TFG

Estudi molecular i morfo-anatòmic de la família dorididae (mollusca, NUDIBRANCHIA) al mediterrani i al nord-est atlàntic

Grau en Ciències del Mar

Autora: Mar Ferrer Renau

Tutor: Dr. Juan Moles

Gracias

1. INTRODUCCIÓ

Mollusca: Gastropoda: Heterobranchia (marins=opistobranquis): Nudibranchia

Opistobranquis --> Diversitat = 8900 espècies (WoRMS, 2022). Nudibranquis com a bioindicadors --> adaptats, diversos, dieta molt específica.

Espícules de CaCO3

Espongívors

Subordre Doridina

Gracias

Doridina: dorididae: doris

Especiació pseudo-críptica

Especiació críptica morfològicament =, genèticament diferents.

Doris ocelligera (Bergh, 1881)

Morfotip blau

Morfotip groc

Biodiversitat amagada

Ressurrecció d'espècies

Variabilitat cromàtica

Espècie tipus: Doris verrucosa Linnaeus, 1758

Brànquies

Rinòfors

Gracias

2. OBJECTIUS

Revisar l'estat i la diversitat del gènere Doris seqüenciant l'espècie tipus, Doris verrucosa i diferents morfotips de Doris ocelligera.

Hipòtesi: especiació críptica en Doris ocelligera en el seu rang de distribució.

Avaluar la variabilitat cromàtica amb dades genètiques --> arbre filogenètic.

Elaborar un estudi comparatiu morfo-anatòmic.

Situar Doris en un context sistemàtic ampli --> seqüències d'espècies de la família Dorididae.

Establir diferències en l'ecologia analitzant el contingut estomacal --> espícules d'esponja.

Gracias

3. MATERIAL I METODOLOGIA

Recol·lectaSCUBA diving

MOSTREIG

Fotografia

Deposició en museus:

Seqüències de Dorididae a GenBank

Seqüències d'estudis paral·lels

(Fernández-Vilert. R., 2021)

Àrea d'estudi: Mediterrani + Nord-Est Atlàntic

Punts de mostreig:

Morfotip groc

Morfotip blau

Gracias

EXTRACCIÓ, AMPLIFICACIÓ I SEQÜENCIACIÓ DE L'ADN

Extracció: DNeasy Blood and Tissue Kit

Amplificació: PCR de 3 marcadors. 2 mitocondrials: COI i 16S, i 1 de nuclear: H3

Seqüenciació: Macrogen, Inc

(Qiagen, USA)

ANÀLISIS FILOGENÈTICS

BLAST

Edició i assemblatge en Geneious Pro v. 8.1.8

MAFFT: G-INS-i (COI, H3) i L-INS-i (16S)

(Altschul 1997)

Gracias

ANÀLISIS MORFOLÒGICS I ANATÒMICS

Anàlisi de les dents radulars amb Microscopia Electrònica de Rastreig JSM-7100F (SEM)

Dissecció de morfotips:

-Morfologia externa -Sistemes nerviós, digestiu i reproductor -Dissecció del bulb bucal -Extracció de la ràdula

ANÀLISIS FILOGENÈTICS

Tests de delimitació d'espècies:

Arbre filogenètic

CIPRES Science Gateway v. 3.3

Grup germà: Aphelodoris Bergh, 1879

(Fernández-Vilert. R., 2021)

Bayesian Inference (BI)

(Ronquist et al. 2012)

(Tavaré 1986)

Maximum likelihood (ML)

(Kalyaanamoorthy et al. 2017)

IQ-TREE v. 2.1.2. ModelFinder

MrBayes 3.2.7a GTR+G+I

ASAP

(Puillandre et al., 2021)

(Zhang et al., 2013)

bPTP

(Kapli et al., 2017)

mPTP

GMYC

(Fujisawa & Barraclough, 2013)

Gracias

Suport màxim (BI i ML)

Arbre filogenètic

D. bertheloti/marmorata

D. verrucosa/ocelligera/berghi

Separació per gèneres, monofilètics

Excepció: Doris parafilètic

D. adrianae sp. nov.

(Urgorri et al. 2021)

4. RESULTATS

Arbres individuals per cada marcador (COI, 16S i H3)

Dataset concatenat amb:

46 terminals (espècimens)

1449 caràcters (parells de bases)

Aphelodoris Bergh, 1879

Austrodoris Odhner, 1926

Doris Linnaeus, 1758

Doris Linnaeus, 1758

Archidoris Bergh, 1878

Conualevia Collier & Farmer, 1964

Doriopsis Pease, 1860

Homoiodoris Bergh, 1882

Doris Linnaeus, 1758

DOS MORFOTIPS O DUES ESPÈCIES?

COI

16S

Doris ocelligera sensu stricto

Doris berghi comb. rest.

Localitat tipus: Trieste, Itàlia

Sense contingut estomacal

Doris lutea Risso, 1826

Staurodoris ocelligera Bergh, 1881

(combinació original)

(sinònim dubtós)

Curtes

Llargues

Localitat tipus: No especificada

Aldisa berghi Vayssière, 1901

(primera descripció)

Sense contingut estomacal

5. DISCUSSIÓ

Austrodoris i Archidoris més separats de l'espècie tipus que altres gèneres acceptats.

Doris marmorata/bertheloti i Doris adrianae lluny de l'espècie tipus. Cal assegurar la identitat del gènere.

Divergència genètica entre D. ocelligera sensu stricto i D. berghi comb. rest. (ASAP).Pertanyen inequívocament al gènere Doris.

D. ocelligera sensu stricto

D. verrucosa

32 x 33.1.0.1.33

D. berghi comb. rest.

24 x 40.1.0.1.40

DIFERÈNCIES RADULARS

(S. ocelligera Bergh, 1881)

DIFERÈNCIES EN EL SISTEMA REPRODUCTor

D. ocelligera sensu stricto

D. berghi comb. rest.

Doris Linnaeus, 1758

Doris lutea Risso, 1826 (sinònim)

Staurodoris ocelligera Bergh, 1881 (nom original)

Aldisa berghi Vayssière, 1901 (sinònim)

Doris ocelligera sensu stricto

Doris berghi comb. rest.

Esponja del gènere Terpios

Especiació simpàtrica

6. CONCLUSIONS

No hi ha especiació críptica, sinó biodiversitat amagada. Espècie ressucitada: Doris berghi comb. rest.

Divergència genètica evidenciada amb màxim suport (ML i BI) i amb ASAP.

Diferències morfològiques: forma del cos, coloració, tubercles i rinòfors. Diferències anatòmiques: glàndules salivals, fórmula radular, dents de la ràdula i estructures del sistema reproducor.

Gènere Doris parafilètic. D. marmorata, D. bertheloti i D. adrianae són veritables Doris?Resurrecció dels gèneres Austrodoris i Archidoris per l'Hemisferi Sud i Nord.

D. ocelligera podria alimentar-se d'esponges del gènere Terpios.

Gracias

línies futures...

Dissecció de més espècimens de D. ocelligera i D. berghi comb. rest.

Assegurar la posició, la forma i la mida les estructures del sistema reproductor.

-Contrastar la informació disponible sobre els seus patrons de distribució biogeogràfica.

-Establir diferències en l'ecologia tròfica de les dues espècies.

Trobar contingut estomacal i realitzar un anàlisi taxonòmic de les espícules d'esponja.

Gràcies!