Pruebas bioquímicas

Pruebas bioquímicaS

Rocio Herrera Julián Argueta Fernando Ruiz

Empezar

Introducción

La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada. Consiste en la determinación de las características fenotípicas o genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación. La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. se pueden utilizar diferentes sistemas de trabajo (medio de cultivo, indicador, revelador, etc.) que puede ser diferente aún para el mismo ensayo si se trata de diferentes microorganismos.

Objetivos

1. Conocer y comprender la utilidad que poseen las pruebas bioquímicas con métodos de identificación bacteriana. 2. Adquirir habilidad en la caracterización de microorganismos por medio de pruebas secundarias de identificación. 3. Comprender la utilidad que tiene en el área de diagnóstico, la caracterización bacteriana y de algunas levaduras

Fundamentación teórica

• Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
• Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias.
• Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc.

Fundamentación teórica

• Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebas bioquímicas.
• Un gran número de ensayos han sido desarrollados de manera de identificar rápidamente al patógeno, para que posteriormente el médico, con base al reporte, indique el tratamiento adecuado, o para que los epidemiólogos puedan localizar la fuente de la infección.

Fermentación en el Agar con triple azúcar y hierro (TSI)

Identifica a los de patógenos entéricos Gram Negativos, señala la capacidad del organismo para fermentar la lactosa, sacarosa y dextrosa con formación de ácido y gas, también tiene capacidad para producir sulfuro de hidrógeno.

Es un medio inclinado y sirve para la valoración de tres pruebas bioquímicas:

Superficie inclinada

+ info

Profundidad

+ info

+ info

ProSulfuro de hidrógeno (H2S)

Agar Hierro y Lisina (LIA)

• Cuando microorganismos provocan una descarboxilación de los aminoácidos por inducción de enzimas específicas (enzima lisina descarboxilasa) se produce una amina, llamada cadaverina, y dióxido de carbono.

• En este medio de cultivo se detecta la producción de la lisina descarboxilasa por una reacción coloreada gracias a un cambio en el pH del medio, que contiene como indicador púrpura de bromocresol.
• Si el fondo cambia su color por amarillo está indicando una reacción ácida. Si se produce lisina descarboxilasa se dará el cambio de pH a uno alcalino y, el medio, regresará a tener un color morado

• En resumen, si tiene fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un color morado que si es producida.

Medio MIO

identificar bacterias de acuerdo a tres pruebas:

Descarboxilación de la Ornitina

Indol

Motilidad

+ info

+ info

+ info

Prueba de la Ureasa

la hidrólisis de la urea es catalizada en algunos microorganismos por una enzima específica, la ureasa, dando lugar a dos moléculas de amonio, agua y dióxido de carbono

Prueba del citrato de Simmons

ciertas bacterias tienen la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono en una serie de reacciones como sigue: 1. Citrato oxaloacetato + Acetato 2. Oxaloacetato piruvato + CO 3. 2 Piruvato acetato + Lactato + CO

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

• 1. Rotule cada uno de los tubos (5) con los medios de cultivo (TSI, LIA, MIO, Citrato y Urea)
• 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada
• 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta;
• 4. Proceda a inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas
• 5. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo
• 6. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo, retire el asa sin
• 7. Salir del tubo y luego haga un estriado rápido y parejo en la superficie inclinada

+ info

Procedimiento

• 8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo.
• 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y muy vertical
• 10. Sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea.
• 11. NO OLVIDE QUE CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO.
• 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C por un período de tiempo de 24 a 48 horas
• 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.

+ info

¡Gracias!