Croissance d'E. coli en Erlenmeyer

Croissance d'E. coli en milieu non renouvelé en Erlenmeyer

Protocole 2 : Suivi de croissance d'E. coli en milieu non glucosé (fiole d'Erlenmeyer)

C'est parti !

Sommaire

De la préparation du milieu à l'analyse des résultats

I.

Préparation de la solution de gluose

II.

Croissance en Erlenmeyer en milieu non renouvelé

III.

Dosage du glucose

SECTION I.

Préparation de la solution de glucose

Les étapes à suivre

Préparation de la solution de glucose

• Peser 2,5 g de poudre glucose anhydre dans un bécher
• Dissoudre la poudre de glucose avec de l'eau distillé

• Transvaser la solution de glucose dans une fiole jaugée de 50 mL
• Ajuster au trait de jauge
• Stériliser la solution de glucose préparée par filtration à l'aide d'une seringue et d'un filtre

Organigramme de la manipulation

Cette préparation ne présente aucun danger. La stérilisation de la solution de glucose se déroule sous PSM.

Analyse des points critiques

Ajuster au trait de jauge

Stériliser la solution

Nettoyer le bécher

SECTION II.

Croissance d'E. coli en Erlenmyer

Les étapes à suivre

Lancement de la croissance

• Ajouter 4 mL de la solution de glucose diluée et filtrée au 100mL de milieu LB stérile.
• Inoculer le milieu de culture avec 5 mL de pré-culture d'E. coli
• Prélever 2 mL de culture (t = 0)
• Incuber à 37°C sous légère agitation
• Réaliser des prélévements toutes les 30 min (2 mL)

Les étapes à suivre

Analyses des échantillons

• Mesurer l'atténuance des échantillons
• Centrifuger les échantillons
• Réaliser le dosage du glucose sur le surnageant

Organigramme de la manipulation

Analyse a priori des risques

Analyse des points critiques

Le poste de travail

Les manipulations sont réalisées en zone d'aspesie. Les pipettes stériles doivent rester dans cette zone.

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Analyses des résultats du groupe

Pourquoi passer en logarithme ?

Courbe primaire de croissance

Les résultats de la classe sont compilés

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Courbe secondaire de croissance

Les résultats de la classe sont compilés

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Synthèse des résultats

La moyenne des atténuances à été réalisées et l'ensemble des essais à parmi de calculer un écart-type.

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Synthèse des résultats

A l'aide de l'outil informatique, il est possible de déterminer le coefficient directeur de la courbe et donc : - la vitesse spécifique de croissance (µexpo) - le temps de génération (G)

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SECTION III.

Dosage du glucose

Étapes à suivre

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• Étape 1: prélever 1mL du milieu LB glucosé à 2g/L et déverser dans un microtube.
• Étape 2: prélever 1mL du milieu LB glucosé ensemencé et déverser dans un microtube. Il s'agit de notre T0
• Étape 3: prélever 1 mL du milieu LB glucosé ensemencé et déverser dans un microtube après 120min. Il s'agit de notre T120
• Étape 4: Centrifuger les microtubes pendant quelques minutes

Étapes à suivre

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• Étape 5: Réaliser la manipulation avec le tableau ci-dessous

• Étape 6: Faire les calculs de concentrations

Calcul de concentration de masse

Équation aux grandeurs

Équation aux unités

Équation aux valeurs numériques

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Résultats

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Conclusion

Comme nous pouvons le constater seulement 3 étudiants ont pu réaliser le dosage du glucose. Cette activité expérimentale était de taille conséquente et cela justifie que peu d'étudiant ont réussi à faire ce dosage. Nous pouvons remarquer que les concentrations ne sont pas toutes identiques et que les bactéries n'ont pas dégradé le glucose de la même façon. Cela s'explique par les conditions opératoires qui ont pu être différentes d'un étudiant à l'autre et que les compétences bactériennes étaient différentes aussi.

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