EVIDENCIA 1 TERAPIA GÉNICA

Universidad Autónoma de Nuevo LeónFacultad de CIencias BIológicas Licenciatura en biotecnología genómica

Dosier de Vectores Virales y no Virales

UA: Terapia Génica Facilitador: Dra. Brenda González Hernández

Alumnos:

• Castellanos Espinosa Mireya 2034736
• Soto Lara Fernando Guadalupe 1894658

14 de Septiembre de 2023

Definición General de Terapia Génica

Métodos Químicos para Crear Vectores

Métodos Físicos para Crear Vectores

Vectores de Fusión

Biopolímeros

Inmunoliposomas

Dentrímeros

Vectores Mediados por el Receptor

Vectores Virales

Referencias

Terapia Génica

Los productos de terapia génica forman parte de la categoría de medicamentos de terapia avanzada. En la terapia génica, se introduce material genético en las células con el fin de lograr un efecto terapéutico, ya sea mediante la complementación de un gen dañado, la reparación de un gen dañado o la otorgación de una nueva función a la célula.

Para llevar a cabo la transferencia de genes completos, se emplean vectores o vehículos, que comúnmente están compuestos por virus recombinantes que no poseen capacidad patógena.

Métodos Quimicos

Vectores No Virales

Realizado y mecanismo de acción

Transferencia con fosfato de calcio

Este método se basa en la capacidad de los iones de calcio para formar precipitados insolubles con el ADN, lo que permite que el material genético se introduzca en las células

Preparación de la solución de fosfato de calcio: Solución de fosfato de sodio (por ejemplo, fosfato dibásico de sodio, Na2HPO4) con una solución de cloruro de calcio (CaCl2).

Representacion grafica de la transferencia con fosfato de calcio y su proceso de coprecipitación de nanopartículas en presencia de moléculas de ADN.

Métodos Físicos

Vectores No Virales

Microinyección

Es una inyección de DNA direacto al Núcleo de la Celula.Se usa un micromanipulador

Utilización

Propiedades

DNA Desnudo

Ventajas y Desventajas

Funciones

Introducción de DNA en una solución salina/sérica y es insertada por inyección intramuscular pasando por el poro nuclear de la célula

Propiedades

Baja o nula integración con el genomaSolo in vivoBajo porcentaje de transfección

Biobalística

Microproyectiles

El plásmido de DNA está situado en la superficie y se dispara por medio de una descarga eléctria o gas,, utilizando partículas de metales de 1µm-20µm, penetrando hasta 20 capas-.

Propiedades

Usos

1. Produce muerte celular
2. Es de fácil manejo
3. Integración múltiple
4. se usa tanto in vitro como in vivo
5. Eficacia variable y expresión transitoria

Construcción

Electroporación

Definición

Aplicación de una corriente electrica a la célula para abrir poros en la membrana celular que permiten la entrada de un gen

Sonoporación

Ventajas y Desventajas

Construcción

Info

Definición

Uso de ondas ultrasonicas de baja intensidad que generan microporos en la membrana incrementando la permeabilidad.

Magntetotransfección

Elementos

Construcción

Ventajas y Desventajas

• Imán
• Partículas magnéticas
• Buffer
• Transgen
• Células
• Platina

• Agregar partículas catiónicas
• Colocación en un buffer
• Colocación de un pulso magnético en un plato
• Se introduce el gen a la célula con la fuerza magnética

• aplicable a vectores virales y no virales.
• Método sencillo y eficaz.
• Transfección rápida.
• Transfección de ARNmi

Influencia del tamaño en el tiempo de introducción y de direccionamiento

Inyección Hidrodinámica

También llamada transferencia de genes hidrodinámica, solución que contiene genes que se infunden rápidamente en los vasos para facilitar la transferencia de sustancias a las células de la parénquima

Vectores de fusion

Vectores No Virales

Cuando el DNA esta dentro del liposoma se le llama lipoplex

Liposomas

Los liposomas son sistemas portadores compuestas principalmente de lípidos, que se utilizan como sistemas de entrega de material genético a las células. Su funcionamiento se basa en la capacidad de los liposomas para encapsular y transportar ADN o ARN terapéutico a las células para lograr una carga selectiva del agente terapéutico.

