Tinción de verde malaquita

Tinción de bacterias esporuladas con verde malaquita.

Prácticas de Microbiología

Ismael Miralles Bernat

FUNDAMENTO

Algunos géneros bacterianos, como Clostridium o Bacillus, producen en su interior formas de resistencia(endosporas)

CUBIERTA

¡CONDICIONES EXTREMAS!

ESPORA

Se necesita calor para que el verde malaquita pueda actuar.

CALOR

VERDE MALAQUITA

CUBIERTA

ESPORA

SAFRANINA

ESPORAS VEGETATIVAS

PROCEDIMIENTO

Paso a paso:

1. Realizar un frotis (Bacillus). 2. Fijación de frotis. 3. Colocación de los portaobjetos en unas paralelas. 4. Cubrir la muestra con Verde malaquita. 5. Montar una antorcha con varilla de cristal y algodón empapado en OH 95º. 6. Calentar el portaobjetos durante 5 minutos. 7. Lavar con agua destilada. 8. Cubrir muestra con safranina (5'). 9. Lavar portaobjetos y dejar secar. 10. Observación al microscopio empleando aceite de inmersión.

Detalles a tener en cuenta:

Si al calentar se evapora el verde malaquita, echamos más.

Detalles a tener en cuenta:

Hay que tener un vaso de precipitado preparado al lado de cada pila para apagar las antorchas.

Detalles a tener en cuenta:

En el lavado de la muestra, no se deja caer el agua destilada directamente sobre la muestra.

RESULTADOS ESPERADOS

La posición y la morfología de la endospora en el interior de la bacteria permite diferenciar especies dentro de un mismo género.

Endospora en porción central (abombamiento)

Endospora esférica de localización terminal

Endospora cilíndrica no deformante

Tinción de esporas con verde malaquita (100x). Las flechas indican la presencia de esporas libres.

¡EMPEZAMOS!