Preparati a fresco

Preparati a Fresco

Chritian Cardillo 4A

Prima Esperienza

Osservare lieviti e batteri a fresco.

RICHIAMI TEORICI

Affinché sia possibile svolgere questo esperimento è necessario conoscere la tecnica “a goccia schiacciata”. Tale tecnica risulta indispensabile per l'osservazione microscopica dei microrganismi e per l'allestimento di preparati su vetrino, su cui il materiale viene disteso in strato sottile e osservato tal quale o dopo colorazione. Nel primo caso si possono osservare i microrganismi in condizioni "standard" mentre nel secondo caso i microrganismi vanno incontro a pesanti alterazioni dovute alla fissazione, al calore e alla successiva colorazione. I preparati microscopici sono dei vetrini che permettono l’osservazione microscopica dei batteri su cellule vive attraverso l’esame a fresco o, su cellule morte mediante l’allestimento di preparati colorati le differenze tra i due tipi di preparati sono che:

• I preparati a fresco permettono di osservare le cellule secondo la loro forma e dimensioni senza che esse siano state osservate da interventi tecnici.
• I preparati colorati hanno la caratteristica di facilitare l’osservazione delle cellule aumentando il contrasto tra cellula e ambiente, permettendo così all’operatore di poter utilizzare un semplice microscopio in campo chiaro.

MATERIALI E STRUMENTI UTILIZZATI

• Vetrini Portaoggetto
• Vetrini Coprioggetto
• Sospensione microbica in provetta
• Microscopio
• Becco Bunsen

• Pipetta Pasteur

PROCEDIMENTO

Fase 1

Preparare tre provette versandovi 2ml di acqua. Stemperare le sospensioni microbiche e quindi aggiungerle al contenuto delle provette: versare nella 1° del lievito, nella 2° dell’Actimel e nella 3° il Kefir.

PROCEDIMENTO

Fase 2

Prelevare un po’ di materiale da ogni provetta e, attraverso la pipetta Pasteur versarne delle gocce sui vetrini portaoggetto.

PROCEDIMENTO

Fase 3

Ricoprire il vetrino Portaoggetto con il coprioggetto e schiacciare. Infine asciugare ai margini l’eccesso di liquido e proseguire all’analisi microscopica.

OSSERVAZIONI

Se si osservano dei lieviti, le cellule risultano immobili e chiaramente visibili anche a 400 ingrandimenti. I batteri, a questo ingrandimento, sono difficili da individuare, se si tratta di batteri mobili se ne può apprezzare, con difficoltà, il movimento. Con i preparati a fresco l'osservazione con obiettivo a immersione risulta poco praticabile, per la difficoltà di messa a fuoco dovuta allo strato di liquido fra i due vetrini e la scarsa intellegibilità del preparato.

SECONDA Esperienza

Differenziare i batteri che sono Gram-Positivi da quelli Gram-Negativi.

RICHIAMI TEORICI

Per poter comprendere meglio lo scopo dell’esperimento è necessario sapere cosa sono i batteri Gram-Positivi e Gram-Negativi La colorazione di Gram è un metodo utilizzato per classificare i batteri in funzione delle caratteristiche della loro parete cellulare, ma questo non significa che ci sia necessariamente una relazione filogenetica fra le specie batteriche che rientrano in uno stesso gruppo, Gram-positivo o negativo che sia. In base al colore ottenuto a seguito della colorazione è possibile capire che tipo di batterio si ha avanti:

• Colorazione viola indica che il batterio esaminato è un Gram-Positivo.
• Colorazione rosa indica che il batterio esaminato è un Gram-Negativo.

MATERIALI E STRUMENTI UTILIZZATI

• Sospensione microbica in provetta
• Liquido di Lugol

• Fucsina basica
• Acqua Distillata
• Vetrini Portaoggetto
• Ansa in Nichel
• Becco Bunsen
• Soluzione idroalcolica di violetto di genziana

PROCEDIMENTO

Fase 1

Prelevare il materiale dalla provetta e distribuirlo su un vetrino portaoggetti.

PROCEDIMENTO

Fase 2

Effettuare il processo di asciugatura: accendere il becco Bunsen e riscaldare il vetrino fin quando non si sarà asciugato.

PROCEDIMENTO

Fase 3

Preparare la 1° soluzione di Violetto di Genziana 1:10. Preparare la 2° soluzione di Fucsina Basica 1:10. (1ml di Fucsina Basica ogni 10ml di dH20).

PROCEDIMENTO

Fase 4

Colorare un vetrino Portaoggetto con il Violetto di Genziana. Dopo 2 minuti eliminare l’eccesso e lavare con acqua distillata. Versare poi il liquido di Lugol. Dopo 2 minuti eliminare l’eccesso e lavare con acqua distillata. Decolorare il vetrino lasciando agire l’alcol per 30secondi. Versare la Fucsina Basica e dopo 30 secondi eliminare l’eccesso, lavare con acqua distillata e infine procedere con il microscopio.

OSSERVAZIONI

In questo esperimento è stato possibile osservare come i batteri abbiano cambiato colore. Nell’immagine è possibile osservare sia batteri Gram-Positivi che Gram-Negativi.

CONCLUSIONI

Mediante l’uso del microscopio ottico è stato possibile osservare i vetrini creati con il metodo della “goccia schiacciata”. Il metodo a goccia schiacciata è un metodo utilizzato per creare vetrini per microscopia. In questo caso, il campione viene posizionato sulla superficie del vetrino e schiacciato con un secondo vetrino, in modo da diffondere uniformemente il campione sulla superficie del vetrino e creare uno spesso strato di campione. Il metodo a goccia schiacciata è utilizzato soprattutto per campioni solidi o semisolidi, come tessuti o colture cellulari, ma può essere utilizzato anche per campioni liquidi. Questo metodo permette di ottenere uno strato uniforme di campione sulla superficie del vetrino, facilitando l'osservazione e l'analisi al microscopio. Inoltre, il metodo a goccia schiacciata consente di visualizzare la struttura tridimensionale del campione, poiché gli strati inferiori del campione sono visibili attraverso lo strato superiore.

CONCLUSIONI

I batteri Gram-positivi e Gram-negativi sono due gruppi di batteri che vengono differenziati in base alla loro risposta alla colorazione di Gram, una tecnica di colorazione utilizzata in microbiologia per identificare e distinguere i batteri. La colorazione di Gram coinvolge l'uso di cristalli di violetto, iodio, alcol etilico e fucsina. Durante la colorazione, i batteri vengono trattati con cristalli di violetto e iodio, che fanno penetrare il colorante all'interno delle cellule. Successivamente, viene utilizzato l'alcol etilico per decolorare le cellule e la fucsina per colorare nuovamente le cellule. Al termine della colorazione, i batteri appaiono o viola o rosa al microscopio a seconda del tipo di batterio.

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