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TP1 Le clonage

Davy Rousseau

Created on September 4, 2023

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Transcript

TP1 Les clones

Comprendre la notion de clone à partir de divers exemples tirés du domaine médical et de l'agriculture

START

Clones: entre stabilité et variabilité

1. Les lymphocytes

5. le clonage animal

2. Science fiction

6. les lignées cellulaires

3. Renouvellement tissulaire

4. le clonage végétal

La réaction immunitaire adaptative

Quand un clone de lymphocytes naïfs rencontre un antigène, il est sélectionné. Il se met ensuite à se multiplier par mitoses successives, c'est l'amplication clonale. Elle se fait par mitose. On obtient un clone de lymphocytes tous identiques

voir

Amplification clonale

  • les lymphocytes B ou T obtenus par amplification clonale sont tous identiques

as-tu compris?

Répondre au qcm

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  • Aides :
  • les LB et LT sont issus d'une reproduction conforme
  • Les anticorps membranaires et les récepteurs T sont tous identiques

2. Les clones du côté du cinéma...

extrait du film

"" Sur le clonage, avec ce TP, un expert tu seras..."

Sur les anticorps monoclonaux tu te renseigneras sur la page suivante....

Les anticorps monoclonaux

  • La plupart des antigènes possèdent de nombreux épitopes et donc induisent la prolifération et la différenciation d’un pool de LB, dérivés chacun d’un cellule B qui reconnaît un épitope particulier.
  • Ainsi, l’introduction d’un élément pathogène dans l’organisme induit une réponse anticorps polyclonale.
  • Mais l’hétérogénéité des anticorps qui augmente la protection immunitaire in vivo, réduit l’efficacité de l’antisérum in vitro. Ainsi, pour la plupart des applications en recherche, diagnostic et en thérapeutique, les anticorps monoclonaux, dérivés d’un unique clone et donc spécifiques d’un seul épitope sont préférables.
  • En 1975, Georges Köhler et Cesar Milstein ont conçu une méthode d’obtention d’anticorps monoclonaux.
  • Le principe : fusionner un lymphocyte B activé et une cellule de myélome (= plasmocyte cancéreux) => hybridome, qui possède les propriétés d’immortalité de la cellule myélome et sécrète l’anticorps produit par la cellule B.

Le rôle des anticorps monoclonaux en cancérologie

une voie d'avenir précieuse

servent de marqueur pour cibler les cellules à éliminer

agissent sur les cellules d'une tumeur cancéreuse

Herceptin est un anticorps utilisé pour les cancers du sein

Remicade est utilisé pour la maladie de Crohn et la polyarthrite

en cours de développement dans la lutte des rejets de greffes

Le rôle des anticorps monoclonaux en cancérologie

une voie d'avenir précieuse

servent de marqueur pour cibler les cellules à éliminer

agissent sur les cellules d'une tumeur cancéreuse

Herceptin est un anticorps utilisé pour les cancers du sein

Remicade est utilisé pour la maladie de Crohn et la polyarthrite

en cours de développement dans la lutte des rejets de greffes

3. Le renouvellement des tissus

Les mitoses sont très utilisées pour le renouvellement des épithéliums.

Voir une coupe avec un microscope virtuel

d'après SVT Bordas 2020

4. Le clonage végétal

obtention de cal

Le bouturage d'un plant de pomme de terre

Analyse des plants de pomme de terre

Le bouturage

exemple du bouturage de la vigne

Autres méthodes de clonage

le marcottage

le greffage

5. Le clonage animal

Le 5 Juillet 1996, naissait Dolly, la brebis mondialement connue, que des chercheurs écossais, Keith Campbell et Ian Wilmut, avaient obtenue par clonage. C’était une grande première : un mammifère naissait sans qu’il y ait eu fécondation d’un ovule par un spermatozoïde.

100 veaux clonés naissent chaque année

À Sioux Center, dans l'Iowa, Trans Ova Genetics est la seule grande entreprise américaine à faire commerce du clonage de bovins.

Voir l'article

Les types de clonage

Il existe deux types de clonage aux finalités différentes, qui sont donc sujets à des enjeux différents : reproductif (humain et animal) et thérapeutique.

