Práctica 6 - Determinación de colesterol y lipoproteínas

práctica 6: Determinación de colesterol y lipoproteínas

Elaborado por: Márquez SalinaS aLEJANDRO

Colesterol y triglicéridos

PUNTOS CLAVE

Lípidos en sangre relevantes en el diagnóstico de diversas enfermedades (dislipidemia, síndrome metabólico)

Transportados en gran medida por lipoproteínas

Lipoproteínas son partículas globulares de alto peso molecular:- Núcleo: colesterol + TAG - Monocapa fosfolípidos + colesterol + apolipoproteínas.

Alteraciones en lipoproteínas

Defectos secundarios

Defectos primarios

Obesidad

Diabetes mellitus

Hipotiroidismo

Alcoholismo

Fármacos (ej. anticonceptivos orales)

Riesgo de necrosis y accidentes cardio y cerebrovasculares

Muñoz-Calvo MT, et al. Dislipemias. Pediatr Integral 2015; XIX (5): 355-364

Alteraciones en lipoproteínas

Defectos secundarios

Defectos primarios

Obesidad

Diabetes mellitus

Hipotiroidismo

Alcoholismo

Fármacos (ej. anticonceptivos orales)

Riesgo de necrosis y accidentes cardio y cerebrovasculares

¿CÓMO MEDIMOS LOS NIVELES DE LÍPIDOS?

Muñoz-Calvo MT, et al. Dislipemias. Pediatr Integral 2015; XIX (5): 355-364

Fundamentos metodológicos

Absorbancia: Cantidad absorbida por una solución, medida en unidades Klett

Transmitancia: Cantidad de luz que atraviesa la solución

Espectrofotómetro

Determinación de triglicéridos

Hidrólisis en TAG por una lipasa

Fosforilación del glicerol por la glicerol cinasa

Glicerol

Glicerol-3 fosfato

TAG

Ácidos grasos libres

Glicerol

Determinación de triglicéridos

Oxidación del glicerol-3P por la glicerolfosfato oxidasa

Acción de la peroxidasa

H2O2

H2O

4AAP

Dihidroxiacetona fosfato + H2O2

Glicerol-3P + O2

Cromógeno oxidado*

* 520nm

DHBS

* 4AAP: 4-aminoantipirina; DHBS: 3,5-Dicloro-2-hidroxibencensulfonato

Determinación de colesterol total

Reacciones para su determinación

El colesterol es transportado en plasma por 3 lipoproteínas: HDL, LDL, VLDL

Colesterol total:C-HDL + C-LDL + C-VLDL

El colesterol puede encontrarse de forma libre o esterificado (60-75%)

Para poder cuantificarlo, primero se debe hidrolizar el éster de colesterol y dejarlo en su forma libre

Determinación de colesterol

HDL

Para cuantificar HDL se debe separar del resto de lipoproteínas:

Precipitar lipoproteínas que contienen apo-B100 (VLDL, IDL, LDL, Lpa).

Precipitante: polianión (heparina, dextrano o fosfotungstato) junto con Mg2+ o Mn2+

Usar el método tradicional para cuantificar el sobrenadante (solo colesterol HDL).

Lipoproteínas séricas

HDL

Polianión

Complejos

Otras lipoproteínas

Determinación selectiva de HDL

HDL

Determinación de

C-VLDL

Las lipoproteínas VLDL son ricas en TAG, por lo que sus concentraciones guardan una relación estrecha.

(mg/dL)

(mmol/L)

Esta relación solamente es válida cuando se cumplen las siguientes condiciones:

Ayuno (para evitar la presencia de quilomicrones).

TAG <400 mg/dL (arriba de este valor se altera la relación).

Solución propuesta por Martin et al.

TAG

______________

VLDL =

Factor ajustable

Martin SS, et al. JAMA. 2013 Nov 20;310(19):2061-8. doi: 10.1001/jama.2013.280532.

Determinación de colesterol

LDL

Aproximadamente 2/3 de todo el colesterol plasmático es transportado por las LDL.

