elettroforesi delle proteine

Esperienza sull' elettroforesi delle proteine

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Richiami teorici

Esperienza sull' elettroforesi delle proteine

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Materiali

Teoria dell'esperimento

Procedimento

Richiami teorici

01

La corrente è condotta dagli ioni del tampone per mantenere le molecole in stato ionizzato, così che non vadano a legarsi ai composti da separare. La sua concentrazione va da 0.05 a 0.10 M, il suo pH determina, influenza e stabilizza la migrazione. Le molecole si separano sulla base del rapporto carica/massa.La velocità di migrazione dipende da:

• - Campo elettrico applicato
• - Caratteristiche della particella
• - Tipo di supporto utilizzato per la separazione

L'elettroforesi è una delle tecniche di separazione più usate in biochimica.Questa sfrutta la diversa velocità di migrazione di particelle cariche, quando sono influenzate da un campo elettrico. La tecnica viene usata a scopi analitici per determinare:

Richiami teorici

01

• Numero di proteine in una molecola
• Punto isoelettrico
• Grado di purezza
• Peso molecolare

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MATERIALI

I materiali che abbiamo utilizzato per questo esperimento sono i seguenti:

• Micropipette
• Latte inacidito da una settimana
• Centrifughe
• Bacchetta

• Celle elettroforetiche
• Alimentatori 50v
• Coloranti
• Gel d'agarosio 1%
• Buffer TBE

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Procedimento

02

1. Centrifugare per un minuto il latte inacidito
2. Preparare 4 provette e inserire in esse 0,5 ml do surnatante prelevato dopo la centrifugazione
3. Aggiungere in ogni provetta 3 gocce di colorante e mescolare con la bacchetta
4. Prelevare i campioni con la micropipetta e versarli nei rispettivi pozzetti in profondità
5. Porre i 2 elettrodi ai lati della cella elettroforetica
6. Versare lungo la parete della cella elettroforetica cerca 10-15 ml di tampone TBE, fino alla completa copertura del gel
7. Attaccare i cavetti agli alimentatori, facendo attenzione che l'elettrodo positivo sia il più lontano dai pozzetti

I diversi tipi di colorante hanno diversa densità (bromofenolo, ecc.), per cui le sieroproteine migreranno a velocità diverse verso il polo positivo sia per la loro massa, sia per quella dei coloranti.

Procedimento

02

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Teoria dell'esperimento

03

Centrifuga: separa la parte solida (caseine) dalla parte liquida (siero) Nella centrifuga il numero delle provette è pari, e queste vengono disposte bilanciando l'equilibro della centrifuga stessa (dal lato opposto). I pozzetti sono i "buchi" vengono inseriti i campioni, in essi c'è l'agarosio. Nei pozzetti il polo positivo è quello rosso, il polo negativo, invece, è nero.

Elettroforesi delle proteine del siero del latte:Nel latte, le caseine (proteine principali del latte) precipitano in caso di acidità. Quindi verrà usato latte scaduto da 15 giorni. Nel latte i lattobacilli trasformano il lattosio in acido lattico, che fa diventare il latte acido (abbassando il pH), e quindi si formeranno i grumi.

Teoria dell'esperimento

03

Info

Proteine del latte:

• - Lattoglobuline
• - Sieroglobuline
• - Immunoglobuline

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Pensato e creato da:Francisco Felici e Gabriele Ecca

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