LABORATORIO

Laboratorio Clínico y Biomédico

Marta Lorente ToralAlba Haro Martín

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Técnicas inmuno diagnóstico

Microbiología

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TEMA 2 TÉCNICAS BASADAS EN REACCIONES AG-AC

TEMA 3 TÉCNICAS BASADAS EN REACCIONES AG-AC PRIMARIAS

TEMA 1 CONCEPTOS BÁSICOS

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TEMA 4ENFERMEDADES AUTOINMUNES

TEMA 5DIAGNÓSTICO DE ALERGIAS

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Células del sistema inmunológico

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CÉLULAS DENDRÍTICAS

GRANULOCÍTOS

MASTOCITOS

MACRÓFAGOS

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EOSINÓFILO

• Tienen afinidad por los colorantes ácidos, como la eosina.
• Tienen un núcleo bilobulado.
• Son responsables de la respuesta frente a infecciones parasitarias, aunque también participan en otras respuestas inmunológicas.

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NEUTRÓFILO

• Son los mas abundantes de los granulocitos
• Actuan y aparecen frente a infecciones parasitarias y otras respuestas.
• No se tiñen ni con colorantes ácidos ni básicos
• Tienen núcleo multilobulados desde 2 a 5 lóbulos.

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BASÓFILO

• Tienen afinidad por colorantes básicos, como la hematoxilina.
• Tienen un núcleo irregular difícil de observar debido a la alta granulosidad en su citoplasma.
• Representan menos del 1% de los leucocitos del organismo.
• Se desconoce su función, aunque se ven aumentados tras reacciones alérgicas.

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MASTOCITO

• Conocidas como "células cebadas"
• Contienen gránulos con mediadores inflamatorios conocido como histamina
• Son importantes en hipersensibilidad y protección de superficies internas

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CÉLULAS DENDRITICAS

• Tienen este nombre por su famosa forma de "arbol"
• Su función principal es la de presentacion de antígenos a otras células para su activación.
• Son células fagocíticas encargadas tanto de la ingestión de patógenos y su degradación.

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MACRÓFAGOS

• Son células fagocíticas y participan en el proceso de inflamatorio, iniciándolo mediante la liberación de moléculas llamadas citocinas.
• Además de su función inmunológica, también actúan como “basureros” del organismo, limpiándolo de células muertas y debris celular
• En la médula ósea se forman como monocitos, que viajan por el torrente sanguíneo y se diferencian en macrófagos al alcanzar los tejidos.

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Células del sistema inmunológico

LINFOCITOS

PLAQUETAS

ERITROCITOS

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CÉLULAS T REGULADORAS

CÉLULAS T CITOTÓXICAS

CÉLULAS T HELPER

Son una subpoblación de células T CD4+.Regulan o suprimen a otras células del sistema inmunitario para evitar reacciones exageradas.

También llamadas células T CD8+.Participan en procesos contra células tumorales o infectadas por virus.

También llamadas células T CD4+.4 Ayudan a otras células del sistema inmunológico, activándolas y dirigiéndolas.

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CÉLULAS T

CÉLULAS NK

CÉLULAS B

CÉLULAS ILC

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ERITROCITOS

• Son capaces de unirse a moléculas inflamatorias como quimioquinas, regulando y modulando la respuesta inmunológica.

• La Hb y el grupo hemo pueden producir ROS para defenderse frente microorganismos hemolíticos.

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Diagnóstico y seguimiento serológico de las enfermedades infecciosa

Técnicas de reacciones secundarias al diagnóstico serológico de enfermedades infecciosas

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Provocada por bacterias del género Rickettsia

Rickettsiosis

REACCIÓN DE AGLUTINACIÓN SEGÚN REACCIÓN DE WEIL-FELIX

RESULTADO + Confirmar el resultado con otrastécnicas, como hemaglutinación, y antígenos específicos de este agente infeccioso.

Esta prueba se basa en la reactividad cruzada de algunasespecies de Rickettsia con antígenos de distintas especies de bacterias del género Proteus.

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Brucelosis

Zoonosis provocada por Brucella spp. Infección por consumo de productos de animales infectados (leche cruda).

Antígeno de Brucella (lipopolisacárido de membrana externa con Ag O teñido con Rosa de Bengala con pH ácido)

Ac IgG e IgM del suero del paciente.

