor del crecimiento microbiano aparece de clara sobre fondo azul.

SULFATO OXIDACIÓN Y REDUCCIÓN Y SOLUBILIZACIÓN DE FOSFATOS

Clavito

Para el caso de la solubilizacion debemos observar la formación de una zona transparente al rededor de las colonias.

Sulfato-reducción: Ver si el clavo se ha ennegrecido por la formación de sulfuro de hierro debido a los microorganismos. Sulfo-oxidación: Volcar2mL del cultivo en otro tubo, acidificar condos gotasde ácido clorhídrico concentrado y añadir 5 gotas de solución acuosa de cloruro de bario al 5%. p/v. La aparición de una opalescencia indica que se han formado sulfatos por la actividad microbiana.

Evaluación de la producción de biogás:Para comprobar la producción de biogás se coloca en un frasco vidrio estiércol fresco de vaca, viruta de madera y agua(3/4 parte). Tapamos el frasco e incrustamos una mangera en un orificio realizado en la tapa. Al otro extremo de la manguera lo introducimos en un bureta con agua; luego introducimos la bureta junto con la manguera en un frasco con agua. Como el gas tienede a ocupar la parte superior de los recipientes en la bureta se podrá observar como deciende el nivel del agua debido a la acumulacion de biogas.

PARTE 2: DIGESTIÓN ANAERÓBICA

Condiciones críticas: _Aireación-Humedad adecuada(50-60%), no superior a 70%- Relación Carbono-Nitrógeno de 30:1

Las denominadas bacterias metanógenas son anaerobias estrictas y reducen al dióxido de carbono. El gas formado en la fermentación metánica es una mezcla de metano y dióxido de carbono. Dependiendo de la composición del material de partida, se puede producir biogás con alrededor de 7% de metano. Se emplea estiércol, paja y lodo procedente de otro digestor. Resulta importante su estudio porque en sociedades urbanizadas la eliminación de residuos orgánicos es un problema difícil y caro

GRACIAS<3

LUANA ALMAZANCOMISION 1GRUPO 4

V inicial

V final

Los microorganismos juegan un papel fundamental en procesos naturales que afectan al ambiente. Un ejemplo es la fijación de N molecular por organismos de vida libre y/o reciclado de materiales orgánicos. Empleando medios selectivos se puede lograr cultivos enriquecidos en microorganismos con características fisiológicas determinadas.