Presentación sobre termocicladores

TERMOCICLADORES

BIOLOGÍA MOLECULAR / ANATOMÍA PATOLÓGICA Y CITODIAGNÓSTICO

Autor: Raquel Pérez Santos

10/01/2023

Profesor: Jesús Antonio Ferrera

Introducción

Partes y limpieza

Índice

Funcionamiento

Precio

Fin

¿Qué es un termociclador?

• El proceso de la PCR es automático y puede finalizarse en tan sólo unas pocas horas. Este proceso es dirigido por completo por el termociclador, quien está programado para cambiar la temperatura de reacción cada pocos minutos haciendo posible la desnaturalización y síntesis de ADN.
• El termociclador es diferente si se realiza una PCR de punto final o una PCR de tiempo real, ya que este último debe detectar fluorescencia y en diferentes canales de absorción.
• El modelo de termociclador más común consiste en un bloque de resistencia eléctrica que distribuye a través de una placa una temperatura homogénea (entre 4ºC y 96ºC) durante un tiempo programable. En algunos equipos la resistencia eléctrica se ha sustituído por la tecnología Peltier (semiconductores), que permite mayor homogeneidad en la temperatura.

Definición

Un termociclador, también conocido como máquina de PCR es un instrumento usado en biología molecular que permite realizar de forma automatizada y secuencial los ciclos de temperaturas necesarios para llevar a cabo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de amplificación de ADN.

Introducción

¿Cómo se limpia?

Partes de un termociclador

Para mantener el termociclador en condiciones óptimas de trabajo, después de desconectarlo de la corriente eléctrica y verificar que no está caliente debes realizar las siguientes operaciones de limpieza:

• Limpiar la carcasa o parte externa con un paño suave, ligeramente humedecido en una solución jabonosa de pH neutro (no usar ceras o abrasivos).
• Limpiar los pocillos de la placa con bastoncillos de algodón humedecidos en isopropanol o en metanol. El área térmica de la tapa debe limpiarse también con un paño o papel suave humedecido en isopropanol. Si los pocillos del bloque térmico están muy sucios hay que utilizar bastoncillos humedecidos en una solución de hipoclorito sódico al 1%, y a continuación completar la limpieza con etanol 95%. Los pocillos no deben quedarse húmedos nunca.
• Limpiar el sistema de ventilación. Es muy importante que no esté obstruido por partículas adheridas, para lo cual no debe haber tener otro equipo que genere calor o que requiera aire en un radio de 30 cm.

PARTES Y limpieza

¿Cómo funciona?

Un termociclador funciona a través de tres importantes pasos durante la técnica de PCR.

• El primer paso es la desnaturalización, la cual ocurre en el primer ciclo. De allí parte a los siguientes ciclos para separar hebras formadas. Mientras esto ocurre la temperatura oscila entre los 94 y 98 º C. este proceso dura al menos unos 10 segundos.

• El segundo paso consiste en la alineación de los primers en la hebra del molde que se quiere amplificar. El paso tiene una duración de unos 20 segundos y su temperatura puede llegar a ser variable. Esto ocurre porque la misma depende más que todo de los primers usados en esta operación. Los primers son pequeñas secuencias de 20 nucleótidos en los cuales se usan pruebas con azúcares simples. En muchas ocasiones la glucosa hace parte de ello, la temperatura usada para este tipo de pruebas oscila entre los 55 y 65 º C, aunque algunas pueden llegar hasta los 72 º C. esta es la temperatura apta para trabajar con Taq polimerasa.
• El tercer paso es la elongación de la doble hebra de 20 pares la cual ha sido creada en el paso anterior. El tiempo de elongación no debería ser más de un minuto por kilobase. Esto quiere decir que son unas mil bases del gen que se quiere amplificar. Es recomendado para las secuencias cortas unos 4 Kb máximo.
• Después de este paso es muy probable que se vuelva al primero de 98 º C durante unos 10 segundos y luego repetir el ciclo entre unas 30 y 45 veces más. Luego de estos 3 pasos se añade un paso más de calor, al menos unos 72 grados durante al menos 7 minutos. Esto es necesario para poder desanidar las hebras del ADN de primers y la polimerasa. Luego de ello se pasa a un paso frío que va entre una temperatura de 15 y 4 º C para así mantener la muestra en perfecto estado hasta el momento en el que se solicite.

FUNCIONAMIENTO

¿Qué precio tiene?

Precios

Hay distintos precios según el moedelo, por ejemplo:THCY-1KS-001 modelo DLAB TC1000-S 3.435,00 € THCY-1KG-001 modelo DLAB TC1000-G, con gradiente 3.688,00 € APPLIED BIOSYSTEMS VERITI 96, rango: 950 - 10180 $ QIAGEN ROTOR-GENE Q, QIAGILITY, precio medio: 18371 $

Tipos de termocicladores

En el mercado existen diferentes tipos de termocicladores para esta finalidad, cuyas diferencias principales son la fuente de enegía que utilizan para la excitación. En general son tres las fuentes: las lámparas de luz, diodos de emisión de luz (LED, por sus siglas en inglés) y láseres.

TIPOS Y PRECIO

Muchasgracias

1º Anatomía Patológica y Citodiagnóstico