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Causante: virus de Epstein-Barr)

Mononucleosis infecciosa

Tiene epítopos similares a los antígenos (glucoproteínas de membrana, Ag de Paul Bunnell) de células de algunos animales (como eritrocitos de carnero o caballo).

Ac heterófilos producidos por infección de virus de Epstein-Barr)

Aglutinación..

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Enzimoinmunoensayos:

Pasos Básicos

Aunque existen diferentes tipos de técnicas ELISA, hay una serie de pasos que son comunesa todas ellas. Estos pasos son:

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No organoespecíficas

Organoespecíficas

Contra estructuras o componentes comunes a muchos tejidos distribuidos por el organismo. Habitualmente por anticuerpos frente a componentes intracelulares (como el núcleo).

Solo se ve afectado un órgano o una parte concreta del cuerpo

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Diabetes Mellitus 1

Enfermedad de Graves

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Miastenia gravis

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Enfermedad celíaca

Tiroiditis de Hashimoto

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Lupus eritematoso sistémico

Esclerosis sistémica:

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Síndrome seco o de Sjögren

Artritis reumatoide:

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Hipersensibilidad de tipo II

Hipersensibilidad de tipo I

Hipersensibilidad tipo IV

Hipersensibilidad tipo III

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Ejemplo

Hipersensibilidad tipo I

Unos de los ejemplos puueden ser las picaduras de insectos venenosos o la alergia al polen

Conocida como inmediata, ya que tiene lugar en cuestión de minutos tras el contacto con el antígeno. Está mediada por ac IgE, que activan a mastocitos y basófilos, los cuales a su vez liberan diversos mediadores de inflamación.

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Hipersensibilidad tipo II

Medidadas por anticuerpos IgG o IgM específicos para ag de membrana celular. Tiene lugar en cuestión de horas a días. El efector final es el sistema del complemento, que formará complejos de ataque a la membrana para la destrucción de la célula con el componente antigénico

Ejemplo

Unos de los ejemplos puueden la reacción a la penicilina, que puede unirse a la membrana de los eritrocitos, causando que sean reconocidos como agentes extraños.

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Ejemplo

Enfermedad del suero: una reacción generalizada por la administración de un suero animal.

Los inmunocomplejos pueden quedar depositados en los tejidos, activando la cadena del complemento → inflamación local y atracción de leucocitos → daño a células circundantes.Estos depósitos son frecuentes en órganos con altas tasas de filtración sanguínea (riñón o articulaciones sinoviales, por ejemplo).

Hipersensibilidad tipo III

En cuestión de horas a semanas tras el contactocon el Ag. Mediada por: gG o IgM específicos para Ag solubles.

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Ejemplo

Daño celular o tisular causado durante enfermedades como tuberculosis, lepra, viruela, sarampión, infecciones por herpes, candidiasis e histoplasmosis

Hipersensibilidad tipo IV

Es un tipo de hipersensibilidad retardada, debido al tiempo que se tarda en reclutar a las células de interés en la localización del antígeno..Suele aparecer tras 24-72 horas, y suelen requerir de un contacto prolongado con elantígeno

Se trata de una reacción de citotoxicidad mediada por células, producida por células T efectoras específicas de antígeno, activadas por la presentación del antígeno en cuestión. Estas células liberarán citoquinas y quimioquinas para atraer macrófagos y activarlos, que a su vez producirán factores pro-inflamatorios.

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Tema 1. Introducción al laboratorio de microbiollogía

Tema 3 Cultivo de microorganismos.

Tema 2Introducción a la bacteriología. Tinciones

Tema 4 Pruebas de identificación bacteriana

Tema 5 Antibióticos. Sensibilidad y resistencia

Clasificación de los microorganismos en grupos de riesgo

Grupo 1

Grupo 2

Grupo 3

Grupo 4

Grupo 1

• Baja probabilidad de causar enfermedad en el ser humano, practicamente nula en adultos sanos.

• habitualmente se aplican las buenas prácticas del laboratorio para el trabajo con este tipo de microorganismos.

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Grupo 2

• Puede causar enfermedad en el ser humano, aunque existen tratamientos eficaces o profilaxis.

• El riesgo de contagio a la colectividad es bajo.

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Grupo 3

• Suponen un serio peligro para el ser humano puesto que puede causar enfermedades graves.
• Existe riesgo de propagación a la colectividad.
• Generalmente existen tratamientos eficaces o profilaxis.

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Grupo 4

• Suponen un serio peligro porque pueden causar una enfermedad grave.
• Alto riesgo de propagación a la colectividad.
• Generalmente no existen tratamientos eficaces ni profilaxis.

