Lysozyme

BIO404: Projet expérimental en biologie

PYOT Samuel, Bio7, Binôme 433

Purification et caractérisation des propriétés antibiotiques du lysozyme d’œuf

Le Lysozyme

Quelques propriétés et caractéristiques:

-Protéine de 14,3 kDa -pHi = 10.7 -Possède une activité antibiotique contre les bactéries à Gram positif

Purification

Figure 1 : Profil d’élution obtenue suite à la purification du lysozyme d’œuf par chromatographie échangeuse de cations sur résine de Carboxyméthylcellulose. Les 2 premiers points correspondent respectivement au premier et dernier lavage, tous les autres points correspondent aux différents éluats (du premier au dernier). Le volume total de chaque échantillon est de 1mL.

Electrophorèse SDS-PAGE

Figure 4 : Courbe de calibration du gel SDS PAGE permettant de déterminer la masse précise de la protéine d’intérêt. Les distances de migration ont été mesuré avec ImageJ.

Figure 3 : Gel SDS PAGE permettant le suivi de la procédure de purification du lysozyme d’œuf. Les protéines ont migré dans un gel de polyacrylamide à 15%. 10ug de protéines ont été déposé pour les échantillons EB à L19 et 5 ug pour les échantillons E1 à LC. (MT = marqueur de masse moléculaire / EB = extrait brut / NR = non-retenu / L1 et L19 = 1er et dernier lavage / E1 à E4 = éluat 1 à 4 / LC = lysozyme commercial)

Test d'activité antibiotique sur gélose

Figure 5 : Tests d’activité (antibiogrammes) réalisés sur gélose ensemencée de bactérie gram positif (à gauche) et gram négatif (à droite). Une quantification de l’aire de chaque halo a été réalisé avec ImageJ pour les 2 tests et est présenté sous forme d’histogramme. Sur chaque pastille positionnée sur la gélose, 5uL de l’échantillon testé ont été déposé (EB = extrait brut / NR = non retenu / L1 et L19 = 1er et dernier lavage / E1 = éluat 1 / E2 = éluat 2 / T = tampon élution / B= bactéricide / LC = lysozyme commercial).

Détermination de l'activité du lysozyme sur une suspension de bactérie Gram positif

Figure 6 : Détermination de l’activité catalytique sur suspension de bactérie gram positif de l’échantillon E1 et de l’échantillon EB en utilisant le lysozyme commercial comme témoin positif et le tampon phosphate comme témoin négatif. 100uL d’échantillon enzymatique a été ajouté à 1,4 mL de suspension de bactérie gram positif

Conclusion

-Purification réussie ?

-Facteur de purification: 11,4x

Sous-titre

-Rendement de 0,85%, un rendement seulement partiel