P3S2

P3S2 RETROTRANSCRIPCIÓN

Equipo 3 : Sofia Cornejo Valencia(00479589)Juan Román Gutiérrez Manjarrez(00470918) Frida Yarely Pérez Ubando (00475873) Karyme Sanchez Peralta(00486403)

Índice

¿Por qué se requiere que el RNA se retrotranscriba para determinar la presencia del RNAm?

¿Cuál es el objetivo de adicionar oligo d(T) para realizar la retrotranscripción?

Esquema tubo A y B

¿Qué ventajas posee la qPCR (PCR en tiempo real) sobre la PCR punto final?

¿Qué es el cDNA?

PCR SYBR green

Referencias

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¿Por qué se requiere que el RNA se retrotranscriba para determinar la presencia del RNAm?

Este paso es necesario porque el RNA es una molécula muy lábil. Contrario al DNA que es muy estable, además el tener cDNA nos permite realizar la PCR ya que no es posible realizar esta técnica con RNA.

Amaru Ricardo, Peñaloza Rosario, Miguez Hortencia, Torres Gina, Cuevas Heriberto. UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular. Cuad. - Hosp. Clín. [Internet]. 2008 [citado 2023 Oct 31] ; 53( 1 ): 38-43. Disponible en: http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1652-67762008000100007&lng=es.

¿Cuál es el objetivo de adicionar oligo d(T) para realizar la retrotranscripción?

Se le añade oligos ya que es una secuencia monocaternaria de desoxitimidina, utilizada como cebador de la transcriptasa inversa. Las secuencias complementarias a los extremos 3’ de la cola de poliA del mRNA, de manera que la retrotranscripción se inicia siempre por el extremo 3’ del mRNA.

¿Qué es el cDNA?

cDNA (DNA complementario) es un DNA a partir de un mRNA, donde el extremo 3’ del DNA monocatenario se repliega sobre sí mismo y sirve así de cebador para la polimerasa.

ADNc (ADN copia) [Internet]. Genome.gov. [citado el 31 de octubre de 2023]. Disponible en: https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/ADN-copia

qPCR SYBR green

Con esta técnica podemos medir la cantidad de material genético en cada ciclo, contrario a lo que pasa en la PCR punto final en la cual el resultado es relativo.

¿Cómo funciona?

IUtiliza la fluoresencia de un colorante que aumenta su brillo cuando está unido a DNA de doble cadena.

¿Cuándo se añade el colorante?

El colorante debe ser añadido antes de empezar con los ciclos para que pueda ser medido después de cada uno

¿Cómo se interpreta el resultado.

La detección de la fluoresencia al terminar cada ciclo nos permite determinar la CANTIDAD de transcrito que previamente fue pasado a cDNA.

1. Biosciences I. SYBR Green vs TaqMan – How qPCR works [Internet]. Youtube; 2023 [citado el 31 de octubre de 2023]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=n14TYAO5N3g

¿Qué ventajas posee la qPCR (PCR en tiempo real) sobre la PCR punto final?

La PCR en tiempo real permite cuantificar la cantidad de gen obtenido en cualquier momento de la amplificación mediante la señal de fluorescencia, o su nivel sobre el umbral y es tiene un rango de sensibilidad mucho mayor y es de alto costo. Y en la convencional se puede ver pero los genes en 2 etapas separadas, el rango de sensibilidad es menor, es de bajo costo.

Martínez A. PCR en tiempo real - Facultad de Química [Internet]. Facultad de Química. 2016 [citado el 27 de octubre de 2023]. Disponible en: https://quimica.unam.mx/investigacion/servicios-para-la-investigacion/usaii/pcr-en-tiempo-real/

REFERENCIAS

Martínez A. PCR en tiempo real - Facultad de Química [Internet]. Facultad de Química. 2016 [citado el 27 de octubre de 2023]. Disponible en: https://quimica.unam.mx/investigacion/servicios-para-la-investigacion/usaii/pcr-en-tiempo-real/ Amaru Ricardo, Peñaloza Rosario, Miguez Hortencia, Torres Gina, Cuevas Heriberto. UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular. Cuad. - Hosp. Clín. [Internet]. 2008 [citado 2023 Oct 31] ; 53( 1 ): 38-43. Disponible en: http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1652-67762008000100007&lng=es. Biosciences I. SYBR Green vs TaqMan – How qPCR works [Internet]. Youtube; 2023 [citado el 31 de octubre de 2023]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=n14TYAO5N3g ADNc (ADN copia) [Internet]. Genome.gov. [citado el 31 de octubre de 2023]. Disponible en: https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/ADN-copia

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