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Características células procariotas

Membrana plasmática

Medio interno

Pared celular

Cápsula

Mesosomas

Nucleoide

Citoesqueleto

Flagelos

Fimbrias

Pili

Vacuolas

Ribosomas

Cápsula

Es una estructura que envuelve la pared celular, y que está presente sólo en algunos tipos de bacterias. Está formada por proteínas (polipéptidos) y glúcidos (polisacáridos), y surge por acumulación de sustancias de excreción del metabolismo bacteriano y la interacción con el hospedador. Sus funciones principales son la protección (frente a desecación y fagocitosis) y la adherencia al medio, mediante las cuales se facilita la supervivencia cuando colonizan al ser humano.

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Pared celular

Envuelve la membrana plasmática. Es una capa más o menos rígida cuya función es la de la protección, siendo así considerada como el “esqueleto externo” de la célula. Está formada principalmente por peptidoglicanos (proteínas y glúcidos), mayormente por mureína.

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Mesosomas

Invaginaciones de la membrana plasmática hacia el citoplasma. En ellas se encuentran las enzimas responsables de realizar importantes procesos metabólicos, como la respiración celular.

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Flagelo

Apéndices alargados y poco numerosos, cuya función radica en la movilidad celular. En función del número de flagelos y su disposición en la célula, pueden clasificarse las bacterias en: atricas (sin flagelo), monotricas (un flagelo en un polo), anfitricas (un flagelo en cada polo), lofotricas (penacho de flagelos en uno o en los dos polos) y peritricas (flagelos distribuidos por toda la periferia).

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Citoesqueleto

Para mantener la forma celular y permitir el movimiento tanto de la propia célula como de los elementos intracelulares. Está formado por proteínas bacterianas y otras similares a proteínas eucarióticas, como proteínas similares a tubulina y actina.

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Nucleotide

Es la región del citoplasma en la que se encuentra el ADN, formado por un único cromosoma circular. Además de este ADN, muchas procariotas contienen moléculas de ADN circulares adicionales denominadas plásmidos. Estos plásmidos no son esenciales para la supervivencia en ambiente no hostiles, pero pueden conceder ventajas adaptativas en ambientes hostiles, ya que contienen genes como genes de resistencia frente a antibióticos, o genes de virulencia, entre otros.

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Fimbrias

Antes denominadas pili comunes. Se encuentran en los polos celulares o repartidos por toda la superficie. Ayudan en la adherencia celular.

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Pili

Antes llamados pili sexuales. Son más largos que las fimbrias, y solo hay uno o dos por célula. Están involucrados en la conjugación bacteriana. El proceso de conjugación bacteriana es el proceso mediante el cual las bacterias son capaces de intercambiar material genético. Esto es especialmente importante en el caso de plásmidos que contienen genes de resistencia a antibióticos.

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Membrana plasmática

Compuesta por una bicapa lipídica que actúa como barrera de permeabilidad selectiva y aísla el medio interno del externo.

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Medio interno

Llamado citosol o hialoplasma, en el que se encuentran todos los orgánulos y estructuras celulares inmersas en el citoplasma (medio acuoso).

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Vacuoola

Gránulos que contienen sustancias de reserva. También pueden servir para mantener su flotabilidad en medios acuosos, como las vacuolas de gas, o para mantener el pH interno.

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Ribosoma

Necesarios para la síntesis de proteínas. Están formados por dos subunidades (mayor y menor) formadas por proteínas y ARN ribosómico (ARNr), como los de las células eucariotas, pero se diferencian en la composición y las velocidades de sedimentación (S)1 . Resultan de especial interés el análisis del ADN codificante de las moléculas de ARNr 16S y 23S para la identificación bacteriana por métodos moleculares, como se verá en próximas unidades.

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Base mineral

Nutrientes inorgánicos, como macronutrientes (K, Ca, Fe…), micronutrientes (Mn, Co, Cu, Zn…), fósforo (en forma de sales, para regular el pH), y otros requerimientos específicos

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Suplementación

Fuentes de carbono, nitrógeno, azufre, factores de crecimiento, etc.

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Agente solidificante

Como agar (obtenido a partir de algas marinas) o gelatina (a partir del colágeno de tejidos animales). El agar es el más empleado, puesto que el punto de fusión (temperatura a la que se licúa) es mayor que el de la gelatina (85-95ºC comparado con los 31-34ºC de la gelatina), permitiendo los cultivos a mayor temperatura sin que el medio se licúe. Además, algunas bacterias tienen la capacidad de licuar la gelatina.

