Semana 4. MB Clase 15

SEMANA 4

Microbiología

INICIAR

Microbiología

METODOS DE DIAGNÓSTICO

Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

La base de la microbiología se creó en 1676 cuando Anton van Leeuwenhoek observó bacterias en el agua utilizando uno de los primeros microscopios. No fue hasta casi 200 años después cuando Pasteur consiguió cultivar bacterias en laboratorio en un medio de cultivo compuesto de extractos de levaduras, azúcar y sales de amonio. En 1881 Hesse utilizó agar que consiguió en la cocina de su mujer para solidificar este medio, lo que permitió cultivar colonias macroscópicas de bacterias.

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METODOS DE DIAGNÓSTICO

Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

1. MICROSCOPIA 1.1 Métodos microscópicos - Microscopia de campo claro (óptica) - Microscopia de campo oscuro - Microscopia de contraste de fases - Microscopia fluorescente - Microscopia electrónica 1.2 Métodos de estudio - Directo - Tinciones diferenciales - Tinciones acido-restintentes - Tinciones fluorescentes 2. Cultivo In vitro 2.1 Tipos de medios de cultivo 2.2 Cultivo celular

3. Diagnóstico molecular 3.1 Detección de material genético microbiano 3.2 Detección de proteinas 4. Diagnóstico serológico 4.1 Técnicas de precipitación e inmunodifusión 4.2 Inmunoanálisis para antígenos asociadaos a células 4.3 Inmunoanálisis para anticuerpos y antígenos solubles 4.4 Serología

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Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

MICROSCOPIA

La microscopia se utiliza en microbiología para dos fines básicos: la detección inicial de microorganismos y la identificación preliminar o definitiva de los mismos. El estudio microscópico de las muestras clínicas se utiliza para detectar células bacterianas, elementos fúngicos, parásitos (huevos, larvas o formas adultas) e inclusiones víricas presentes en las células infectadas.

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Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

MICROSCOPIA ÓPTICA (DE CAMPO CLARO)

Los componentes básicos de los microscopios ópticos son una fuente de luz que se utiliza para iluminar la muestra colocada en una platina, un condensador para enfocar la luz en la muestra y dos sistemas de lentes (lente del objetivo y lente del ocular) que se utilizan para ampliar la imagen de la muestra. Bacterias en orina - Parásitos en heces - Levaduras en orina y heces

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MICROSCOPIA ÓPTICA (DE CAMPO OSCURO)

Se utilizan las mismas lentes del objetivo y del ocular que en los microscopios de campo claro; sin embargo, se utiliza un condensador especial que impide que la luz transmitida ilumine directamente la muestra. Sólo la luz oblicua y dispersa llega a la muestra yatraviesa los sistemas de las lentes, lo que hace que la muestra esté muy iluminada sobre un fondo negro. La ventaja de este método es que la capacidad de resolución de la microscopia de campo oscuro es significativamente mayor que la de la microscopia de campo claro, lo que posibilita la detección de bacterias muy delgadas como Treponema pallidum (bacteria causante de sífilis) y el género Leptospira (leptospirosis).

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MÉTODOS DE ESTUDIO: DIRECTO

Los métodos de estudio directo son los más sencillos para preparar muestras para el estudio microscópico. La muestra se puede suspender en agua o suero salino. El colorante tiñe de manera inespecífica el material celular, lo que aumenta el contraste con el fondo y permite el estudio de las estructuras detalladas. Una variación es el método de tinta china, en el que la tinta oscurece el fondo y no la célula. Este método se utiliza para detectar cápsulas alrededor de microorganismos, como la levadura Cryptococcus (el colorante queda excluido por la cápsula, lo que crea un halo claro alrededor de la célula) y la bacteria encapsulada Bacillus anthracis.

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Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

MÉTODOS DE ESTUDIO: TINCIONES DIFERENCIALES

Se utilizan diversas tinciones diferenciales para teñir microorganismos específicos o componentes del material celular. La tinción de Gram es la tinción mejor conocida y más utilizada, y forma la base de la clasificación fenotípica de las bacterias. Las levaduras también se pueden teñir con este método (las levaduras son grampositivas). La tinción de Wright-Giemsa se utiliza para identificar parásitos sanguíneos y otros microorganismos seleccionados.