Creación de lipoplex

1. Selección de lípidos: Se seleccionan los lípidos apropiados para la formación de los lipoplex (capacidad de formar vesículas lipídicas)2. Preparación de los lípidos: Los lípidos se disuelven en un solvente orgánico adecuado (como cloroformo o éter) para crear una solución lipídica. 3. Extracción del solvente: Se elimina el solvente orgánico de la solución lipídica. 4. Rehidratación de los lípidos: Se añade una solución acuosa para rehidratar los lípidos y provoca la formación espontánea de liposomas. 5. Agregación del material genético: El material genético (ADN o ARN terapéutico) se mezcla con los liposomas recién formados.

Cationicos

Anionicos

Neutros

• Para constructos de lipoplex
• No tienen una carga neta, ya que no poseen grupos cargados positiva o negativamente.

- Ventajas. Versatiles - Desventajas. Menor eficiencia de transfección

• Transportador de drogas sitio-especificas
• Carga neta negativa debido a grupos fosfato

- Ventajas. Menos toxicos y mas estabilidad - Desventajas. Menor eficiencia de transfección

• Complejos DNA-Liposoma
• Carga neta positiva debido a grupos amino o amonio cuaternario

- Ventajas. Alta transfección - Desventajas. Toxicidad y potencial inflamatorio

Variantes

Biopolímeros

Vectores No Virales

Biopolímeros

Son macromoléculas producidas por el organismo vivo con la unión de moléculas más pequeñas llamadas monómeros.

Ejemplos de Biopolimeros

Dentrímeros

Mejoras

Definición

Ventajas y Desventajas

Construcción

Función

Vectores de eNdOCITOSIS

Vectores No Virales

Inmunoliposomas

Esta selectividad se logra mediante la conjugación de anticuerpos o ligandos específicos en la superficie de los liposomas, lo que les permite reconocer y unirse a las células objetivo.

Vehículos de entrega altamente selectivos que se utilizan en terapia génica para dirigir material genético terapéutico a células específicas del sistema inmunológico o tejidos enfermos.

Creación de inmunoliposoma

1. Selección de lípidos y conjugacion de anticuerpos: Se seleccionan los lípidos apropiados y se conjugan los anticuerpos monoclonales o ligandos específicos2. Preparación de los lípidos: Los lípidos se disuelven en un solvente orgánico. 3. Extracción del solvente: Se elimina el solvente orgánico de la solución lipídica. 4. Rehidratación de los lípidos: Se añade una solución acuosa para rehidratar los lípidos y provoca la formación espontánea de liposomas. 5. Formación de inmunoliposomas: Durante la rehidratación, los liposomas incorporan automáticamente los lípidos conjugados con los anticuerpos o ligandos en su membrana lipídica.

Mecanismo de acción

Mediados por receptor

Permiten una entrega altamente selectiva del material genético terapéutico a células específicas al aprovechar la interacción entre un ligando específico y un receptor en la superficie de las células objetivo.

Creación

1. Selección del receptor: Receptor específico de las células que se pretende tratar. 2. Diseño del ligando: Se diseña un ligando específico que se una selectivamente a este receptor. 3. Conjugación del ligando: El ligando o anticuerpo diseñado se une al vector de terapia génica de una manera que permita su exposición en la superficie del vector (conjugación química o genética) 4. Producción del vector mediado por receptor: El vector modificado con el ligando o anticuerpo se produce en el laboratorio utilizando técnicas de biología molecular.

Mecanismo de acción

Vectores virales

Adenovirus

Ventajas y Desventajas

Morfología/Estructura

Ciclo y Genes

Definición

Construcción

Tipos de generación

Características

Adenovirus Asociados

Construcción

Ventajas y Desventajas

• Se necesita de Helper para que pueda formar una partícula viral.
• Se empacan 5 Kb de DNA máximo.
• La selección de AAV será en función del tropismo del serotipo.
• Poseeen 5 tipos de AAV pero el AVV2 es el más viable.

Ciclo Replicativo

Morfología

Genoma

Elementos

Gammaretrovirales

La estructura es simple ya que carece de proteínas reguladoras y accesorias que son características de los lentivirus.Está basaado en virus de Leucemia murina Mo-MLV.

Ventajas y desventajas

Construcción

Variantes

Elementos

IMétodo de entrada

Lentivirales

• infecta celulas en división y no división
• Su complejo le permite entrar a la membrana del núcleo sin dañarla.

Generaciones

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Ventajas y Desventajas

Retrovirales

Tiene elementos nucléicos en cis.Secuencias provirales que pueden acomodar el gen de interes

Info

Referencias

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