Pruebas Bioquímicas

Pruebas bioquímicas

Actividad de desempeño #5

Integrantes del grupo Adriana Verenice Melendez Figueroa (040-21-1899)Stephanie Johana Quiñonez Recinos (040-21-169) Daniela María José Ramírez Avalos (0402-20-1366) Grupo: #8 Sección: B

Agar hierro y lisina

Medio MIO

Es un medio de diferenciación para organismos entéricos Gram Negativos, es basada en su capacidad para fermentar lactosa, sacarosa, dextrosa y producir sulfuro de hidrógeno, además, hay formación de ácido y gas. Se utiliza como medio inclinado y sirve para la valoración de tres parámetros o pruebas bioquímicas.

• Superficie inclinada: se aprecia la fermentación de la lactosa o sacarosa. Por la formación de ácidos el medio se torna amarillo (A), el rojo fenol se encarga de indicar la acidez.

• Profundidad: en la profundidad del medio entubado, los bacilos que fermentan glucosa forman bastante ácido para que el medio se torne amarillo, no sucede en la superficie inclinada.

• Sulfuro de hidrógeno (H2S): Las sales de hierro que contiene el medio sirven para detectar la producción de sulfuro de hidrógeno. Los bacilos que producen el gas provocan que el medio forme un color ennegrecido.

Prueba del citrato de Simmons

Prueba Ureasa

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo, y luego estriar la superficie. 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y vertical. 10. Por último, siempre sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea. 11. CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO. 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C de 24 a 48 horas. 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.

1. Rotule cada uno de los tubos, con los medios de cultivo, con su nombre, nombre del microorganismo y la fecha de inoculación. 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada. 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta. 4. Una vez finalizado dicho paso, tome con cuidado la colonia elegida. 5. Inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas. 6. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo. 7. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo (sin tocar el fondo del tubo), retire el asa sin salir del tubo y haga un estriado rápido y parejo en la superficie.

Fundamentación Teórica

Las pruebas bioquímicas están hechas para identificar distintos microorganismos, por medio de distintos test químicos aplicados a medios biológicos. Ampliamente se utilizan para diferenciar bacterias, con el fin de demostrar que el microorganismo es capaz de: • Fermentar azúcares • La presencia de enzimas • La degradación de compuestos • La producción de compuestos coloreados. Algunos ensayos son hechos con el fin de identificar rápidamente el patógeno, para indicar los tratamientos adecuados o localizar la fuente de infección. Bacterias relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a estos test, como por ejemplo: Enterobacteririaceae, su hábitat natural es en el tracto gastrointestinal. Formando patógenos que causan síndromes diarreicos.

Fermentación en el Agar con triple azúcar y hierro (TSI)

Es un medio de diferenciación para organismos entéricos Gram Negativos, es basada en su capacidad para fermentar lactosa, sacarosa, dextrosa y producir sulfuro de hidrógeno, además, hay formación de ácido y gas. Se utiliza como medio inclinado y sirve para la valoración de tres parámetros o pruebas bioquímicas.

• Superficie inclinada: se aprecia la fermentación de la lactosa o sacarosa. Por la formación de ácidos el medio se torna amarillo (A), el rojo fenol se encarga de indicar la acidez.

• Profundidad: en la profundidad del medio entubado, los bacilos que fermentan glucosa forman bastante ácido para que el medio se torne amarillo, no sucede en la superficie inclinada.

• Sulfuro de hidrógeno (H2S): Las sales de hierro que contiene el medio sirven para detectar la producción de sulfuro de hidrógeno. Los bacilos que producen el gas provocan que el medio forme un color ennegrecido.

Agar hierro y lisina

Medio MIO

Prueba del citrato de Simmons

Prueba Ureasa

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo, y luego estriar la superficie. 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y vertical. 10. Por último, siempre sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea. 11. CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO. 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C de 24 a 48 horas. 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.