La forma más sencilla de calcularlo es restar las demás lipoproteínas del colesterol total:

Si se sustituye el colesterol VLDL obtenemos:

Fórmula de Friedewald

Fórmula de Martin

TAG

TAG

_____

________________

LDL = CT - ( HDL +

LDL = CT - ( HDL +

Factor ajustable

Otros métodos para calcular colesterol LDL:

Polivinilsulfato (PVS) para precipitar LDL y cuantificar el resto de lipoproteínas (método indirecto).

Separación de LDL mediante esferas de látex revestidas de anticuerpos.

Riesgo cardiovascular

FACTORES DE RIESGO

Hipertensión: presión sistólica ≥ 140 o diastólica ≥ 90 o uso de fármacos antihipertensivos.

Edad: >45 años en hombres, >55 años en mujeres.

Antecedentes heredofamiliares de infarto al miocardio, muerte coronaria o revascularización coronaria.

Colesterol HDL bajo: <40 mg/dL en hombres, <50 mg/dL en mujeres.

Tabaquismo actual (en el último mes).

Obesidad: IMC >25 kg/m2 o perímetro abdominal >90cm en hombres y >80 cm en mujeres.

Diabetes mellitus tipo 2.

Diagnóstico y tratamiento de dislipidemias (hipercolesterolemia) en el adulto. México; SSA; 03/11/2016

Riesgo cardiovascular

VALORACIÓN DEL RIESGO CV

Se utiliza la herramienta "GLOBORISK" que inlcuye las siguientes variables:

DIABETES MELLITUS.

SEXO.

PRESIÓN ARTERIAL SISTÓLICA.

COLESTEROL TOTAL.

EDAD.

Categoriza a los pacientes en riesgo a 10 años de evento coronario o vascular cerebral:

Muy alto

Alto

Moderado

Bajo

1-5%

5-10%

<1%

>10%

Diagnóstico y tratamiento de dislipidemias (hipercolesterolemia) en el adulto. México; SSA; 03/11/2016

Dislipidemias

Conjunto de enfermedades en las que hay concentraciones anormales de lípidos (CT, TAG, c-HDL, c-LDL) en sangre y que representan factores de riesgo para el desarrollo de enfermedad cardiovascular.

¿QUÉ SON?

PRIMARIAS: Por defectos genéticos que alteran la síntesis y eliminación de lipoproteínas. SECUNDARIAS: Como consecuencia de otras condiciones, como diabetes mellitus, hipotiroidismo, síndrome nefrótico, fármacos, etc.

CLASIFICACIÓN

Diagnóstico y tratamiento de dislipidemias (hipercolesterolemia) en el afulto. México; SSA; 03/11/2016

Dislipidemias

DIAGNÓSTICO

Colesterol HDL:- Hombres <40 mg/dL. - Mujeres <50 mg/dL.

Colesterol total ≥ 200 mg/dL.

Triglicéridos ≥ 150 mg/dL.

OBJETIVOS de colesterol LDL y colesterol no-HDL según el riesgo cardiovascular

Diagnóstico y tratamiento de dislipidemias (hipercolesterolemia) en el adulto. México; SSA; 03/11/2016

Dislipidemias primarias

HIPERLIPIDEMIAS

Henry, Todd-Sandford & Davidson. El laboratorio en el diagnóstico clínico. (20ª Ed.). Marban; 2010.Kronenberg H, Melened S, et. al. Williams. Tratado de Endocrinología. 13ª ed. 2 vols. México: Elsevier; 2016

Dislipidemias primarias

HIPERLIPIDEMIAS

Henry, Todd-Sandford & Davidson. El laboratorio en el diagnóstico clínico. (20ª Ed.). Marban; 2010.Kronenberg H, Melened S, et. al. Williams. Tratado de Endocrinología. 13ª ed. 2 vols. México: Elsevier; 2016