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Extractos

Animales, vegetales o de levaduras. Son mezclas ricas en hidratos de carbono, proteínas, vitaminas y minerales.

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Sales

Habitualmente cloruro sódico (NaCl), que permite corregir el equilibrio osmótico

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Hidratos de carbono

Como la glucosa, por ejemplo. Son las principales fuentes de carbono y energía. También son útiles para facilitar la identificación.

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Peptonas

Producto de la digestión ácida o enzimática de proteínas, composición variable. Ricas en aminoácidos y péptidos (proteínas), siendo una buena fuente de nitrógeno.

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Amortiguadores e indicadores de pH

Para permitir el crecimiento óptimo del microorganismo de interés y detectar variaciones de pH en el medio

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Sangre, suero y plasma

Aportan hormonas y factores de crecimiento. La sangre permite la detección de reacciones hemolíticas, así como aporta hemina (factor X), requerida por algunos microorganismos para su crecimiento, y el plasma permite detectar la actividad coagulasa. La sangre no puede ser esterilizada, por lo que se debe extraer en condiciones de asepsia de un animal sano.

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Otros

Habitualmente compuestos selectivos, que permiten el crecimiento del microorganismo de interés y eliminan los microorganismos no deseados. Son, por ejemplo

Agentes reductores

Bilis y sales biliares

Colorantes

Antibióticos

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Bilis y sales biliares

Inhiben los grampositivos. Las sales biliares tienen un efecto detergente sobre la pared de las bacterias, afectando más intensamente a grampositivas que a gramnegativas. Esto ocurre porque las bacterias gramnegativas son resistentes a la acción de la bilis y sales biliares, debido, en parte, a la estructura de su membrana externa, que contiene lipopolisacáridos. Estas moléculas impiden el acceso de compuestos hidrofóbicos y anfipáticos como las sales biliares, funcionando así como una barrera de permeabilidad y proporcionando protección. Las bacterias entéricas son principalmente gramnegativas.

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Agentes reductores

Para eliminar oxígeno libre y facilitar la anaerobiosis. Son principalmente aminoácidos azufrados, como la cisteína. En estos casos es común incluir infusión de cerebro-corazón o hígado, ricos en aminoácidos azufrados, capaces de reducir el potencial redox, lo que favorece el desarrollo de los microorganismos microaerófilos o anaerobios1 .

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Antibióticos

Para inhibir el crecimiento de microorganismos no deseados.

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Colorantes

Pueden emplearse para inhibir el crecimiento de determinados grupos de microorganismos, principalmente grampositivos.

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Pruebas de identificación bacteriana

Pruebas lentas

Se leen en un periodo de 18-48 horas tras la incubación. En general son pruebas de oxidación-fermentación: se investiga si el uso de hidratos de carbono se realiza por vía oxidativa (proceso aeróbico) o por vía fermentativa (proceso anaeróbico). Estas suelen consistir en la inoculación de un medio que contiene el azúcar de interés y un indicador de pH. También se incluyen en este apartado las pruebas de resistencia frente a diferentes sustancias.

Prueba de óxido-fermentación (O/F) o Hugh-Leifson

Prueba coagulasa

Medio de Kligler

Prueba de CAMP

Sistemas automatizados

Prueba de solubilidad en bilis

Prueba coagulasa

Util para diferenciar Staphylococcus aureus (productor de coagulasa) de otros Staphylococcus coagulasa negativos. çLa coagulasa reacciona con la protrombina, dando lugar a la formación de coágulos. Se realiza incubando una colonia en suero en un tubo de ensayo. Si la bacteria es coagulasa positiva, secretará estafilocoagulasa, que iniciará la coagulación al activar la protrombina. En este caso, se observará un coágulo.

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Prueba de CAMP

Detecta la capacidad del microorganismo para producir la proteína conocida como factor CAMP. Este factor produce un efecto sinérgico con la beta-hemolisina de Staphylococcus aureus sobre los eritrocitos del medio, produciendo un fuerte fenómeno de co-hemólisis. Para esta prueba, se inocula sobre agar sangre una estría vertical de S. aureus. A continuación, se inocula perpendicularmente una estría del microorganismo de interés dejando, 1 cm entre ambas estrías. Si aparece una zona de hemólisis con forma de punta de flecha en la zona donde quedan cercanas ambas estrías, el test es positivo.

