metodos directos

Métodos directos e indirectos para la cuantificación de crecimiento microbiano

materia: microbiología

AUTOR: elizabeth libreros simón fecha:17/06/2023

¿Porque cuantificar?

Para expresar numericamente una magnitud.

Medición de diametro polar de fresa.

RAE, 2015

Medición de peso (masa) de durazno.

¿Porque cuantificar?

Indicadores de calidad

Uso de microorganismos como...

Procesos biotecnológicos

Métodos directos.

Determinación del número de microorganismos en una muestra de manera directa (microscopia).

Observasión de células por método Tinción de Gram.

Microscopia

Area de campo Ac (µm2)

Área de observación

Observación 40 x 10 campos(Promedio X)

+ ifo

Prescott C.S y Breed S.R, 1910

Cámara de Neubauer/ Cámara de Petroff- Hausser

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Camara de Neubauer

Cámara de Neubauer DOBLE RETICULO (Vidrio Grillado para Recuento de Células)

Arana et al., 2016

Método de cuantificación por cámara de Neubauer (Hematocitómetro)

Conteo de células contaminadas por cámara de Neubauer

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Arana et al., 2016

Métodos Indirectos

Turbidimetría Es la medición de la luz transmitida a través de una suspención.

Longitudes de onda para microorganismosBacterias 540 nm Protozoarios 580 nm Levaduras 600nm

Métodos Indirectos

Luz dispersada

Medición turbidimétrica

Nefelometría Es la medición de la luz dispersada en direción distinta a la emitida.

Luz incidente

Medición nefelométrica

Muestra

Lámpara

Luz dispersada

VENTAJAS Y DESVENTAJAS.

VENTAJAS

Realizar seguimiento rápido de cineticas

Método rápido de evaluación

DESVENTAJAS

Presentan dificultades al ser evaluados (No homogeneo)

Metabolitos secundarios aportan turbidez, influyen.

No diferencia entre organismos vivos y muertos

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Ejemplo

Procedimiento

Reducción

Tubos de ensayo con leche y azul de metileno

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Composición química de azul de metileno

Cuantificación

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Conslusión

Los métodos de conteo de microorganismos nos ayudan a presisar el crecimiento de células patogenas aunque dependiendo el objetivo de cada investigación sera el indicado para usarse.

Preparación de Agar para siembra de células (bácterias/hongos)

Conslusión

Métodos directos nos ayudan a identificar al patogeno en forma y tipo. Métodos indirectos nos ayudan al conteo rápido de microorganismos y calcular el tiempo por generación.

Procedimiento para la observación de bacterias Lactobacillus, tinción AM.

Literatura citada

Bölter M., Bloem J., Meiners K., Möller R. 2002. Enumeration and biovolume determination of microbial cells – a methodological review and recommendations for applications in ecological research. Biology and Fertility Soils. 36 (4): 249-25. Fuentes-Ramírez L. E., Caballero-Mellado J., Sepúlveda J., MartínezRomero E. 1999. Colonization of sugarcane by Acetobacter diazotrophicus is inhibited by high N-fertilization. FEMS Microbiology Ecology. 29 (2): 117-128..

Literatura citada

Morales-García Y. E., Duque E., Rodríguez-Andrade O., de la TorreJ., Martínez-Contreras R. D., Pérez-y-Terrón R., Muñoz-Rojas J. 2010a. Bacterias preservadas, una fuente importante de recursos biotecnológicos. BioTecnología. 14 (2): 11-29. Morales-García Y. E., Pazos-Rojas L. A., Bustillos-Cristales M. R., Krell T., Muñoz-Rojas J. 2010b. Método rápido para la obtención de maíz axénico a partir de semillas. Elementos. 80 (17): 35-38. Trujeque-Montiel C. V. 2009. Diversidad de bacterias fijadoras de nitrógeno, simbiontes de ambientes forestales de leguminosas, de la sierra norte del estado de Puebla. Puebla, México: Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. p. 49.