NGS

Dal metodo Sanger al NGS

definizione del metodo

NEXT GENERATION

Con i termini Next Generation Sequencing o sequenziamento in parallelo si indicano una serie di tecnologie che permettono di sequenziare grandi genomi in un tempo ristretto. Il NGS utilizza un procedimento molto simile a quello del Sequenziamento Sanger, tuttavia grazie ad esso è possibile sequenziare più frammenti di DNA simultaneamente.

• Frammenti di DNA da sequenziare denaturati
• Primer, sequenza oligonucleotidica, complementare alla regione fiancheggiante al frammento di DNA da sequenziare;
• Adattatori, necessari per l’adesione dei frammenti al supporto
• DNA polimerasi
• dNTP, deossiribonucleotidi trifosfati
• ddNTP dideossiribonucleotide trifosfato

LE 4 FASI

DEL METODO NEXT GENERATION

Step 2

Step 4

Step 1

Step 3

sequencing

cluster generation

data analysis

semple preparation

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IL PROGRESSO

• permette di analizzare moltissime sequenze in parallelo
• riduce i tempi di analisi e i costi

tecnologia high-throughput

• richiede l’amplificazione iniziale delle sequenze di DNA
• porta alla perdita di informazioni “accessorie”

i limiti del NGS

metodi di terza generazione

• nanopore sequencing: permette di sequenziare milioni di nucleotidi, senza ricorrere all’amplificazione dei frammenti di DNA.