PROCEDIMIENTOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS

PROCEDIMIENTOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS

Objetivo

Conocer y utilizar esquemas de identificación morfológica, bioquímica y de microbiología molecular para bacterias y hongos, mediante la aplicación de tinciones, cultivos, pruebas bioquímicas y técnicas moleculares, para determinar géneros y especies.

Criterios para la identificación

Bacterias

Hongos

TamañoMorfología macroscópica y microscópica Presencia de estructuras de reproducción sexual y asexual

Morfología microscópicaAgrupación Afinidad tintorial

Métodos empleados para la identificación:Pruebas bioquímicas Pruebas biológicas Pruebas inmunológicas Pruebas moleculares

Pruebas primarias

Catalasa Cocos G+

Oxidasa Bacilos G-

Tinción Schaeffer Bacilos G+y Fulton

CATALASA

Cocos G+

Balanceo de ecuación

oxidasa

Bacilos G -

Determinar la presencia de la enzima critocromo oxidasa (proteína transmembranal). Solución acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina.

Tinción de schaffer y fulton

Bacilos G+

Determinar la presencia de la esporas.

Pruebas complementarias

Coagulasa Hemolisinas solubles Utilización de CHO’s Citrato Urea SIM TSI Reducción de nitratos Manitol Anaerobio Agar P Acriflavina Hialuronidasa Leche tornasolada Oxidación/Fermentación

Cocos G+

Tinción de Gram y KOH 3%

Otras especies

Staphylococcus Micrococcus

Coagulasa

S. aureus S. intermedius Manitol anaerobio + - Crecimiento en agar P + - Acetoína + - Polimixina B R S

Catalasa

Streptococcus

Utilización de CHO´S NaCl 6.5%, CAMP

Streptococcus

Bacilos G-

Tinción de Gram y KOH 3%

Brucella Mannheimia haemolytica Pasteurella multocida

Oxidasa

Enterobacterias

E. coli TSI: 1 SIM: -/+/+ Urea: - Citrato: -

Salmonella TSI: 2 SIM: +/-/+ Urea: - Citrato: +

Tinción de schaeffer y fulton

BACILOS G+

Determinar la presencia de la esporas.

Pruebas bioquímicas

Evalúan las reacciones metabólicas de los microorganismos a determinados sustratos.

Pruebas bioquímicas

Evalúan las reacciones metabólicas de los microorganismos a determinados sustratos.

Sustrato

Pruebas bioquímicas

Evalúan las reacciones metabólicas de los microorganismos a determinados sustratos.

Sustrato

Pruebas bioquímicas

Evalúan las reacciones metabólicas de los microorganismos a determinados sustratos.

Sustrato

Producto

Pruebas bioquímicas

Evalúan las reacciones metabólicas de los microorganismos a determinados sustratos.

Sustrato

Indicadores

Producto

Pruebas bioquímicas

Alternativas

Sistemas bioquímicos miniaturizados

Sistema API

bbl Crystal

Hongos

Filamentosos

Levaduriformes

Agar dextrosa Sabouraud

Agar dextrosa Sabouraud

Tinción de Gram

Descripción macroscópica: Color y apariencia

Descripción microscópica y macroscópica

Descripción microscópica: Estructura de esporas(sexual) Estructura de conidias (asexual)

Forma de la blastoconidia

Azul algodón lactofenol

Técnica de microcultivo de Ridell

Cryptococcus neoformans

Candida (tubo germinal)

Malassezia pachydermatis

Candida albicans

Formación de tubo germinal en plasma

¿Dudas?

Prueba primaria

Prueba secundaria

Resistencia a polimixina B

Agar P

Manitol anaerobio

¿Qué observas? ¿Muestra?

Descripción

Prueba primaria

Pruebas bioquímicas de identificación