Tinciones microbiológicas.

Tinciones.

tinciones microbiológicas.

UPAEP.Microbiología general.Docente: Hector Galván Ramos. Grupo 8. Alumna: López Ramírez Brenda.

Definición.

Conceptos.

Tipos de tinción.

GRAM +.

GRAM -.

WRIGHT.

ZIEHL-NEELSEN.

AZUL ALGODÓN DE LACTOFENOL.

NEGATIVA.

ZIEHL-NEELSEN.

Se utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis.

• Clasificación de bacterias: Capaces de resistir la decoloración con alcohol-acido y los que no.
• Trabajos de Paul Ehrlich y cientÍfico Franz Ziehl y Karl Adolf Neelsen.
• La pared celular está compuesta por ácido mesodiaminopimélico, alanina, arabinosa y galactosa.
• Para la tinción se debe colocar carbol- fucsina y calentar la preparación para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos gracias de la pared celular para que que permita el paso libre del colorante
• Afinidad por ácidos micólicos.
• Cuando se enfrían, la pared se solidifica, resiste a la acción abrasiva de alcohol-acido.
• Contra-tinción se utiliza el azul de metileno.
• Se utiliza para Líquidos:cefalorraquideo, pleural, sinovial, pericardio, biopsias, cultivos, aspirados endotraqueales y lavados braquioalveolares.
• Tinción positiva se pueden observar bacilos acido-alcohol resistentes (color fucsia).

WRIGHT.

Se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología.

• Es para diferenciar de elementos celulares de la sangre.
• Clasificacion de tinción policrómatica (compuestos ácidos o básicos)
• 1902 patológo James Homer Wright.
• Usos: Buscar hematozoarios .
• Compuesta por eosina y azul de metileno. La eosina es colorante ácido con afinidad por componentes alcalinos.
• Hay dos compuestos de la eosina: Eosina Y(amarilla - colorea componentes citoplasmaticos “acidófilos”) y B (azulada - intensidad de la coloración)
• Núcleos y granulocitos neutrofilicos - Morado
• Citoplasma - Rosa
• Ácidos nucleicos - Azul.

EJEMPLOS PRINCIPALES.

Gram +/-. Wright. Ziehl-Neelsen. Negativa. Azul algodón de lactofenol.

CONCEPTOS CLAVE:

Colorante:

Sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etcétera. Clasificación: -Colorantes naturales: Extraídos de plantas o animales. -Colorantes artificiales: Aquellos deminerales procesados y manipulados en el laboratorio. Compuesto por: -Cromoforos: Grupo aislado, absorción característica en la región ultra-violeta o visible; capacidad que tiene la molécula para que sus electrones absorban energía o luz visible. Hay dos tipos sistemas conjugados o complejos metálicos. Son grupos funcionales con dobles y triples enlaces carbono-carbono, anillos aromáticos,grupos carbonilos, imino, diazo, nitro y enlaces entrecarbono. .-Auxócromo: Grupos funcionales o radicales , poseen carga parcial positiva;tienen la función de intensificar la formación de color mediante la acción de grupos de átomos no saturados;su función es desplazar a los cromóforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad. Ej. grupo metilo, halógenos, hidroxi, alcoxi yamino.

Función: Permiten hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes. Revelan su forma y tamaño. Muestran la presencia de estructuras internas yexternas. Producen reacciones químicas específica.

Ácido micólico:

Fijador:

Ácidos grasos que están presentes en las paredes celulares de las micobacterias.

Consiste en preservar las características tisulares o estructuras. Hay Físicos y químicos, clasificación oxidantes y reductores. Su proceso es la desecación, calor seco/ húmedo, ultrasonido y microondas.

Gradiente Osmótico:

Favorece la entrada del agua, originando una rápida expansión de la membrana.

AZUL ALGODÓN DE LACTOFENOL.

Preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos.

