Tipos de tinciones

Tipos de Tinciones

Tecnica de ziehl-neelsen

Tecnica de schaeffer fulton

Tecnica de albert

Tecnica de tinta china

Tecnica de Gram

Tecnica de Gram

Permite diferenciar bacterias Gram-negativas (color rojo) de Gram-positivas (color morado). 1. Fijar la muestra al portaobjetos (flama del mechero). 2. Añadir Cristal violeta (colorante primario) durante un minuto. 3. Lavar con agua de la llave. 4. Añadir Lugol (mordente) durante un minuto. 5. Lava con agua de la llave. 6. Decolora durante 5-10 segundos con una mezcla de alcohol – acetona. 7. Lavar con agua. 8. Añadir safranina (colorante secundario) por un minuto. 9. Lava con agua y esperar hasta que seque.

Tecnica de Albert

Algunas bacterias tienen la capacidad de acumular gránulos de polifosfato, los cuales son reservas de fosfato inorgánico que se pueden emplear en la síntesis de ATP (trifosfato de adenosina o adenosin trifosfato). Dichos gránulos son conocidos a veces como gránulos de volutina o gránulos metacromáticos (Brooks y col, 1999).

1. Preparar el extendido. 2. Fijar el extendido. 3. Cubrir el portaobjeto con azul de toluidina-verde metilo por diez minutos. 4. Lavar con agua corriente. 5. Escurrir. 6. Aplicar Iodo (solución II) por cinco minutos. 7. Lavar con agua corriente. 8. Secar al aire o usar papel absorbente. 9. Observar usando el objetivo de inmersión.

Tecnica de Schaeffer Fulton

La tinción de esporas es la metodología usada para colorear las estructuras de resistencia que forman algunos géneros bacterianos cuando se encuentran en condiciones desfavorables.

• Hacer un extendido fino con una suspensión del microorganismo esporulado en un portaobjeto y fijar al calor.
• Cubrir el portaobjetos con solución acuosa de verde de malaquita al 5% (se puede colocar un papel de filtro sobre la lámina).
• Calentar sobre la llama del mechero de Bunsen hasta causar desprendimiento de vapores y retirar la llama. Repetir la operación de 6 a 10 minutos. Si durante el procedimiento se evapora demasiado la solución de verde de malaquita, se puede agregar más.
• Retirar el papel de filtro (si fue colocado) y lavar con agua.
• Cubrir el portaobjetos con safranina acuosa al 0,5% durante 30 segundos (algunas variantes de la técnica usan safranina acuosa al 0,1% y la dejan por 3 minutos).

Tecnica de Tinta china

Está técnica no es una coloración verdadera, pues el organismo no se impregna del colorante, sino que se utiliza más bien para causar un contraste. 1. En un portaobjetos limpio coloque una gota de suspención bacteriana. 2. Empleando otro gotero, ponga una gota de tinta china a un lado de la anterior. 3. Tome un cubreobjetos y colóquelo con mucho cuidado para mezclar ambas gotas. 4. Observe al microscopio; las cápsulas bacterianas aparecerán refringentes contra un fondo obscuro.

Tecnica de Ziehl-Neelsen

La técnica de coloración acidorresistente, también denominada de Ziehl-Neelsen es la que se describe a continuación, aunque existen algunas variantes, todas tienen el mismo principio. 1. Fijar la extensión al portaobjetos con calor. 2. Agregar fuscina fenicada (carbolfucsina) y calentar por debajo del portaobjetos con una antorcha, entre 5 y 10 minutos, procurando que emanen vapores pero no burbujas. 3. Enjuagar con agua. 4. Decolorar con alcohol- ácido por un minuto. 5. Enjuagar con agua. 6. Añadir azul de metileno por un minuto. 7. Enjuagar con agua, escurrir y dejar secar.