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Sistemas automatizados

Actualmente, existen sistemas y equipos multipruebas semiautomáticos y automáticos que agrupan diferentes pruebas en forma de galerías, paneles o tarjetas miniaturizadas, que son incubadas y se leen de manera automática. Suponen mayor rapidez y comodidad, pero también un mayor coste económico.

Sistemas comerciales manuales o galerías multiprueba

Sistemas comerciales automatizados

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Prueba de óxido-fermentación (O/F) o Hugh-Leifson

Empleada para determinar el tipo de metabolismo (oxidativo o fermentativo). Se siembran dos tubos con agar con glucosa y azul de bromotimol como indicador de variación de pH (cambia de color verde a amarillo al disminuir el pH). Uno de los tubos se incuba en anaerobiosis tapando con parafina estéril. Si ninguno de los dos tubos cambia de color, el microorganismo no utiliza glucosa. Si solo cambia de color en aerobiosis, implica que únicamente presenta metabolismo oxidativo. Si presenta cambio de color en ambos tubos, presenta metabolismo oxidativo y fermentativo.

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Medio de Kligler

Medio sólido en pico de flauta. Contiene rojo fenol, glucosa (0.1%), lactosa (1%), citrato férrico amónico y tiosulfato sódico.

• Si hay fermentación de la glucosa, se colorea de amarillo el fondo del tubo y el resto queda rosa.
• Si hay fermentación de la lactosa, todo el tubo queda amarillo, puesto que este azúcar es más abundante.
• El citrato férrico amónico y el tiosulfato sódico permiten revelar la formación de sulfuro ferroso, que ennegrece el tubo.
• Si se produce gas, el medio se rompe o se separa del tubo.

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Prueba de solubilidad en bilis

Las sales biliares provocan un descenso de la tensión superficial (efecto detergente) que, junto a la acción de enzimas autolíticas, provocan la lisis de algunas especies bacterianas. Esta prueba es específica para la detección de Streptococcus pneumoniae, que posee una amidasa intracelular, una enzima autolítica que se activa en presencia de sales biliares, dando lugar a autolisis celular. La prueba se puede hacer en placa (observando si desaparecen colonias o se produce lisis en agar sangre o agar chocolate) o en tubo (si el tubo inoculado se aclara, esto es, disminuye la turbidez, con respecto a un tubo control con solución salina e inóculo, es positiva).

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Sistemas comerciales manuales o galerías multiprueba

Se trata de sistemas que contienen entre 10 y 50 celdillas con sustrato liofilizado, cada una de ellas para la relación de una prueba bioquímica diferente. Se debe inocular cada una de las celdillas individualmente. Las pruebas se agrupan en tríos, de cada uno de los cuales se obtendrá un resultado numérico: las pruebas negativas tendrán un valor 0, y las positivas, los valores 1, 2 o 4, en función de si están en la primera, segunda o tercera posición del trío, respectivamente. Los números de cada trío se suman, y el conjunto de dígitos obtenido de cada trío corresponderá con un código numérico de una especie bacteriana concreta. Algunos de los sistemas comerciales manuales disponibles en el mercado son API (bioMérieux), Enterotube (BBL), Biochemical ID systems (Microgen), Oxi/Ferm Tube (BD), RapID systems y MicroID (Remel), etc.

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Sistemas comerciales automatizados

Se trata de equipos que emplean galerías multiprueba, en los que la inoculación, la incubación y la lectura se realizan de forma automática. Los resultados son directamente enviados a un ordenador que los procesa proporcionando la identificación de la bacteria con un alto grado de fiabilidad. Algunos de los sistemas comerciales automatizados disponibles en el mercado son MicroScan ®, Vitek®, Phoenix®, Pasco®, Wider®, ATB®, etc.