1. Rotule cada uno de los tubos, con los medios de cultivo, con su nombre, nombre del microorganismo y la fecha de inoculación. 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada. 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta. 4. Una vez finalizado dicho paso, tome con cuidado la colonia elegida. 5. Inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas. 6. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo. 7. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo (sin tocar el fondo del tubo), retire el asa sin salir del tubo y haga un estriado rápido y parejo en la superficie.

Fermentación en el Agar con triple azúcar y hierro (TSI)

Es un medio de diferenciación para organismos entéricos Gram Negativos, es basada en su capacidad para fermentar lactosa, sacarosa, dextrosa y producir sulfuro de hidrógeno, además, hay formación de ácido y gas. Se utiliza como medio inclinado y sirve para la valoración de tres parámetros o pruebas bioquímicas.

• Superficie inclinada: se aprecia la fermentación de la lactosa o sacarosa. Por la formación de ácidos el medio se torna amarillo (A), el rojo fenol se encarga de indicar la acidez.

• Profundidad: en la profundidad del medio entubado, los bacilos que fermentan glucosa forman bastante ácido para que el medio se torne amarillo, no sucede en la superficie inclinada.

• Sulfuro de hidrógeno (H2S): Las sales de hierro que contiene el medio sirven para detectar la producción de sulfuro de hidrógeno. Los bacilos que producen el gas provocan que el medio forme un color ennegrecido.

Agar hierro y lisina

Medio MIO

Prueba del citrato de Simmons

Prueba Ureasa

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo, y luego estriar la superficie. 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y vertical. 10. Por último, siempre sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea. 11. CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO. 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C de 24 a 48 horas. 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.

1. Rotule cada uno de los tubos, con los medios de cultivo, con su nombre, nombre del microorganismo y la fecha de inoculación. 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada. 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta. 4. Una vez finalizado dicho paso, tome con cuidado la colonia elegida. 5. Inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas. 6. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo. 7. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo (sin tocar el fondo del tubo), retire el asa sin salir del tubo y haga un estriado rápido y parejo en la superficie.

Agar hierro y lisina

Medio MIO

Prueba del citrato de Simmons

Prueba Ureasa

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo, y luego estriar la superficie. 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y vertical. 10. Por último, siempre sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea. 11. CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO. 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C de 24 a 48 horas. 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.

1. Rotule cada uno de los tubos, con los medios de cultivo, con su nombre, nombre del microorganismo y la fecha de inoculación. 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada. 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta. 4. Una vez finalizado dicho paso, tome con cuidado la colonia elegida. 5. Inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas. 6. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo. 7. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo (sin tocar el fondo del tubo), retire el asa sin salir del tubo y haga un estriado rápido y parejo en la superficie.

Procedimiento

Trabaje frente al mechero

1. Rotule cada uno de los tubos, con los medios de cultivo, con su nombre, nombre del microorganismo y la fecha de inoculación. 2. Coloque la caja con el crecimiento bacteriano, y seleccione por el anverso SIN destapar la caja, una colonia bien asilada. 3. Trabajando por detrás de la llama del mechero, esterilice su asa en punta. 4. Una vez finalizado dicho paso, tome con cuidado la colonia elegida. 5. Inocular la batería de tubos, para las pruebas bioquímicas. 6. Destape el tubo de TSI y flamee la boca del tubo. 7. Pinche el medio en el centro y hasta el fondo (sin tocar el fondo del tubo), retire el asa sin salir del tubo y haga un estriado rápido y parejo en la superficie.

8. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio LIA, pinchando tres veces en diferentes áreas del tubo con cuidado de no tocar el fondo y las paredes del mismo, y luego estriar la superficie. 9. Sin flamear y con la misma asa, inocule el medio MIO con una única pinchadura en el centro del medio y vertical. 10. Por último, siempre sin flamear y con la misma asa, estríe la superficie del agar Citrato y del Agar Urea. 11. CADA VEZ QUE ABRE UN TUBO DEBE FLAMEAR LA BOCA DEL MISMO. 12. Afloje un poco las tapas de rosca de los tubos inoculados y llévelos a la incubadora a 37°C de 24 a 48 horas. 13. Realice las lecturas y compare los resultados con las tablas correspondientes.