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WORKSHOP INMUNOPRECIPITACION
gbruges
Created on November 9, 2022
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Transcript
Dr. Gustavo Bruges
Co-Inmunoprecipitación Interacción Proteína-Proteínas
Departamento de Ciencias Básicas UNAB Facultad de Ciencias de la Salud UNAB
DNA
La proteína es el protagonista ` final de la vida celular
DNA
DNA
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Las proteínas funcionan en asociación con otras proteínas o biomoléculas, pero no de forma aislada
Identificar nuevos biomarcadores
Descubrir Dianas de Medicamentos
Entender los estados de una enfermedad
Entender procesos celulares
DESCUBRIR LAS FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS
Objetivos de la proteómica
- Proteómica de la expresión
- Estudio cuantitativo de la expresión de proteínas y sus cambios entre muestras que difieren por alguna variable
- Proteómica funcional
- Estudiar la interacción proteína-proteína, las estructuras tridimensionales, la localización celular y fisiológica de todo el conjunto del proteoma.
Tipos de proteómica
Coinmunoprecipitación
- Se une a un sitio específico
- Reconoce una forma particular de la proteína
- Mezcla de poblaciones de anticuerpos
- Puede unirse a diferentes área de la proteína diana
- Tolerante a pequeños cambios en la estructura de la proteína
Tipos de Anticuerpos
Estructura de un General de un Anticuerpo
Co-Inmunoprecipitación
Falso positivo y control
La proteína contra la que se diseñó el anticuerpo debe precipitarse del lisado celular. (1) Los anticuerpos independientes creados contra la misma proteína reconocen el mismo polipéptido; (2) La proteína diana no debe ser identificada con anticuerpos procedentes de líneas celulares sin proteína diana;
Identificación de anticuerpos
Co-Inmunoprecipitación
¿Y una tercera proteína asociada?
Coinmunoprecipitación en Tiempo Real
150 mM NaCl
50 mM NaCl
1. para aumentar la fuerza iónica en el tampón de lavado 2. reducir la cantidad de Ab. primario 3. para preclarificar el lisado celular con Ab de control.
Co-Inmunoprecipitación
Reducción del fondo proteico inespecífico
Science 269:1444-6, 1995
Co-Inmunoprecipitación