Poster PCR

PCR

7

Se da a una temperatura de 70-74 °C durante 5-15 minutos tras el último ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado.

4

Se desnaturaliza el ADN; es decir, se separan las dos cadenas mediante distintos modos. Calentando entre (94-95 °C) la muestra (forma más habitual). La temperatura depende de la proporción de guanina y citosina que contenga la cadena o el largo de la misma. O añadiendo sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.

5

Después, el cebador se une a su secuencia complementaria en el ADN molde. Necesitamos bajar la temperatura a 40-68 °C durante 20-40 segundos para permitir el alineamiento. Los puentes de hidrógeno estables entre las cadenas de ADN sólo se forman cuando la secuencia del cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa une el híbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los cebadores actúan como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada.

6

Aquí, la polimerasa toma el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partir del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN.La polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde añadiendo los dNTP complementarios en dirección 5'→ 3', uniendo el grupo 5'-fosfato de los dNTP con el grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de ADN creciente (la cual se extiende). Aunque la temperatura varía según el caso, la temperatura de máxima actividad está en 75-80 °C. El tiempo de extensión depende tanto de el ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento de ADN que se va a amplificar. "en su temperatura óptima, la polimerasa de ADN puede llegar a polimerizar mil bases en un minuto"

2

INNOVACIONES DE ROCHE En 1991, esta empresa biotecnológica, adquirió los derechos de la PCR de Cetus, actualizando y desarrollando su uso para detectar enfermedades. Ha invertido grandes cantidades en la PCR, recibiendo un premio nobel de medicina en 1984. El mismo año en el que Roche adquirió los derechos de la PCR, creo una cadena de ADN a partir del ARN. Esto facilitó las pruebas diagnósticas de virus ARN, lo cual fue útil para identificar, estudiar y comprender mejor los virus o infecciones como el VIH, que tienen ARN en lugar de ADN en sus genomas. En 2003, Roche presentó el analizador COBAS® TaqMan® que respaldaba tres pruebas de IVD COBAS® TaqMan®; el virus de la inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1), el virus de la hepatitis B (VHB) y el virus de la hepatitis C (VHC) en Europa. Estas fueron las primeras pruebas de PCR que permitieron que la amplificación y la detección se produjesen al mismo tiempo. El proceso se denominó PCR en tiempo real.

3

En esta primera etapa, se lleva la reacción hasta una temperatura de 94-96°C, manteniéndola durante1-9 minutos. Esto sólo es necesario para ADN polimerasas que requieran activación por calor.

DESNATURALIZACIÓN

¿QUIÉN LO INVENTÓ?

EXTENSIÓN

INICIO

ALINEAMIENTO

INNOVACIONES DE ROCHE

ELONGACIÓN FINAL

8

Este paso se lleva a cabo a 4-15 °C durante un tiempo indefinido para conservar la reacción a corto plazo.

CONSERVACIÓN

Este paso que se lleva a cabo a 4-15 °C durante un tiempo indefinido para conservar la reacción a corto plazo.

1

PCR EN LA INDUSTRIAL La PCR, o reacción en cadena de la polimerasa, se ha convertido en la referencia para diagnosticar enfermedades. Este método de estudio del ADN individual, se ha usado en numerosos ámbitos de la biología ( determinar el pedigrí de un perro o caballo, verificar la paternidad de un niño, identificar a una victima, asesino o exculpar a alguien acusado de forma errónea en un crimen, detectar bacterias y microorganismos, reconocer especies protegidas y en peligro, analizar donantes de órganos o de sangre posibles ante una emergencia o necesidad, o autentificar ciertos consumibles) Curiosidad: El análisis del ADN mediante la PCR, sirvió de inspiración para muchas películas y programas de televisión populares como "Parque Jurásico". En está se hace reaparecer ciertas especies de dinosaurios gracias a la copia de su ADN. La PCR ha sido reconocida como uno de los descubrimientos científicos más importantes del siglo XX.

PCR EN LA INDUSTRIA

KARY MULLIS (1944 - 2019) Kary Mullis fue un bioquímico, que descubrió en 1983 una forma de localizar un tramo de ADN y sintetizar una cantidad enorme de copias. En sus comienzos, la PCR fue utilizada como método eficaz para copiar y sintetizar grandes cantidades de ADN aislado, con una finalidad concreta. Pasados los años, varios científicos de Cetus, han investigado el proceso, y en 1986, consiguieron aislar la polimerasa Taq con ayuda de una bacteria hallada normalmente en las primaveras cálidas ( Thermus aquatics). Esta era capaz de soportar altas temperaturas, lo que llevó a la desaparición de la necesidad de intervención humana durante la reacción. La PCR necesitaba una enzima como la polimerasa Taq capaz de resistir el calor, para que el proceso no fuera tan complicad.

De Natalia Pires Lozano y Cristina Romero López 4ºB

RECURSOS UTILIZADOS Artedinamico. (n.d.). Etapas de un Proceso PCR. Equipos y laboratorio de Colombia. https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/etapas-de-unproceso-pcr Avances en la PCR: Innovaciones. Diagnostics. (n.d.). https://diagnostics.roche.com/es/es/article-listing/advances-in-pcr-roche-innovations.html PCR en la industria. Diagnostics. (n.d.-b). https://diagnostics.roche.com/es/es/article-listing/pcr-across-industries.html La Historia de la PCR. Diagnostics. (n.d.-b). https://diagnostics.roche.com/es/es/article-listing/history-of-pcr.html

LA PCR Y EL CORONAVIRUS ( COVID-19) https://youtu.be/b8b9OPujsyI