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WORKSHOP INMUNOPRECIPITACION
gbruges
Created on November 9, 2022
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Transcript
Co-Inmunoprecipitación Interacción Proteína-Proteínas
Dr. Gustavo Bruges
Departamento de Ciencias Básicas UNAB Facultad de Ciencias de la Salud UNAB
DNA
La proteína es el protagonista ` final de la vida celular
DNA
DNA
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Objetivos de la proteómica
Entender procesos celulares
Descubrir Dianas de Medicamentos
DESCUBRIR LAS FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS
Identificar nuevos biomarcadores
Entender los estados de una enfermedad
Tipos de proteómica
- Proteómica de la expresión
- Estudio cuantitativo de la expresión de proteínas y sus cambios entre muestras que difieren por alguna variable
- Proteómica funcional
- Estudiar la interacción proteína-proteína, las estructuras tridimensionales, la localización celular y fisiológica de todo el conjunto del proteoma.
Coinmunoprecipitación
Tipos de Anticuerpos
- Mezcla de poblaciones de anticuerpos
- Puede unirse a diferentes área de la proteína diana
- Tolerante a pequeños cambios en la estructura de la proteína
- Se une a un sitio específico
- Reconoce una forma particular de la proteína
Estructura de un General de un Anticuerpo
Falso positivo y control
Co-Inmunoprecipitación
Co-Inmunoprecipitación
Identificación de anticuerpos
La proteína contra la que se diseñó el anticuerpo debe precipitarse del lisado celular. (1) Los anticuerpos independientes creados contra la misma proteína reconocen el mismo polipéptido; (2) La proteína diana no debe ser identificada con anticuerpos procedentes de líneas celulares sin proteína diana;
¿Y una tercera proteína asociada?
Coinmunoprecipitación en Tiempo Real
Co-Inmunoprecipitación
Reducción del fondo proteico inespecífico
1. para aumentar la fuerza iónica en el tampón de lavado 2. reducir la cantidad de Ab. primario 3. para preclarificar el lisado celular con Ab de control.
50 mM NaCl
150 mM NaCl
Co-Inmunoprecipitación
Science 269:1444-6, 1995