MÉTODOS DE ESTUDIO: TINCIONES ÁCIDORESISTENTES

Se utilizan al menos tres tinciones acidorresistentes diferentes, cada una de las cuales aprovecha el hecho de que algunos microorganismos conservan una tinción principal incluso después de exponerlos a agentes decolorantes potentes, como mezclas de ácidos y alcoholes.Ziehl-Neelsen - Método de Kinyoun - Método de auramina-rodamina

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CULTIVOS IN-VITRO

El éxito de los métodos de cultivo depende de la biología del microorganismo, del lugar de la infección, de la respuesta inmunitaria del paciente frente a la misma y de la calidad del medio de cultivo. La bacteria Legionella es un patógeno respiratorio importante; sin embargo, nunca se consiguió cultivar hasta que se reconoció que su recuperación dependía de disponer de un medio enriquecido con hierro y L-cisteína. Campylobacter, un importante patógeno entérico, no se consiguió recuperar de las muestras de heces hasta que se incubó en medios altamente selectivos a 42 °C en una atmósfera microaerófila. Chlamydia, una importante bacteria responsable de enfermedades de transmisión sexual, es un patógeno intracelular obligado que debe cultivarse en células vivas.

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CULTIVOS IN-VITRO

Staphylococcus aureus, que es la causa del síndrome del shock tóxico estafilocócico, produce la enfermedad mediante la liberación de una toxina hacia el sistema circulatorio. El hemocultivo siempre será negativo, mientras que el cultivo de la lesión en la que crece el germen sí permite detectarlo. En muchas infecciones, la bacteria responsable de la infección se asocia a otros muchos microorganismos que son parte de la flora microbiana normal de la región infectada. Se han desarrollado muchos medios de cultivo que permiten suprimir estos microorganismos existentes en condiciones normales y facilitan la detección de los que tienen importancia clínica. La inmunidad innata y adaptativa del paciente pueden suprimir el patógeno, de forma que con frecuencia se necesitan técnicas de cultivo muy sensibles.

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DIAGNOSTICO MOLECULAR

Al igual que las pruebas que quedan en la escena del crimen, el ácido desoxirribonucleico (ADN), el ácido ribonucleico (ARN) o las proteínas de un agente infeccioso de una muestra clínica se pueden utilizar para ayudar a identificarlo. En muchos casos el agente se puede detectar e identificar de este modo, aunque no se haya podido aislar o detectar por medios inmunológicos. Debido a su sensibilidad, permiten detectar muestras muy diluidas de ADN microbiano en un tejido, aunque el agente no se esté replicando ni produciendo otros indicios de infección. Estas técnicas permiten distinguir cepas basándose en las diferencias de sus genotipos, lo cual resulta especialmente útil para distinguir cepas resistentes a los agentes antivíricos, las cuales pueden diferir en un único nucleótido.

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DIAGNOSTICO SEROLÓGICO

Las técnicas inmunológicas se utilizan para detectar, identificar y cuantificar antígenos en muestras clínicas, así como para evaluar la respuesta humoral frente a la infección y los antecedentes de exposición a agentes infecciosos de un individuo. La especificidad de la interacción antígeno-anticuerpo y la sensibilidad de muchas de las técnicas inmunológicas las convierten en unas poderosas herramientas de laboratorio. La respuesta inmunitaria humoral de un paciente proporciona un historial de sus infecciones. La serología se emplea con el fin de identificar el agente responsable de la infección, evaluar la evolución de una infección o determinar la naturaleza de la infección: infección primaria frente a reinfección, aguda frente a crónica. Los datos serológicos de una infección se obtienen a partir del tipo y el título de los anticuerpos y la identidad de las dianas antigénicas

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DIAGNOSTICO SEROLÓGICO

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TINCIÓN DE GRAM

la tinción gram

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METODOS DE DIAGNÓSTICO

Unidad I. Caracteristicas generales de las bacterias

PREGUNTAS DEL DÍA

1. De los métodos de estudio directo en el microscopio ¿cuál técnica permite identificar la cápsula de un microorganismo? 2. ¿Cuál es el método de diagnóstico a través del cuál se identifica la presencia de bacterias en un Examen General de Orina? 3. ¿A través de qué método microscópico se puede observar a la bacteria causante de sífilis? 4. ¿Cuál es la tinción ácido resistente más antigua? 5. ¿De qué depende el éxito de los cultivos? 6. Describe la diferencia entre los medios de cultivo selectivos y diferenciales. 7. Dibuja la interacción antígeno-anticuerpo que ocurre en una prueba de aglutinación serológica positiva y negativa. 8. De acuerdo con lo que leíste sobre tinción gram: - ¿Cuál es el reactivo de contraste para teñir las células decoloradas? - ¿A qué se debe la coloración de cada tipo de bacteria? - ¿En qué condiciones no debe realizarse la tinción gram? - ¿Quienes no pueden clasificarse con esta tinción?