Dislipidemias

MANIFESTACIONES

Dislipidemias

MANIFESTACIONES

Dislipidemias

TRATAMIENTO

Dislipidemias

Ejemplos

Lipoproteínas plasmáticas: c-VLDL = TAG/5 c-LDL = CT - (c-HDL + TAG/5) Índices aterogénicos: CT/c-HDL c-LDL/c-HDL

Ejemplos

Lipoproteínas plasmáticas: c-VLDL = TAG/5 c-LDL = CT - (c-HDL + TAG/5) Índices aterogénicos: CT/c-HDL c-LDL/c-HDL

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

>40 H, >50 M (mg/dL)

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

>40 H, >50 M (mg/dL)

<30 mg/dL

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

>40 H, >50 M (mg/dL)

<30 mg/dL

<130 mg/dL

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

>40 H, >50 M (mg/dL)

<30 mg/dL

<130 mg/dL

<5

Ejemplos

VALORES NORMALES:

< 150 mg/dL

< 200 mg/dL

>40 H, >50 M (mg/dL)

<30 mg/dL

<130 mg/dL

<5

<3

Vasc Health Risk Manag . 2009;5:757-65. Epub 2009 Sep 18

Práctica

ACTIVIDAD 1:

Práctica

ACTIVIDAD 2:

Renata López Barrios de 48 años de edad, profesora de matemáticas en la preparatoria, se presenta en el consultorio del médico general para registro y control de hipertensión, diagnosticada hace dos años, ha sido tratada con ramipril de 5 mg al día. Hace dos meses hubo un recorte en la oficina gubernamental en la que trabajaba y a partir de esa fecha ha notado que en ocasiones tiene zumbido de oídos y dolor de cabeza, que en ocasiones disminuye con analgésicos como paracetamol. Como antecedentes de importancia: hace dos años inicio con síntomas climatéricos, no recibe hormonales; madre viva con hipertensión arterial, dos tíos maternos muertos por hemorragia cerebral; fumó durante 15 años 3 a 5 cigarrillos diarios y que dejo hace un año, dieta alta en carbohidratos (harinas), poca verdura y no come carne. Sedentaria. Signos vitales: pulso 80 latidos por min, FR 12 rpm, TA. 130/90 mm Hg, Temperatura 36.5oC, peso 60 K, talla 152 cm. Le presenta al médico estudios de laboratorio, que le fueron tomados hace un mes: Hb 11.3 g/dL, leucocitos y plaquetas dentro de lo normal, glicemia 90 mg/dL, colesterol total 277 mg/dL, colesterol en HDL 79.2 mg/dL, en LDL 170 mg/dL, VLDL 27.6 mg/dL TG 138 mg/dL. Índice colest-LDL/colest-HDL 2.1

Formulario lipoproteínas

Referencias

Leberman M. Peet A. Marks: Bioquímica Médica Básica. 5a Ed. Wolters Kluwer; 2018. McKee T, McKee BJ. Bioquímica. 5a Ed. España: McGraw Hill Interamericana editores; 2014. Nelson D, Cox M. Lehninger: Principios de Bioquímica. 6a Ed. España: Omega; 2013. Martin SS, et al. Comparison of a Novel Method vs the Friedewald Equation for Estimating Low-Density Lipoprotein Cholesterol Levels From the Standard Lipid Profile. JAMA [Internet]. American Medical Association (AMA); 2013 Nov 20;310(19):2061. Available from: http://dx.doi.org/10.1001/jama.2013.280532 Munoz. Lipoprotein ratios: Physiological significance and clinical usefulness in cardiovascular prevention. Vascular Health and Risk Management [Internet]. Informa UK Limited; 2009 Sep;757. Available from: http://dx.doi.org/10.2147/vhrm.s6269 Diagnóstico y tratamiento de dislipidemias (hipercolesterolemia) en el adulto. México; SSA; 03/11/2016. Henry, Todd-Sandford & Davidson. El laboratorio en el diagnóstico clínico. (20ª Ed.). Marban; 2010. Kronenberg H, Melened S, et. al. Williams. Tratado de Endocrinología. 13ª ed. 2 vols. México: Elsevier; 2016