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Medios de cultivo

Los medios de cultivo son mezclas equilibradas de agua y nutrientes que permiten el crecimiento de un microorganismo in vitro (del latín, “en vidrio”). Estos medios deben tener una composición adecuada para el microorganismo que se quiera hacer crecer. Actualmente, no es habitual el diseño de los medios de cultivo en el laboratorio de microbiología clínica puesto que la gran mayoría de los requeridos para el crecimiento de patógenos más comunes se encuentran comercializados. El diseño se reserva a laboratorios de investigación o de microbiología general o ambiental. De forma general, todos los medios contienen los siguientes elementos:

Una base mineral

Suplementación

Peptonas

Un agente solidificante

Amortiguadores e indicadores de pH

Además de estos elementos básicos, si nos centramos en microbiología clínica, otros componentes muy habituales en los medios de cultivo son:

Extractos

Sangre, suero y plasma

Sales

Hidratos de carbono

Otros

Antibiogramas por difusión

Los antibiogramas por difusión son aquellos en los que el antimicrobiano se deposita en el medio de cultivo y sus moléculas se mueven por él, creando un gradiente de concentración teniendo las zonas más alejadas del inóculo inicial menor concentración, y las más cercanas, mayor. Diferenciamos entre el método de Kirby-Bauer y el E-test.

Método de Kirby-Bauer

Método del Épsilon test

Tanto en el método de Kirby-Bauer como en el E-test, es posible que aparezcan pequeñas colonias bacterianas alrededor del halo de inhibición, especialmente cercanas al borde de este. Esto se debe a la presencia de mutaciones que las hacen más resistentes al antibiótico. Estas colonias no se tienen en cuenta a la hora de realizar la medición del halo

Método de Kirby-Bauer

También conocido como método de disco-placa. Esta técnica consiste en la siembra de una placa con inóculo del microorganismo de interés puro, sobre el cual se depositarán en la superficie del agar discos de papel secante impregnados con diferentes antibióticos. El antibiótico difunde por el agar creando un gradiente de concentración, siendo máxima en las inmediaciones del disco y menor a medida que nos alejamos de él. Tras una incubación de 18-24 horas se podrán observar áreas circulares alrededor de los discos en los que no habrá crecimiento microbiano, demostrando que el microorganismo en cuestión es sensible al antibiótico al que se enfrenta. Estas zonas reciben el nombre de halos de inhibición, y su lectura se basa en la medición de su diámetro en milímetros mediante el uso de una regla o pie de rey. Existen unos diámetros de inhibición estandarizados para cada antimicrobiano. La zona de interfase entre el crecimiento bacteriano y el comienzo del halo de inhibición se conoce como concentración crítica. Las placas de agar transparente se leen por el reverso, mientras que las placas de agar oscuro (como agar sangre) se harán directamente sobre la superficie del agar.

La siembra del microorganismo suele realizarse en agar Mueller-Hinton, y puede hacerse de dos formas:

Método del medio de cultivo líquido

Método de la suspensión directa de colonias

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Método del medio de cultivo líquido

Se toman 3-5 colonias del microorganismo de la placa de cultivo tras 18-24 horas y se siembran en medio líquido, incubando a 35ºC entre 2-6 h, hasta alcanzar una turbidez 0.5 en la escala de McFarland. Una vez obtenida esta equivalencia, se siembra sobre la placa de agar donde se va a realizar el antibiograma con ayuda de un hisopo antes de que transcurran 15 minutos.

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Método de la suspensión directa de colonias

A partir de una placa de cultivo de 18-24 horas se toman varias colonias, se resuspenden en suero fisiológico hasta alcanzar una turbidez de 0.5 de McFarland, y se siembra sobre el agar. Este es el método elegido para microorganismos de crecimiento difícil en medios líquidos, como Neisseria, Streptococcus o Listeria.

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Tras la inoculación del microorganismo en la placa, se debe dejar secar durante 3-5 minutos antes de colocar los discos. Estos deben manipularse con pinzas estériles, presionando ligeramente en el agar, sin hundirlos, y dejando la suficiente distancia entre unos y otros para que no se superpongan los halos de inhibición entre ellos. Las placas se incuban invertidas a 35ºC en atmósfera aeróbica durante 18-24 horas. 4 Esta técnica es económica, rápida y sencilla, y se aplica a una gran variedad de bacterias, principalmente aquellas aerobias no exigentes de crecimiento rápido. Sin embargo, uno de sus principales inconvenientes es que no permite determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) del antibiótico. Este parámetro es similar a la concentración crítica, pero no puede determinarse de forma exacta mediante esta técnica.

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Método del Épsilon test

También conocido como E-test. Es un método similar al de Kirby-Bauer, con la diferencia de que en este caso el soporte en el que está impregnado el antibiótico es una tira de 6 cm de largo por 5 mm de ancho. El compuesto se dispone como un gradiente de concentración a lo largo de la tira, equivalente a 15 diluciones del mismo. La inoculación del microorganismo en la placa se realiza de la misma forma que en el método de Kirby-Bauer, y habitualmente se coloca una sola tira por placa haciendo uso de unas pinzas estériles. Se debe tener cuidado a la hora de depositarla sobre el agar, ya que si se coloca boca abajo (por la parte no impregnada), el gradiente no se formará correctamente.