+ Info

lien vers "C'est pas sorcier

6. les lignées cellulaires

Info

Cellules de la lignée d'une des plus anciennes cultures de cellules humaines, provenant de Henrietta Lacks, morte du cancer du col de l'utérus, et dont une lignée de cellule continue à être cultivée. Ces cellules HeLa ont été colorées de manière à montrer leur noyau cellulaire en fluorescence bleue sous un éclairage particulier.

Le cancer, de la cellule saine à la cellule malade

révisions de première

Les lignées cellulaires cultivées en labo

Les lignées cellulaires cultivées en laboratoire peuvent dériver de lignées cancéreuses, de lignées embryonnaires ou foetales ou de cellules adultes très peu différenciées. Les lignées cellulaires choisies poussent souvent sans adhérer à une surface et elles prolifèrent jusqu’à une très forte densité dans une boîte de culture. Des propriétés similaires peuvent être induites expérimentalement chez des cellules normales par transformation avec un virus ou une substance chimique tumorigène. Les lignées cellulaires transformées par cancérisation qui en résultent sont capables de provoquer des tumeurs quand elles sont injectées à un animal. Les lignées cellulaires sont très utiles dans la recherche cellulaire, car elles peuvent être stockées dans l’azote liquide à -196 °C pendant une période illimitée et sont encore viables après décongélation.

infos

Caractéristiques des lignées cellulaires

capables de se différencier en plusieurs types cellulaires

les principales lignées cellulaires utilisées en labo

capables de se reproduire sans contact entre elles

génétiquement modifiées

Les lignées cellulaires cancéreuses présentent des mutations génétiques (p53, Rb...) les rendant malignes: polifération anarchique et capacité à envahir et coloniser d'autres territoires

3T 3 Fibroblaste (souris) BHK 21 Fribroblatse (hamster syrien) MDCK Cellule épithéliale (chien) Hela Cellule épithéliale (humain) PtK 1 Cellule épithéliale (rat kangourou) L 6 Myoblaste (rat) SP 2 Plasmocyte (souris)

les lignées cellulaires cancéreuses poussent souvent sans adhérer à une surface et elles prolifèrent jusqu’à une très forte densité dans une boîte de culture

les lignées cellulaires cultivées peuvent être induites en différents types cellulaires: cellule musculaire, graisseuse...

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7. Fréquence des mutations dans les clones

Un être humain adulte est constitué entre 1012 et 1014 cellules

La quantification du nombre de cellules d'un humain adulte

Nombre de mutations

Estimez le nombre théorique de mutations qui surviennent dans l’organisme humain au cours de son existence .

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LA MAJORITÉ DES CANCERS DÉRIVE D'UNE SEULE CELLULE ANORMALE

Le cancer a une origine monoclonale. Même lorsque le cancer a métastasé, son origine peut habituellement être rattachée à une tumeur primitive unique, provenant d'un organe identifié et présumée provenir, par division, d'une cellule unique ayant subi une modification transmissible lui permettant de prendre le pas sur ses voisines.

origine des métastases

Perte de l'inhibition de contact

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D'abord connaitre la probabilité de survenue d'une mutation ...

Il faudra ensuite faire le calcul..

La méthode de clonage consiste à prélever le noyau d'une cellule souche d’un organisme et le fusionner avec l’ovocyte énucléé d’un autre organisme, afin de former une nouvelle cellule qu’on laisse se multiplier pour former un embryon. Dans le cadre du clonage reproductif, on implante directement l’embryon dans une mère porteuse. Pour le clonage thérapeutique on laisse se poursuivre le développement de l’embryon afin d’en extraire des cellules souches. Puis on détruit l’embryon afin d’éviter toute tentative de clonage reproductif humain. Enfin on cultive les tissus obtenus.

clonage thérapeutique
Les lignées cellulaires sont pluripotentes

Les cellules cultivées en laboratoire sont très peu différenciées (soit cellules souches embryonnaires soit cellules cancéreuses transformées). Elles sont peu spécialisées. En culture, elles sont dépourvues de matrice extracellulaire et donc des informations "de position" qu'elles reçoivent lorsqu'elles sont in vivo. En ajoutant des facteurs de transcription spécifiques, on peut artificiellement induire une différenciation d'une lignée cellulaire en un type de tissu.

C'est quoi la totipotence ?