• Tinción entre pared y citoplasma de las células fúndicas.
• No tinción diferencial.
• Uno de sus componentes que es el fenol inactiva las enzimas liticas de la celula y asi evita que se rompa, destruye la flora quitan el grado de patogenicidad. Actua como mordiente cuando se usa en combinacion con colorantes.
• Otro componente es el Ácido lactico ya que preserva las estructuras fungicas al provocar un gradiente osmotico con relacion al interior fungico.
• Azul de algodón: Colorante ácido, tiñe citoplasma y quitina presente en las celulas fungicas.
• Glicerol: Mantiene humeda la preparacion.
• Despues de la preparacion del colorante se debe colocar la muestra microbiologica en un portaobjetos por medio de una impronta. Cuando haya presencia de un hongo filamentoso se debe pasar una placa en medio dextrosa Sabouraud para tener mayor manipulacion e identificar con facilidad las caracteristicas macroscopicas.
• Las estructuras fúngicas se observaran de color azul sobre un fondo blanco.

DEFINICIÓN DE TINCIÓN.

Las tinciones son herramientas elementales, vigentes y de uso universal que ayudan al diagnóstico microbiológico. Proceso para mejorar el contraste por medio de colorantes y fijadores. IMPORTANCIA: Se debe practicar la tinciónadecuada de acuerdo con el agente infeccioso en sospecha y el tipo de muestra clínica.

NEGATIVA.

Se utiliza en microscopia de luz. Se puede delinear bacterias no teñidas o materiales biológicos. Desventaja: Tiene un fondo oscuro que no permite la identificación de forma nítida, pueden contraerse en el secado los microorganismos, se pueden presenciar falsos positivos de levaduras (Rhodotorula, Candida) Cryptococcus neoformans, causa de la meningitis. Se puede presentar de forma asexual y sexual. Ventajas: Proporciona información temprana sobre un patógeno y así iniciar lo mas pronto un tratamiento. Observaciones: Se debe utilizar un control negativo con una gota de tinta china para discernir las burbujas. Es útil para la aplicación en el líquido cefalorraquídeo porque muchos pacientes inmunosuprimidos pueden tener el hongo C. neoformans. Características: Halo claro, delimitada por partículas de carbón en suspensión coloidal de la tinta china.

NEGATIVA.

Se utiliza en microscopia de luz. Se puede delinear bacterias no teñidas p materiales biológicos. Desventaja: Tiene un fondo oscuro que no permite la identificacion de forma nitida, pueden contraerse en el secado los microorganismos, se pueden presenciar falsos positivos de levaduras (Rhodotorula, Candida) Cryptococcus neoformans, causa de la meningitis. Se puede presentar de forma asexual (levaduras encapsuladas, se puede ver por tinta china) y sexual. Ventajas: Proporciona información temprana sobre un patogeno y asi iniciar lo mas pronto un tratamiento. Observaciones: Se debe utilizar un control negativo osea una gota de tinta china para discernir las burbujas. Es util para la aplicacion en el liquido cefalorraquídeo porque muchos pacientes inmunosuprimidos pueden tener el hongo C. neoformans. Caracteristicas: Halo claro, delimitada por particulas de carbon en suspensión coloidal de la tinta china.

GRAM.

La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicialde muestras para análisis bacteriológico.

• 1884 - Hans Christian Gram científico.
• Gram + pared celular gruesa de peptidoglicano, no tiene membrana celular externa.
• La tinción de Gram se coloca el colorante primario cristal violeta, despues se coloca lugol (mordiente), satura los espacios de peptidoglicano y para deshidratar la pared bacteriana se utiliza el alcohol-acetona , finalmente se coloca la safranina (colorante secundario - contratincion) este sirve para las bacterias que mo pudieron retener el complejo violeta-yodo.
• Uso son líquidos estériles, biopsias para cultivo, abscesos,hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo.
• Las bacterias Gram positivas se observande color azul obscuro a morado.

GRAM -.

• 1884 - Hans Christian Gram científico.
• Uso son líquidos estériles, biopsias para cultivo, abscesos,hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo.
• Gram negativas se observan de color rosa a rojo.
• Durante la colocación para deshidratar la bacteria (alcohol-acetona) destruye la membrana celular en gram -.
• Gram - tiene capa fino de peptidoglicano en pared celular y membrana celular externa.