Diagrama de obtención de Fenilalanina-amoniaco liasa

[7]

purificación de fenilalanina-amoniaco liasa

Es una enzima intracelular ubicada en el citoplasma de la célula. Tomando en cuenta lo anterior, se ilustra el procedimiento para su obtención.

Cultivo

Centrifugación

Rompimiento celular

Choque térmico

Centrifugación

Se cultiva Rhodosporidium toruloides

Homogeneizador industrial para lisis celular

10,000 rpm, 30 min

Calentar 50 °C 5 min y sumergir en baño de hielo

4,000 rpm 5 min a 5 °C (4 veces)

Downstream

Upstream

[7]

purificación de fenilalanina-amoniaco liasa

Es una enzima intracelular ubicada en el citoplasma de la célula. Tomando en cuenta lo anterior, se ilustra el procedimiento para su obtención.

Centrifugación

Cromatografía

Elución

Diálisis

Precipitación

10000 rpm, 30 min

Incrementando KCl 0.2 M

Añadir de sulfato de amonio (70% de saturación)

12 horas, 4 °C

Intercambio iónico

Downstream

[7]

purificación de fenilalanina-amoniaco liasa

Es una enzima intracelular ubicada en el citoplasma de la célula. Tomando en cuenta lo anterior, se ilustra el procedimiento para su obtención.

Elución

Precipitación

Elución

Cristalización

Diálisis

Añadir sulfato de amonio sólido lentamente

50 mM de buffer KPB (pH=7,5, 10 mM L-Phe)

con buffer KPB (50 mM, pH=7,5, 10 mM LPhe)

Durante 12 hrs

Añadir de sulfato de amonio (80% de saturación)

Polishing

[7]

evaluación del procedimiento biotecnológico

ventajas

DesVentajas

• Alta especificidad en el metabolismo por parte de la enzima producida.
• Bajo consumo energético.
• No generan residuos tóxicos.
• Las enzimas producidas son funcionales a condiciones ambiente.

• Altos costos de recuperación y purificación.
• Se han reportado situaciones en las que el consumo de enzimas exógenas causa reacciones alérgicas.
• Las enzimas se desnaturalizan a temperaturas o niveles extremos de pH