Una de las ventajas de este método es que permite la determinación de la concentración mínima inhibitoria, esto es, la concentración mínima de antibiótico que se requiere para poder evitar el crecimiento del organismo en cuestión. La CMI corresponde con el valor del punto de intersección del halo de inhibición (que en este caso tendrá forma elipsoidal y simétrica) con la tira.

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Síndrome seco o de Sjögren

Ataque de glándulas exocrinas que generan fluidos en ojos, boca, etc. AutoAc ANA, factor reumatoide, anti-Ro (contra proteínas Ro, parecen ayudar a mantener el ARN en condiciones de estrés y aumentar la supervivencia celular). Consecuencias: ojos y boca seca, cansancio, dolor muscular...

PLAQUETAS

• Son de pqueño tamaño.

• Provienen de los megacariocitos.
• Participan en coagulación y regulan la maduración y activación de células fagocíticas (macrófagos, neutrófilos, células dendríticas).

CÉLULAS B

• Reconocen antígenos a través de sus receptores (receptores de céulas B, BCR), tras lo cual se diferencian a células productoras de anticuerpos.

• IMPORTANTE SABER QUE AL MICROCÓPIO NO PODEMOS DIFERENCIAS ENTRE CÉLULAS T Y B

Enermedad autoinmune mediada por células T citotóxicas autorreactivas específicas para las células β pancreáticas, localizadas en los islotes de Langerhans y encargadas de la producción de insulina En etapas tempranas de la enfermedad pueden encontrarse anticuerpos marcadores responsables de la destrucción de dichas células, como los anticuerpos anti-descarboxilasa del ácido glutámico 5, la insulina no puede ser producida y no se puede regular la entrada de glucosa desde el torrente sanguíneo al interior de las células, produciendo hiperglucemias. Puede tratarse mediante la inyección de insulina exógena.

Incubación

La unión de antígenos con anticuerpos requiere de cierto tiempo, ya que no se producen inmediatamente. Las incubaciones suelen durar unas 2-3 horas a temperatura ambiente o a 4ºC toda la noche. Temperaturas bajas aumentan la probabilidad de que el componente añadido se una inespecíficamente a otras moléculas, por lo que suele recomendarse incubar a 37ºC.

Enteropatía que afecta principalmente al intestino delgado, y que es inducida por el gluten, una proteína compleja conformada por gliadinas y gluteninas presente en las semillas de muchos cereales. La enzima transglutaminasa tisular es una proteína que desamina la glutamina, convirtiéndola en ácido glutámico, con carga negativa. Como consecuencia, se produce atrofia de las vellosidades intestinales y malabsorción, con los consecuentes síntomas (pérdida de peso, distensión abdominal, diarrea, etcétera).

Artitris Reumatoide

Enfermedad inflamatoria crónica que afecta ppalmente a articulaciones periféricas. Linfocitos B sinoviales producen factor reumatoide: autoAc IgM anti-Fc de las IgG. Asociada a alelos HLA-DR4, DR1, virus de la rubeola, virus del Epstein-Barr. Durante inflamación: citrulinación (cambio de argininas por citrulilna volviendo las proteínas antigénicas

Lavados

Tras los pasos que requieren adición de reactivos, como puede ser las incubaciones, el tapizado o el bloqueo, se deben eliminar las moléculas sobrantes que no han interaccionado. Si no se eliminasen, podrían diluir otros componentes añadidos posteriormente e interferir con los resultados

CÉLULAS ILC

Son células linfóides innatas Tienen funciones similares / análogas que las células T o Helper.

Son más difíciles de visualizar directamente bajo un microscopio convencional, su observación directa puede requerir técnicas más avanzadas que las utilizadas para los análisis sanguíneos rutinarios.

Frenado o parada

Tras el tiempo de incubación de la enzima con su sustrato para permitir la reacción que dará un resultado colorimétrico visible, es necesario parar la actividad enzimática. Esto se debe a que se realizan curvas patrón con diluciones conocidas, y deben detenerse todas al mismo tiempo; de lo contrario, algunas sobrepasarían la señal al continuar con la reacción y saldrían de la linealidad, haciendo que la calibración no fuese adecuada.

La acetilcolina es un neurotransmisor que permite la contracción de los músculos, entre otras funciones. Los auto-anticuerpos producidos contra el receptor de acetilcolina bloquean su función en la unión neuromuscular, además, la unión de los anticuerpos activa la cascada del complemento, formándose el complejo de ataque a la membrana, y provocando daños en la membrana postsináptica, destruyendo los pliegues sinápticos que contiene los receptores de acetilcolina y las proteínas asociadas. De este modo, el impulso nervioso no puede transmitirse adecuadamente y se produce debilidad muscular

Bloqueo o postapizado

Duante el paso de tapizado, es posible que algunas zonas del soporte no se unan al componente añadido, de modo que quedarán áreas “en blanco”. Esto podría generar interferencias durante el análisis si se unieran otros componentes utilizados en pasos posteriores, para evitarlo, se añade una proteína que no interactúe con los antígenos y anticuerpos añadidos, pero que se adhiera a los lugares vacíos, evitando que otros componentes inespecíficos queden adsorbidos

La glándula tiroides produce las hormonas tiroxina y triyodotironina, encargadas del control del metabolismo del organismo. El primer paso para su síntesis es la yodación de su proteína precursora, la tiroglobulina. El I necesario procede de una reacción en la que se oxida el ion yoduro, catalizada por la tiroperoxidasa. En la tiroiditis de Hashimoto, se observa la presencia de ac anti-peroxidasa tiroidea y/o anti-tiroglobulina, lo que impide la captación de yodo o el funcionamiento de la tiroglobulina. Así, las hormonas no se sintetizan adecuadamente, se produce inflamación de la glándula tiroides (bocio)

Conjugación

Es la unión del antígeno o anticuerpo que se quiere marcar a la enzima que actúa como marcador. Muchos están ya preparados por casas comerciales para la disposición directa del laboratorio, aunque también pueden prepararse utilizando agentes que hagan de enlace o puente entre el antígeno o anticuerpo y la enzim

TAPIZADO O "COATING"

Los anticuerpos o antígenos deben inmovilizarse en el soporte. Para favorecer la adsorción, se emplea solución tampón a pH 9.6 y se incuba 3 horas a 37ºC o 16 horas a 4ºC.

Algunas casas comerciales venden las placas de microtitulación ya tapizadas.

Lupus Eritematoso

Se trata de una enfermedad autoinmune sistémica crónica que se caracteriza por la existencia de linfocitos B y T autorreactivos y la Inhibición de linfocitos T reguladores. La característica inmunológica distintiva de esta enfermedad es la producción de anticuerpos antinucleares (ANA), de múltiples specificidades, como los Anti-ADNdc (frente a ácido desoxirribonucleico de doble cadena) o anti-Nuc (frente al nucleosoma).

Uno de los factores más relacionados con el desarrollo de esta enfermedad es la radiación ultravioleta, que aumenta la apoptosis de queratinocitos

Enfermedad Graves

La estimulación de la secreción de las hormonas tiroideas se produce gracias a la adenohipófisis, que produce la tirotropina (también conocida como hormona estimulante de la tiroides). En la enfermedad de Graves, en el organismo se encuentran anticuerpos frente al receptor de la tirotropina.

La unión del anticuerpo al receptor provoca que este quede activado de manera permanente, sobreestimulando a la tiroides y dando lugar a la aparición de hipertiroidismo, con síntomas como ansiedad e irritabilidad, pérdida de peso, bocio, etc.

PLAQUETAS

• Son células grandes con capacidad para reconocer y matar ciertas células tumorales y células infectadas por virus.
• Contienen gránulos citoplasmáticos con proteínas que pueden causar daños en la membrana plasmática de la célula diana, dando lugar a apoptosis (muerte celular programada)

Enfermedad Graves

Enfermedad discapacitante crónica. Ac antinucleares como anti-centrómero y anti topoisomerasa I, así como anti-receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas. Se cree que la diana de los ataques son las células endoteliales de vasos sanguíneos pequeños.

Consecuencias: fibrosis en la piel, en vasos sanguíneos y órganos internos. Fatiga, problemas digestivos y cardiorrespiratorios, hipertensión, etc.Fibrosis (endurecimiento) en la piel causada por la esclerosis sistémica.

¿Que son los Granulocitos?

Se tratan de leucocitos caracterizados por la prsencia de pequeños gránulos proteicos con enzimas en su citoplasma. Dentro de estre grupo nos encontramos: